廣州市部分區域貓泛白細胞減少癥流行現狀調查

溫肖會，邱 杰，呂殿紅，翟少倫，魏文康

(廣東省農業科學院動物衛生研究所，廣東省獸醫公共衛生公共實驗室，廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東廣州 510640)

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廣州市部分區域貓泛白細胞減少癥流行現狀調查

溫肖會，邱 杰，呂殿紅，翟少倫，魏文康*

(廣東省農業科學院動物衛生研究所，廣東省獸醫公共衛生公共實驗室，廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東廣州 510640)

[目的] 了解貓泛白細胞減少癥病毒在廣州家貓和流浪貓中的流行情況，分析FPV威脅廣州家貓和流浪貓的潛在風險。[方法] 采用貓泛白細胞減少癥免疫膠體金快速檢測試紙條和PCR檢測方法對廣州5家動物醫院采集的3 004份貓樣品進行檢測與分析。[結果] 貓泛白細胞減少癥免疫膠體金快速檢測試紙條檢出10份疑似貓泛白細胞減少癥陽性樣品，采用貓泛白細胞減少癥PCR檢測方法檢出13份貓泛白細胞減少癥陽性樣品。13份陽性樣品來源于96份具有臨床癥狀且未免疫樣品，49份家貓樣品中有6份呈陽性，47份流浪貓樣品中有7份呈陽性，陽性率分別為12.2%(6/49)和14.9%(7/47)，發病季節以9～10月多發，發病年齡集中在0～6月齡。[結論]與外界接觸和未免疫疫苗可能是導致貓感染FPV的重要原因。因此，家貓加強疫苗接種，減少與未知免疫背景的貓只接觸，減少家貓感染FPV的潛在風險。

貓泛白細胞減少癥；廣州市；PCR；流行現狀

貓泛白細胞減少癥(Felinepanleukopenia，FP)又稱貓傳染性腸炎(Felineinfectiousenteritis)或貓瘟熱(Felinedistemper)，是由貓細小病毒引起的一種高度接觸性急性傳染病，以突發雙相型高熱、嘔吐、腹瀉、脫水、明顯的白細胞減少及出血性腸炎為特征，是貓最重要的傳染病[1]。貓泛白細胞減少癥病毒(Felinepanleukopeniavirus,FPV)在自然條件下可以感染貓，也可以感染狐貍、豹、獅子和浣熊等珍稀野生動物，給家貓、野貓和野生動物保護造成巨大的威脅[2]。貓泛白細胞減少癥病毒傳播性強，既可通過糞便、嘔吐物、鼻涕、唾液、尿液排出病毒污染食具、籠子、墊物和周圍環境，又可以通過跳蚤和吸血昆蟲等媒介傳播，妊娠母貓可垂直傳播給胎兒。FPV致病性極強，會導致妊娠母貓胎兒畸形甚至流產，死亡率高且無任何前驅癥狀[1]。我國部分省、市曾發生疑似貓泛白細胞減少癥的疾病，國內外學者已從患病的貓中分離到多株毒株，并進行了深入研究[3-7]。目前，關于廣州家貓和流浪貓貓泛白細胞減少癥流行情況的報道較少。筆者采用貓瘟熱免疫膠體金快速檢測試紙條和PCR檢測方法對廣州5家動物醫院采集的樣品進行檢測，進一步了解該病毒在廣州家貓和流浪貓中的流行情況和潛在危害風險，旨在為廣州家貓和流浪貓貓泛白細胞減少癥的綜合防控提供理論基礎和參考依據。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1調查對象。2013年5月至2014年4月在廣州市天河區、越秀區、荔灣區、白云區、海珠區等5家連鎖動物醫院收治的門診病例中采集3 004份貓樣品，包括泄殖腔棉拭子、糞便、全血、病死貓的腸道等樣品。其中，2 600份貓樣品來源于家貓，404份來源于流浪貓，具有發燒、嘔吐、拉稀等臨床癥狀的樣品96份。同時，對3 004份貓樣品的年齡、免疫狀況和采樣時間等進行了記錄，樣品具體信息見表1～3。

1.1.2主要試劑和工具酶。FPV膠體金快速檢測試紙條(批號G140910301)購自上?？祆`生物科技有限公司；TaqDNA聚合酶、dNTP、DL2000Marker等均購自大連寶生物工程有限公司；病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒、2×TaqPCRMasterMix，均購自北京天根生化科技有限公司。

1.1.3主要儀器。S1000 梯度PCR儀，為美國伯樂公司產品；1600凝膠成像系統和EPS-300電泳儀，均為上海天能科技有限公司產品；DU730核酸分析儀，為美國貝克曼公司產品；AC204電子天平，為瑞士梅特勒-托力多儀器有限公司產品；DK-8D三孔電熱恒溫水槽，為上海齊欣科學儀器有限公司產品；移液器，購自德國Eppendorf公司；PIC017離心機，為德國賀利氏公司產品。

表1　廣州市各區樣品采集情況

表2　不同月份采集的樣品數量

表3　不同年齡的樣品數量

1.2方法

1.2.1FPV免疫膠體金快速檢測試紙條檢測。運用FPV膠體金快速檢測試紙條對3 004份貓樣品進行初步篩查。具體篩查方法如下：打開FPV試紙板的包裝，取出放于平坦的桌面上，用滴管吸取少量混勻的病料反應緩沖液，向試紙板的樣品孔中緩慢滴入3～4滴，5～10min后判斷結果。根據檢測線和對照線的結果判斷結果。陽性：當檢測線(T)位置與對照線(C)的位置同時出現紅色線時，表示已經感染FPV。陰性：當對照線(C)的位置出現紅色線，而檢測線(T)位置未出現紅線，表示樣品無FPV。當對照線(C)的位置不出現紅色線，無論檢測線(T)位置是否出現紅線，表示樣品無效。

1.2.2FPV的PCR檢測。運用已建立的FPV的PCR快速檢測方法對3 004份貓樣品進行了檢測[8]。PCR擴增體系如下：在PCR反應管中分別加入滅菌ddH2O7μL、2×TaqPCRMasterMix10μL、上下游引物(20pmol/μL)各0.5μL、模板 2μL，共20μLPCR擴增體系。PCR反應條件如下：95 ℃預變性 5min；95 ℃ 變性30s，50 ℃延伸30s，72 ℃延伸30s，共30個循環；最后 72 ℃延伸 7min，4 ℃下保存。

2　結果與分析

2.1貓樣品FPV金標檢測試紙條和PCR檢測結果從5家動物醫院共檢測出10份疑似FPV陽性樣品，使用建立的FPVPCR檢測方法不僅從10份疑似FPV陽性樣品中檢測出FPV核酸陽性樣品，而且從2 994份FPV金標檢測試紙條檢測陰性的樣品中檢測出3份FPV核酸陽性樣品，經測序分析13份FPVPCR檢測陽性樣品均為FPV(圖1)。結果表明，FPV的PCR檢測方法不僅準確，而且更為靈敏。

2.2樣品的來源、采集時間和年齡對FPV流行的影響

2.2.1陽性樣品的來源分析。13份FPV陽性樣品在地區分布上，以海珠區和越秀區FPV陽性數量最多，分別為5份；其次，白云區2份陽性樣品，荔灣區1份陽性樣品，天河區未檢測到FPV陽性樣品。13份FPV陽性樣品均來源于96份具有臨床癥狀未免疫樣品，49份家貓樣品中有6份陽性樣品，47份流浪貓樣品中有7份陽性樣品，陽性率分別為12.2%(6/49)和14.9%(7/47)從1 790份免疫過貓四聯疫苗的樣品中沒有檢出FPV，2 908份無臨床癥狀樣品中沒有檢出FPV。結果表明，無臨床癥狀的貓樣品沒有攜帶FPV；當前使用的貓瘟熱疫苗具有保護貓避免感染FPV的作用；13份FPV陽性樣品，無論是流浪貓還是放養的家貓，共同點是曾與外界接觸。因此，與外界接觸和未免疫貓四聯疫苗可能是導致貓感染FPV的重要原因。此外，各區域的發病率有明顯差異，可能是由于每個動物醫院提供的樣品數量差異較大所致。

注：M.DNA Marker DL 2000；1～16分別為1-16號樣品；17.陰性對照；18.陽性對照。Note: M.DNA Marker DL 2000; 1-16.swimming lanes of 1-16 samples. 17.Negative control; 18.Positive control. 圖1　被檢樣品的電泳圖譜Fig. 1　The electrophoretogram of test samples

2.2.2陽性樣品的采集時間分析。13份FPV陽性樣品中以9月和10月樣品數量居多，分別為3份，占陽性樣品數的46.0%(6/13)，11月和1月各有2份陽性樣品，8月、12月、2月各有1份樣品，其他月份未檢測到FPV陽性樣品。這表明FPV的感染及發病與季節有一定的關系，秋冬季是廣州市FPV感染的多發季節。

2.2.3陽性樣品的年齡分析。13份FPV陽性樣品中，以0～3月和3～6月齡陽性樣品數量居多，分別為6份和4份，占陽性樣品數的76.9%(10/13)；6～12月齡樣品中有2份FPV陽性樣品，1～3歲樣品中有1份FPV陽性樣品，4歲以上樣品未檢測到FPV。這表明廣州市1歲以下的貓特別是6月齡以下的幼貓最容易感染FPV。

3　結論與討論

筆者從3 004份樣品中檢測出13份FPV陽性樣品，其中6月齡以下的貓樣品10份，占陽性樣品數的76.9%(10/13)，6～12月齡樣品中有2份FPV陽性樣品，1～3歲樣品中有1份FPV陽性樣品，4歲以上樣品未檢測到FPV。這與高得儀[9]和亢文華等[10]報道的1歲以下的幼貓發病率較高，發病率隨著年齡的增長有所降低的結果相一致。此次調查的發病率很低，為0.43%(13/3004)，可能有以下原因：①最近10年，廣州的小動物診療行業發展迅速，僅廣州市內的動物醫院就超過300家，動物醫院醫生也注重加強寵物疫病免疫預防為主的宣傳，大部分的寵物在幼齡期就已注射疫苗，提高了自身的免疫力，使幼貓得到了很好的免疫保護。②廣州高層建筑居多，家養貓一般都在自家的室內活動，流動性不大，減少了與帶毒的病貓或FPV污染的環境接觸，切斷了FPV傳播的途徑。與外界接觸、未免疫FPV疫苗是導致貓感染FPV的重要原因。因此，應該加強免疫接種，提高免疫力，盡量減少與帶毒病貓或FPV污染的環境接觸，是FPV綜合防控的重要措施。

貓泛白細胞減少癥通常發生于秋冬季，尤其母貓繁育季節多發，呈散發或地方流行。長途運輸、飼養條件劇變以及來源不同和不明的貓混合飼養，也會導致該病的急性暴發[11-12]。此次調查結果表明13份FPV陽性樣品中以9月和10月FPV陽性數量居多，占陽性樣品數的46.0%，11月、1月各有2份陽性樣品，8月、12月、1月各有1份樣品，其他月份均未檢測到FPV陽性樣品。究其原因，可能是因為天氣轉涼，病毒較易繁殖生長，同時貓尤其是幼貓更易因為天氣變涼而發生應激，從而導致免疫力降低，使病毒容易侵入易感動物體內，導致感染FPV的貓數量上升。此外，貓一般是在春秋季發情，因為交配發生交叉感染，或者幼貓絕對數上升，客觀上也是導致秋季出現幼貓病例增多的原因。

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EpidemiologicalSurveyofFelinePanleukopeniaVirusinPartialRegionofGuangzhouCity

WENXiao-hui,QIUJie,LUDian-hong,WEIWen-kang*etal

(GuangdongKeyLaboratoryofAnimalDiseases,GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryPublicHealth,InstituteofAnimalHealth,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou,Guangdong510640)

[Objective]TounderstandtheprevalenceoffelinepanleukopeniavirusandanalyzethepotentialriskoffelinepanleukopeniavirusinGuangzhoudomesticandwildcats. [Method] 3004catsamplesof5animalhospitalsweredetectedandanalyzedbytwomethodsofFPVimmunecolloidalgoldteststripandPCR. [Result] 10positivesamplesweredetectedbythemethodofimmunecolloidalgoldteststripfrom3004catsamples,but13positivesamplesweredetectedbythemethodofPCRfrom3004catsamples.13positivesampleswerefrom96unimmunizedsampleswithclinicalsymptomsincluding6positivesamplesfrom49domesticcatsand7positivesamplesfrom47wildcats.Thepositiveratesrespectivelywere12.2% (6/49)and14.9% (7/47).Themorbidityagesandseasonsofthesesampleswereconcentratedin0-6monthsoldand9-10monthsold.[Conclusion]TheimportantreasonsofcatsinfectedwithFPVmaybecontactwiththeoutsideworldandnovaccination.Therefore,therearetwomeasurestoreducethepotentialriskofdomesticcatsinfectedwithFPVincludingvaccinationandreducecontactwithunknownimmunebackgroundcats.

Felinepanleukopeniavirus;GuangzhouCity;PCR;Epidemicsituation

廣東省科學技術廳項目(2015A040404034)；廣東省科學技術廳項目(2013B050800022)；廣東省科學技術廳項目(2013B040300009)；廣東省科學技術廳項目(2014B040404061)；廣東省科學技術廳項目(2012B090600048)；科技部星火計劃項目(2015GA780049)。作者簡介溫肖會(1982- )，女，河南安陽人，助理研究員，碩士，從事動物傳染病分子生物學研究。*通訊作者，研究員，博士，碩士生導師，從事動物疫病診斷和防控。

2016-04-30

S855.3

A

0517-6611(2016)17-120-03