亞硒酸鈉小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗研究

李元新，劉來利，王必成，張鵬岳（甘肅省畜牧獸醫研究所，甘肅平涼744000）

亞硒酸鈉小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗研究

李元新，劉來利，王必成，張鵬岳
（甘肅省畜牧獸醫研究所，甘肅平涼744000）

為評價亞硒酸鈉的致突變性，進行了小鼠骨髓嗜多染紅細胞（PCE）微杭試驗。結果表明：當受試物終濃度為2mg／kg，1mg／kg劑量組PCE微核率與陰性對照組比較有極顯著性差異（p＜0.01），結果為陽性；0.5mg／kg劑量組PCE微核率與陰性對照組比較，差異均無統計學意義（p＞0.05），為陰性結果。結論：亞硒酸鈉具有一定的致突變性。

亞硒酸鈉；PCE；微核

硒是人體和動物所必需的的微量元素?？捎糜诎┌Y的化學預防，并且具有抗氧化和抗突變的作用，但較高濃度的硒亦有一定毒性。目前硒的遺傳毒性報道較少。為了探討亞硒酸鈉的安全性，通過亞硒酸鈉小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗研究，對其致突變性進行評價。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物及其對照品 亞硒酸鈉，批號：940612，試驗時配100g／mL、50g／mL、25g／mL亞硒酸鈉藥液，0.22μm濾膜濾過除菌，臨用現配。復方環磷酰胺片（天津金世制藥有限公司，批號：20100901）試驗時配制2mg／mL（以環磷酰胺計）藥液。

1.1.2 實驗動物 選用SPF級NIH小鼠50只，體重25～30g，雌雄各半（由成都達碩生物科技有限公司生產，動物生產許可證號：SCXK（川）2008－24）。1.1.3 主要試劑 新生牛血清（批號：120510，成都哈里生物工程有限公司）。姬母薩染料，Sigma生產，其他試劑均為國產分析純。

1.1.4 儀器 ACS－0.6T電子單重秤（中山市金利電子衡器公司）；XSZ－7G雙目生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司），XK06－9J血球分類計數器（姜堰市新康醫療器械有限公司）；BS124S電子天平，（德國Sartorius股份有限公司出品）。

1.2 試驗方法

1.2.1 小鼠骨髓細胞微核試驗 根據《藥物遺傳毒性研究技術指導原則》規定，遺傳毒性試驗須進行哺乳動物體內微核試驗。選用體重為25～30g的NIH小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，5組分別為：陽性對照組、陰性對照組和3個劑量受試藥物試驗組。陽性藥物組按40.0mg／kg劑量腹腔注射環磷酰胺；試驗組灌胃給予受試藥物，劑量分別為2、1、0.5mg／kg，相當于LD的1／2，1／4和1／8，陰性對照組灌胃相同體積的純化水。多次給藥，每天1次，連續4d單次給藥，各組在末次給藥后24h后骨髓采樣，取胸骨用止血鉗擠出骨髓液，滴在滴有一滴新生牛血清的載玻片上混勻，制片、鏡檢。具體操作詳見（GB15193.5－2003）。在油鏡下觀察2000個嗜多染紅細胞，計數其中含有微核的嗜多染紅細胞細胞數，計算嗜多染紅細胞微核率［微核的嗜多染紅細胞細胞比率＝（微核的嗜多染紅細胞細胞／2000）×1 000%］；計數觀察200個嗜多染紅細胞同時出現的正染紅細胞數，計算嗜多染紅細胞和總紅細胞的比例［嗜多染紅細胞比例＝嗜多染紅細胞／（嗜多染紅細胞＋正染紅細胞）］，并統計每組嗜多染紅細胞和總紅細胞的比例及微核的嗜多染紅細胞細胞比率平均值及標準差。

1.2.2 數據統計處理方法 微核細胞率和PCE／200比值數據為計量資料，采用Excel軟件計算均數和標準差，判斷數據是否呈正態分布，正態分布則采用Excel中F檢驗進行方差齊性檢驗，然后選擇t檢驗進行統計；若呈非正態分布，則進行非參數檢驗。

1.2.3 結果判定 各劑量組微核細胞率與陰性對照組進行比較，若有差異并有劑量－反應關系可判定為陽性結果。

2 結果

2.1 試驗結果

表 亞硒酸鈉嚙齒動物骨髓微核試驗結果（±SD）

由上表中可以看出，在亞硒酸鈉嚙齒動物骨髓微核試驗中，小鼠給予2mg／kg，1mg／kg和0.5 mg／kg 3個受試劑量組誘導的微核發生率分別為（10.9‰），（5.6‰）和（2.3‰），其中2mg／kg，1mg／kg與陰性對照組比較有顯著差異性（P＜0.01）。陽性對照組的微核發生率為（20.1‰），與陰性對照組比較，有統計學意義（P＜0.01）。各受試劑量組和陽性對照組200個紅細胞中見到的嗜多染紅細胞（PCE）與陰性對照組比較，均無統計學意義（P＞0.05），復核人員隨機選取本次實驗中每組10%樣本進行重新閱片，其平均閱片誤差為12.52%。

2.2 結果分析

上表結果顯示2mg／kg，1mg／kg與陰性對照組比較有顯著差異性（P＜0.01），為陽性結果。0.5mg／kg與陰性對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），為陰性結果。表明在本試驗條件下，給予NIH小鼠亞硒酸鈉濃度為2mg／kg，1mg／kg時可誘發PCE微核率增高，亞硒酸鈉濃度為0.5 mg／kg時無誘導PCE微核率增高的能力。

3 討論

小鼠骨髓細胞微核試驗是傳統而經典的檢測染色體斷裂劑、紡錘體毒物及非整倍體誘導劑的體內致突變試驗，體內試驗具備的吸收、分布、代謝、排泄等與人體應用更具有相關性。微核的形成是細胞受遺傳毒物作用后的一種遺傳學終點，微核率的增高反映了染色體損傷的遺傳效應。目前微核試驗已被公認為檢測哺乳動物細胞遺傳物質損傷和化學物質毒性快速、敏感的常規方法之一。根據微核形成的原理，藥物誘發小鼠微核率的變化可以反映出所檢測藥物對小鼠的遺傳毒性。亞硒酸鈉2.0～0.5 mg／kg劑量小鼠灌胃給藥一次，給藥后24h處死，2 mg／kg，1mg／kg劑量具有誘發PCE微核率增高，導致染色體損傷的作用，提示在本實驗條件下具有致突變性，0.5mg／kg劑量沒有誘發PCE微核率增高和染色體損傷的作用。

［1］ 藥物遺傳毒性研究技術指導原則（第二稿）［S］.2006.

［2］ GB 15193.5－2003，骨髓細胞微核試驗［S］.

［3］ 袁伯俊，廖陽明，李波.《藥物毒理學實驗方法與技術》［M］.北京：化學工業出版社，2007：290－294.

［4］ 孫瑞元，鄭青山.數學藥理學新論［M＼］.北京：人民衛生出版社，2004：39－48.

［5］ 方治平，肖逸，宋曉紅，等.重組葡激酶的致突變試驗［J］.四川生理科學雜志，2000，22（1）：22－26.

［6］ 王欽茂，李莉，方華武，等.中藥致癌、致突變和生殖毒性研究研究概況［J］.安微中醫學院學報，2001，20（5）64－67.

Study on Micronucleus Test of Polychromatics Erythrccytes in Bone Marrow of Sodium Selenium

LI Yuan－xin，LIU Lai－li，WANG Bi－cheng，ZHANG Peng－yue
（Gansu Institute of Animal Science and Veterinary，Pingliang Sansu 744000 China）

The mutagenicity of sodium selenite was evaluated by the micronucleus test of polychromatics erythrccytes in bone marrow.The results showed that at the concentration of 2mg／kg，1μg／mL dosage，the rate of micronucleus of polychromatics erythrccytes in bone marrow in treatment group was very significant different than control group（P＜0.01），which was positive.PCE micronucleus rate at 0.5mg／kg was not significant（P＞0.05）compares with control group，which was negative.In conclusion，Sodium selenite has mutagenicity to some extent.

Sodium selenite；PCE；micronucleus

S 852.651

A

1004－6704（2016）03－0020－02

2015－09－17

甘肅省科技計劃資助項目，項目編號：

0805TCYL006

李元新（1971－），男，甘肅平涼人，獸醫碩士，副研究員，主要從事動物代謝病研究。E－mail：lyxlyx4033＠sina.com。