大腸癌組織癌細胞中P-選擇素的表達及其臨床病理意義

羅春英，黃炳臣，黃琴，陳家興，陸海善，韋葉生，王俊利，黃照權

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大腸癌組織癌細胞中P-選擇素的表達及其臨床病理意義

羅春英1，黃炳臣1，黃琴2，陳家興2，陸海善1，韋葉生3，王俊利3，黃照權1

目的探討P-選擇素蛋白在大腸癌組織癌細胞中的表達及其臨床病理意義。方法運用免疫組織化學法，采用P-選擇素抗體檢測116例大腸癌組織和57例癌旁正常組織P-選擇素的表達情況，比較和分析P-選擇素在大腸癌組織癌細胞和正常腸黏膜組織中的表達差異及其臨床病理意義。結果P-選擇素在大腸癌組織中的癌細胞、血管內皮細胞均有表達。腫瘤細胞P-選擇素陽性表達率（77.6%，90/116）明顯高于癌旁正常腸黏膜組織中腺上皮細胞P-選擇素的陽性表達率（17.5%，10/57），差異有統計學意義（χ2=56.49，P＜0.05）。然而，腫瘤細胞P-選擇素陽性表達率在不同腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移患者間比較差異無統計學意義（80.6%vs. 74.1%、79.0%vs. 74.3%、78.4%vs. 76.9%、82.7%vs. 73.4%，均P＞0.05）。結論大腸癌腫瘤組織中癌細胞表達P-選擇素是該腫瘤的重要特征。

結直腸腫瘤；P選擇素；免疫組織化學；大腸癌

近十年來，我國大腸癌的發病率和死亡率均呈逐年上升趨勢，嚴重威脅人類健康［1］。黏附分子受體P-選擇素存在于血管內皮細胞和血小板中，通過與其配體結合，介導粒細胞、單核細胞和腫瘤細胞與血管內皮細胞、血小板的黏附，在炎癥、血栓形成、腫瘤血道轉移中起重要作用。有文獻報道，結直腸癌患者術前血清中可溶性P-選擇素水平顯著高于健康體檢者，且術后3個月可溶性P-選擇素水平明顯下降，認為血清中P-選擇素水平可反映結直腸癌的浸潤和轉移的程度［2］。本研究從組織學層面，采用免疫組織化學法檢測116例大腸癌組織和57例癌旁正常腸黏膜組織中P-選擇素的表達情況，探討P-選擇素在大腸癌組織癌細胞中的表達情況及其對腫瘤細胞生長、浸潤和轉移的意義。

1材料與方法

1.1材料取右江民族醫學院附屬醫院2011年1月—2012 年1月間病理診斷為大腸癌的手術切除、經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋的病理標本116例和癌旁正常腸黏膜組織57例，所有患者術前均未接受放、化療或免疫治療。116例患者中男89例，女27例；年齡22～92歲，平均（56.7±4.9）歲； 60歲者58例，＜60歲者58例；腫瘤直徑＜5 cm者62例， 5 cm者54例；經病理醫師光學顯微鏡下觀察，高分化腺癌81例，中-低分化腺癌35例；腫瘤浸潤肌層者51例、浸潤至漿膜層者65例；淋巴結轉移52例，無淋巴結轉移64例。

1.2試劑及方法P-選擇素單克隆抗體購于R&D Systems公司，二抗、DAB購于北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化采用EnVision兩步法。主要操作步驟：（1）石蠟切片，脫蠟至水。（2）抗原修復。采用枸櫞酸緩沖液高壓抗原修復，高壓鍋噴氣2 min，放置冷卻至室溫。（3）3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化酶活性。（4）切片滴加非免疫牛血清室溫下10 min，以封閉非特異性抗原反應。（5）滴加25 mg/L的鼠抗人P-選擇素單克隆抗體，4℃下孵育過夜。然后用PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min。（6）每張切片滴加二抗多聚復合物，室溫下孵育15 min。PBS沖洗3次，每次3 min。（7）DAB顯色、蘇木素復染及中性樹脂封片。用已知陽性切片作為陽性對照，以0.1 mol/L PBS代替一抗作為陰性對照。1.3結果判斷P-選擇素陽性信號定位于細胞漿和（或）細胞膜，呈棕黃色顆粒。陽性細胞數＜10%為陰性病例；陽性細胞數 10%為陽性病例。

1.4統計學方法采用SPSS 17. 0統計學軟件進行分析，兩樣本間率的比較采用四格表資料的χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1 P-選擇素在大腸癌組織和癌旁正常腸黏膜組織的表達P-選擇素陽性信號定位于細胞漿和（或）胞膜，呈棕黃色顆粒，其在癌細胞、血管內皮細胞均有表達，見圖1。癌組織中癌細胞P-選擇素陽性表達率（77.6%，90/116）明顯高于癌旁正常腸黏膜腺上皮細胞的陽性表達率（17.5%，10/57），差異有統計學意義（χ2=56.49，P＜0.05）。

2.2大腸癌組織癌細胞中P-選擇素蛋白表達與患者臨床病理特征的關系大腸癌組織中癌細胞P-選擇素陽性表達率在不同性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移間差異均無統計學意義，見表1。

Fig. 1 Expression of P-selectin in colorectal cancer cells（EnVision，×200）圖1　大腸癌腫瘤細胞P-選擇素蛋白表達（EnVision兩步法，×200）

Tab.1 The relationship between P-selectin protein expression in colorectal cancer cells and clinical pathological features of patients表1　P-選擇素在大腸癌組織癌細胞中的表達情況及其與臨床病理特征的關系

3　討論

P-選擇素是一種表達于血小板和血管內皮細胞表面的細胞黏附分子受體，具有廣泛的生物學活性，在炎癥、血栓形成和腫瘤轉移中起重要作用［3-5］。P-選擇素有兩種變異型：一種為可溶性，在血中以單體形式存在；另一種為膜性，以寡聚狀態存在。正常情況下，內皮細胞未受刺激和未激活，P-選擇素不表達或低水平表達。

有文獻報道在結直腸癌患者血清中可溶性P-選擇素水平顯著高于健康體檢者［2］。血小板是正常人血漿中可溶性P-選擇素基礎水平的主要來源，而內皮細胞激活是疾病狀態下增高的可溶性P-選擇素的來源。本研究發現大腸癌組織中癌細胞高表達P-選擇素（77.6%），這可能成為腫瘤患者血清中P-選擇素水平升高的另一來源之一。

在腫瘤組織水平，以往文獻較少研究和討論P-選擇素在腫瘤細胞中的表達和意義。本研究結果顯示，P-選擇素在大腸癌組織中的癌細胞和血管內皮細胞上均有表達，并且P-選擇素在結直腸癌細胞的陽性表達率明顯高于正常腸黏膜腺上皮細胞，提示P-選擇素可能參與癌細胞的形成和生長。有研究推測，P-選擇素可能在癌細胞與血管內皮間存在著雙重介導作用，更有利于腫瘤的浸潤和轉移［6］。本研究分析顯示腫瘤組織中癌細胞P-選擇素的表達在不同分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移患者間差異無統計學意義。腫瘤組織中癌細胞高表達P-選擇素的臨床和病理意義值得進一步探討。有關P-選擇素基因敲除小鼠的實驗研究發現，P-選擇素缺失會抑制腫瘤的生長和轉移［7-9］；近年有研究認為，P-選擇素基因多態性是惡性腫瘤患者發展到惡病質的重要調節因素［10］；P-選擇素可吸引調節性T細胞浸潤到腫瘤微環境，從而導致大鼠乳腺癌腫瘤細胞的生長和轉移［11］。關于大腸癌組織中癌細胞表達的P-選擇素對腫瘤形成、生長和轉移的影響需要進一步的實驗研究和探討。

綜上所述，P-選擇素在大腸癌組織癌細胞中有較明顯的高表達，該特征對腫瘤生物學行為和機體的影響需要進一步的實驗研究和探討，以期為預測大腸癌的生物學行為和大腸癌的防治提供新思路和方法。

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（2015-08-18收稿2015-10-26修回） （本文編輯李國琪）

Expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells

LUO Chunying1，HUANG Bingchen1，HUANG Qin2，CHEN Jiaxing2，LU Haishan1，WEI Yesheng3，WANG Junli3，HUANG Zhaoquan1
1 Department of Pathology，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities，Guangxi 533000，China；2 Clinical Medical Undergraduate Course Grade 2011，Youjiang Medical College for Nationalitie；3 Department of Clinical Laboratory，The Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities Corresponding Author E-mail：huangzhq2012@163.com

Objective To investigate the expression and clinical significance of P-selectin in colorectal cancer cells. Methods The protein expression of P-selectin was detected by immunohistochemistry in colorectal cancer tissues（n=116）and corresponding non-tumor normal mucosa（n=57）. The differences of P-selectin expression in colorectal cancer tissues，corresponding non-tumor normal mucosa and the clinical pathological significance were compared and analysed in two groups. Results The expression of P-selectin protein was found not only in vascular endothelial cells but also in colorectal cancer cells. The positive rate of P-selectin expression was apparently higher in colorectal cancer cells（77.6%，90/116）than that in normal mucosa（17.5%，10/57，χ2=56.49，P＜0.05）. However，there were no significance in positive rates of P-selectin in colorectal cancer cells between tumors with different diameters，different degrees of differentiation，different depths of infiltration and with or without lymph node metastasis（80.6%vs. 74.1%，79.0%vs. 74.3%，78.4%vs. 76.9%，82.7%vs. 73.4%，P＞0.05）. Conclusion The high expression of P-seletin in colorectal cancer cells is an important characteristic of colorectal cancer.

colorectal neoplasms；P-selectin；immunohistochemistry；colorectal cancer

R735.3

A

10.11958/20150110

廣西自然科學基金項目（2011GXNSFA018194）；廣西醫學科學實驗中心開放基金專項項目（KFJJ2011-05）；自治區級大學生創新創業訓練計劃立項項目（201410599017）

1廣西百色，右江民族醫學院附屬醫院病理科（郵編533000）；2右江民族醫學院2011級臨床醫學本科；3右江民族醫學院附屬醫院檢驗科

羅春英（1977），女，副教授，碩士，主要從事腫瘤臨床病理研究

E-mail：huangzhq2012@163.com