中藥單體抗肝纖維化實驗研究概況

楊增艷

【摘 要】 肝纖維化是指肝細胞發生壞死或炎癥刺激時，由于肝臟中細胞外基質的增生與降解失去平衡，導致肝臟內纖維結締組織異常沉積的病理過程。對于肝纖維化的治療，中醫藥臨床療效較好。隨著相關研究的不斷深入，應用分子生物學技術，針對肝纖維化作用機理的研究也不斷增加。筆者從細胞學基礎研究、細胞外基質研究、細胞因子、生化指標方面對中藥單體抗肝纖維化作用的實驗研究進展予以綜述。

【關鍵詞】 肝纖維化；中藥；單體；實驗研究

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）11-0026-02

肝纖維化（hepatic fibrosis）是因乙肝、丙肝等肝炎病毒的持續感染或其他化學物質、血吸蟲等因素引起的肝臟纖維組織彌漫性增生，是慢性肝炎向肝硬化發展的必經階段。隨著對肝纖維化研究的不斷深入，國內外學者認為，肝纖維化的形成與肝臟的實質細胞、非實質細胞及炎癥細胞等密切相關。由于多種致病因子的作用激活了肝星狀細胞（HSC）使之轉化成肌成纖維細胞，同時大量合成膠原等細胞外基質（ECM），從而造成ECM過度沉積，最終導致肝纖維化的發生。

中醫藥治療肝纖維化在臨床取得了確切的療效，引起國內外學者越來越多的關注。文獻資料表明，抗肝纖維化研究較多的單味中藥有三七[1]、丹參、丹皮、赤芍、當歸、土鱉、桃仁、葉下珠、溪黃草、黃芪、排錢草、黃根等；中藥復方有復肝寧、甲乙煎、揉肝抑纖飲、肝心寧等。上述研究，部分已在藥效學研究的基礎上，對其抗肝纖維化活性部位成份及其作用機制進行研究，但對中藥單體或從中藥中提取出的有效成分的研究不多。近年來，應用分子生物學技術來研究抗肝纖維化的作用機制較多，集中在細胞學基礎研究、細胞外基質研究、細胞因子研究三個方面[2]，而對與肝纖維化相關的血液生化指標及肝組織病理變化的觀測也是研究的熱點。本文擬圍繞以上四個方面的研究，就中藥單體抗肝纖維化實驗研究作一綜述。

1 細胞學基礎的研究

肝星狀細胞在肝纖維化發展變化過程中發揮著重要的作用，活化后的肝星狀細胞不僅合成膠原能力增強，而且也是基質金屬蛋白酶（MMPs）和組織抑制因子（TMPs）的主要來源。TMPs是抑制MMPs的一組多功能因子。在肝纖維化動物模型中，TMP-1表達水平增加而MMP表達會相應減少，當兩者平衡失調，纖維型膠原將發生沉積，導致肝纖維化程度加重。

趙東強等[3]在體外培養HSC的基礎上，采用MTT法、透射電鏡、流式細胞術及Tunel技術進行觀測，發現丹參單體IH764-3具有抑制HSC增殖與促進HSC凋亡的作用。

熊果酸是一種廣泛存在于多種藥用植物的中藥單體，申氏等[4]通過體外誘導活化型HSC-T6細胞，發現熊果酸抑制HSC-T6增殖，其誘導HSC-T6細胞凋亡可能與降低Bcl2/Bax比值，激活caspase3蛋白有關。

蘭天等[5]采用轉化生長因子-β1（TGF-β1）刺激人肝星狀細胞株（LX-2）誘導肝纖維化細胞模型，通過虎杖苷進行干預，利用Western blot法檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）的表達。發現虎杖苷能顯著抑制TGF-β1誘導的LX-2細胞α-SMA的表達。

劉麗等[6]應用體外細胞培養技術，觀察丹參單體H764-3對鼠肝星狀細胞基質金屬蛋白酶及其組織抑制因子表達的影響，發現丹參單體H764-3干預MMP-13mRNA的表達強度明顯上調，同時TMP-1mRNA表達受到抑制。

川芎嗪是從傘形科植物川芎的根莖提取出來的有效成分，別名四甲基吡嗪。川芎嗪抑制HSC的增殖，減少Collagen-I 的合成從而具有抗肝纖維化作用[7]。

2 細胞外基質的研究

在正常狀態下，肝內細胞外基質的各成分按一定的比例合成和分解，處于動態平衡的過程。肝纖維化發生后，這種平衡被打破，細胞外基質的合成大于降解，便會在肝內大量沉積?？梢哉f細胞外基質來源于其產生細胞，而大量沉積又對細胞產生重要的影響，其作用的過程既復雜又相互影響。

武氏[8]等通過CCL4復制大鼠肝纖維化模型，發現三七皂苷單體Rg1、Rb1除可減少狄氏間隙內的膠原纖維及貯脂細胞增生外，還能明顯抑制血清ALT活性及HA、PCⅢ水平，具有抗肝纖維化的作用。

段氏等[9]四氯化碳造模的同時給予三七總皂苷單體Rbl，檢測肝功能、血清Ⅲ型前膠原、透明質酸、層粘蛋白等指標的變化，并觀察肝纖維病理變化。發現三七總皂苷能改善肝纖維化大鼠的肝功能，降低血清 PCⅢ、 HA、 LN含量，明顯減輕肝組織膠原的沉積，改善肝纖維化程度；而人參皂苷 Rbl不能改善肝纖維化程度。

3 細胞因子的研究

轉化生長因子β1（TGF-β1）具有促進間質細胞分化和增殖，增加細胞外間質的沉積、抑制其降解的作用，被認為是肝纖維化形成過程中的一個重要的調控因子。肝臟在正常狀況下TGF-β1的表達較少，而損傷后其表達會顯著增加。

丹酚酸B是從丹參中提取出的水溶性活性成分，丹酚酸可抑制由轉化生長因子刺激誘導HSC的增殖和活化[10]，此外，丹酚酸還可下調TNF-α水平，減輕肝組織炎癥程度，保護肝臟細胞不受破壞[11]。

姜黃素是一種黃色的酸性酚類物質，可從姜科姜黃屬植物姜黃中提取。姜黃素能夠作用于瘦素，從而抑制血小板衍化生長因子（PDGF）、血管生長因子（VEGF）等因子的表達，并對活化的HSC具有抑制作用[12]。其可通過抑制NF-κB依賴性TNF-α、單核細胞趨化蛋白-1、COX-2 等基因表達，阻止炎癥因子誘導的肝臟炎癥性損傷，從而阻止肝纖維化的發生與發展[13]。

芍藥苷是主要從毛莨科植物芍藥中提取出的活性成分，具有抗炎和免疫調節作用。從芍藥苷的化學結構分析，因其分子中含多個酚羥基，可清除自由基活性，抗氧化作用使其可促進肝細胞再生從而實現抗肝纖維化作用[14]。聞氏[15]采用放免法、RT-PCR法、Western-blotting法和免疫組化法分別觀測血清及肝組織中TNF-α轉錄和表達情況，結果發現芍藥苷可顯著降低血清及mRNA水平的TNF-α表達；而在Western-blotting法和免疫組化法中，僅在Ⅰ組和Ⅲ組，芍藥苷明顯降低TNF-α的含量。

4 其他生化指標研究

慢性肝病發生病變后，血清ALT、AST、HA、LN及肝組織中MDA、SOD等指標與肝病的嚴重程度呈現相關性。隨著病情的加重，此類肝纖維化指標亦隨著發生變化。通過觀測這些指標的改變情況，可以了解受試物的抗肝纖維化作用。杜仲多糖能抑制血清HA、LN水平的升高，降低肝纖維織中MDA水平和SOD、GSH-Px活性，提示杜仲多糖能提高肝組織的抗氧化酶活性，抑制自由基產生，緩解肝臟損傷，從而達到抗肝纖維化作用[16]。

同為多糖類成分，朱氏[17]通過觀察狗肝菜多糖對二甲基亞硝胺誘導的大鼠肝纖維化作用，發現狗肝菜多糖也可以降低血清中ALT、AST、TBIL等水平，其抗肝纖維化作用可能與保肝降酶有關。

苦參堿是從中藥苦豆子或苦參中提取出來的一種生物堿，楊文卓等[18]通過半乳糖胺誘導方式復制肝纖維化模型，觀察氧化苦參堿干預前后肝指數、血及肝組織生化、羥脯氨酸含量、TGβmRNA表達水平、電鏡及病理組織學改變，結果提示，氧化苦參堿可降低大鼠ALT、AST、TGFβ1水平，降低肝組織羥脯氨酸含量；提高肝組織內SOD、GST-PX水平，給藥各組desmin及α-SMA水平的明顯低于模型組。而宋健等[19]采用CCL4制備肝纖維化模型，發現苦參素可顯著改善肝功能，降低PC-Ⅲ、LN、HA水平，組織學檢查也顯示具有抗肝纖維化作用。

無論在肝星狀細胞激活、凋亡或者細胞外基質大量合成與沉積過程中，均與黏附分子密切相關。而E-鈣粘附素作為黏附分子中的重要一員，在不同階段肝纖維化大鼠肝組織均有表達，且隨著纖維化程度的加重而表達增強，在肝纖維化發展變化中的作用越來越受到關注。萬榮等[20]通過研究E-鈣粘附素在不同肝纖維化階段的表達情況以及在抗肝纖維化中藥單體白黎蘆醇干預下表達的變化發現，白黎蘆醇可以明顯改善大鼠肝纖維化程度，并減少E-鈣粘附素 mRNA水平。

?；撬崾菑闹兴幣｜S中提取出來的有效成分，對細胞具有保護作用。?；撬釤o論是對由牛血清白蛋白靜脈注射復制的大鼠肝纖維化模型[21]，還是對由CCL4誘導的肝纖維化模型[22]，均可改善大鼠肝組織中的病理變化，提示其具有抗肝纖維化作用。

5 結語

中藥防治肝纖維化具有獨特優勢，針對肝纖維化發生的多個環節進行抗肝纖維化研究取得很大的進展，中藥單體在抗肝纖維化作用機制研究方面也呈現出多方向、多層次展開的局面。就目前研究現狀來看，多集中在細胞學、細胞外基質及細胞因子的研究，而對肝的再生及調節方面研究較少。肝細胞是高度分化而較少分裂的一類細胞，但仍保留著增殖的功能[2]。當發生肝纖維化時，占絕對多數的肝實質細胞并不能健康有序地增殖，而是被非實質細胞代償性增生所替代。所以，找到科學有效的措施和手段讓肝實質細胞能健康有序地增殖應該成為中藥單體抗肝纖維化實驗研究的重點之一，也應得到更多的關注和重視。

目前，對于肝纖維化的機制研究已經從原來的病理組織學研究發展到細胞學、細胞因子及其分子水平的研究，研究對象也從中藥提取物、有效部位發展到有效成分甚至單體。研究不斷深入的同時，不能忽視中醫整體辨證論治理論的指導，否則，中藥單體抗肝纖維化的實驗研究就將成為中藥的去中藥化研究。

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（收稿日期：2016.04.12）