不育男性精子中的頂體酶活性及精液參數研究

成艷君，李雪梅，楊則寶，覃春容，楊宇霞，吳正中，周永紅，楊蔚深圳市婦幼保健院生殖醫學中心，廣東深圳518000

不育男性精子中的頂體酶活性及精液參數研究

成艷君，李雪梅，楊則寶，覃春容，楊宇霞，吳正中，周永紅，楊蔚
深圳市婦幼保健院生殖醫學中心，廣東深圳518000

目的研究不育男性精子中頂體酶活性與精液參數。方法選取我院收治的不育男性140例作為研究對象，再按照頂體酶參數是否正常劃分為兩組，觀察組1（n=68）為精液參數正常組，即精液量、液化時間、外觀、精子活力、外形以及數量等均無明顯異常，觀察組2（n=72）為精液參數異常組，即抗精抗體為陽性或上述檢查有不少于1項明顯異常，且存在生殖系統急慢性炎癥史；選取1年內正常生育男性70例作為研究對象，設為對照組。應用手淫法對所有男性精液予以收集，且應用改良Kennedy法檢測精子頂體酶活性，對比3組男性精子頂體酶活性。結果觀察組2（a+b）級精子活動率明顯低于其他兩組（P＜0.05）；對照組精子濃度明顯高于觀察組（P＜0.05）；對照組頂體酶活性明顯高于觀察組1與觀察組2（P＜0.05）。結論頂體酶活性低下密切關聯于男性不育，檢測不育男性精子中頂體酶活性臨床價值重大，可將精子質量全面反映出來，進而評價其功能狀態，有推廣價值。

不育男性；精液；頂體酶活性

當前育齡夫婦受到的最大困擾為男性不育，該問題具有全球性。據調查，育齡夫婦不孕不育癥發生率為10%～15%，其中一半為男性原因［1-3］。導致男性不育的因素較多，主要分為外部因素與內部因素，包括遺傳、分子突變、酒精、煙草、毒品以及環境等。當前有較多精液分析法，比如精子正常形態比例、精子計數等，但是無法全面了解男性生育能力。經研究得知，正常形態精子率與受精率顯著正相關，精子頂體酶在精子受孕過程中有重要參與作用，酶含量直接影響精子生育力［4-6］，因此其完整性可將精子頂體酶含量直接反映出來。若精子頂體酶不完整會導致酶漏出，對精子質量與卵子受精產生影響。然而臨床很少細致研究精子頂體酶活性與男性不育的關系，本文現選取140例患者與70例健康男性作為研究對象，報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取我院2014年1月～2015年1月收治的不育男性140例作為研究對象，再按照頂體酶參數是否正常劃分為兩組，觀察組1（n=68）為精液參數正常組，觀察組2 （n=72）為精液參數異常組。本組患者均有正常性功能，超過2年未采取避孕措施女方仍未妊娠，且女方開展諸項檢查均無異常。選取1年內正常生育男性70例作為研究對象，設為對照組，均已生產但育齡在2年以內或者妻子處于妊娠期，行精液常規分析結果正常。所有入選對象年齡為23～43歲，平均34.2±7.3歲。3組患者在一般資料上對比差異不明顯（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測方法

所有患者禁欲時間為3～7 d，而后應用手淫法對精液予以收集，在精液采集管中放置，稱重精液質量對精液體積予以推測，再在37℃實驗臺上放置，用多方位陶瓷加熱棒，處于溫度均衡，使其充分液化后開展檢測。開展精液常規分析，充分混勻后制備濕片對顯微鏡下精子外觀等予以觀察，將精液稀釋以檢測精子濃度。主要應用計算機輔助精子分析系統檢測精子活力，操作時需嚴格遵循說明書流程；應用改良Kennedy法對精子頂體酶活性進行檢測，采用722紫外可見分光光度計。1份精液標本需取樣2次開展分別檢測，精子計數分別為200個，于95%可信區間內取均值，若不在可信區間內則重新取樣重復計數2次。

1.3判定標準

依據WHO精液常規分析標準判定精液常規結果，正常值為精子濃度不低于20×106/mL，a級不低于25%或者a級與b級精子活動率之和不低于50%（精子活動率包括前向運動精子百分率和非前向運動精子百分率，前向運動精子為前向性a+b，非前向運動精子為非前向性b+c。對3組頂體酶活性水平差異予以比較分析。

1.4統計學方法

應用軟件SPSS20.0統計學處理上述數據，用均數±標準差表示計量資料，組間對比用t檢驗，對比以P＜0.05代表差異有統計學意義。

2　結果

3組頂體酶活性及精液常規分析結果對比，觀察組2精子活動率、頂體酶活性以及精子濃度均明顯低于對照組（P＜0.05），對照組精子濃度為（136.84±21.77）×106/mL，明顯高于觀察組（P＜0.05）；對照組頂體酶活性為92.64± 18.75 μIU/106，明顯高于觀察組1的28.79±3.05 μIU/106與16.47±2.47 μIU/106（P＜0.05）。觀察組1與觀察組2上述指標對比均明顯（P＜0.05）；觀察組1頂體酶活性與精子濃度明顯低于對照組（P＜0.05）。本組觀察組2（a+ b）級精子活動率為21.18%±3.95%，明顯低于其他兩組（P＜0.05，表1）。

表1　3組頂體酶活性及精液常規分析結果對比

3　討論

男性不育即夫妻婚后同居時間不低于2年沒有采取避孕措施，且女方也無異常受到男方因素影響女方未懷孕者［7］。有原發性與繼發性不孕兩種類型，前者為特發性不孕，即夫妻婚后從未懷孕；后者為女方流產或懷孕或者有過生育后不低于兩年在沒有采取任何避孕措施的前提下未使女方懷孕者。男性不育屬于復雜綜合征，有諸多因素會影響男性不育，比如分子突變或者遺傳因素，Y染色體缺失或微小，因子基因受睪丸決定、微衛星CAG多態性以及生精基因突變等［8-9］，且食品包裝、噪聲、研究、毒品、汽車尾氣、微生物感染以及輻射等均會影響男性不孕［10］。

經臨床研究后得知頂體酶密切關聯于男性不育。頂體為扁囊狀結構，在精子細胞核前方覆蓋，其組成包括3部分，分別為頂體內膜、外膜以及頂體腔。細胞膜與頂體外膜間有薄層細胞質存在，且存在多種關聯于受精的化學物質。頂體反應為精子獲能后從細胞卵丘、透明帶與放射冠穿透前或者穿透期間頂體產生的諸多變化，而后釋放頂體內容物，將卵細胞周便透明帶與放射冠溶解，繼而從卵細胞與透明帶中穿透融合后受精。細胞膜與頂體外膜融合后會產生囊狀小泡，突狀小泡消失后暴露頂體內膜。此間會暴露或者釋放各種頂體酶，并具備活性，將各自作用發揮出來后將卵子邊透明帶溶解，精子可靠近卵子繼而結合受精。男性不育密切關聯于頂體酶活性低下。精子頂體酶相連于頂體膜，屬于胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶，在頂體中合成與儲存時主要應用酶原形式，受精時其為關鍵酶，精子結合于卵子且產生頂體反應后釋放出頂體酶原，營造優良條件促進精卵結合。頂體酶活性較低時會導致卵細胞卵丘分解受到影響，且精子在穿透卵細胞透明帶時也有一定影響，最終誘發男性不育。因此在對精子生育能力予以判斷時頂體酶活性為重要指標，可對精液常規分子中只能對男性一般生育能力比如精子活動率、密度以及活力等予以判斷但無法對精子功能狀態進行判斷的缺陷予以彌補［11］。臨床檢測頂體酶活性可將精子質量更好反映出來，便于找出不育主要原因。

影響精子頂體酶活性的因素有很多，如禁欲時間，藥物、精液的保存方式及精液體外停留的時間［12-15］。本組觀察組2 a+b級精子活動率明顯低于其他兩組；對照組精子濃度明顯高于觀察組；對照組頂體酶活性明顯高于觀察組1。由此可知，精子頂體酶活性密切關聯于精子質量，且精子活動率與密度下降后頂體酶活性也會相應降低。

綜上所述，頂體酶活性低下密切關聯于男性不育，檢測不育男性精子中頂體酶活性臨床價值重大，可將精子質量全面反映出來，進而評價其功能狀態，有推廣價值。

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The acrosome enzyme activity and the semen parameters in infertile males

CHEN Yanjun，LI Xuemei，YANG Zebao，QIN Chunrong，YANG Yuxia，WU Zhengzhong，ZHOU Yonghong，YANG Wei Department of Reproductive Center，Shenzhen Maternal and Child Health Care Hospital，Shenzhen 518000，China

Objective To study sperm acrosome enzyme activity and sperm parameters in infertile men.Methods A total of 140 cases of infertile subjects were enrolled and divided into two observation groups by the parameter of acrosome enzyme. Semen parameters included shape and number of semen volume，liquefaction time，appearance，sperm motility.68 subjects with completely normal semen parameters were selected as observation group 1，while the other 72 subjects in observation group 2 has a history of reproductive system inflammation and at least one abnormal semen parameters，or showed an obvious exception of anti-sperm antibodies（AsAb）.Control group was set with 70 cases of normal fertile men.Sperm acrosome activity was analysed by improved Kennedy and compared between these three groups.Sperm samples were all collected by masturbation.Results Observation group 2 shows a significantly lower value of male sperm acrosome activity than the other two groups（P＜0.05）；Sperm concentration of the control group was（136.84±21.77）×106/mL，higher than the observation group（P＜0.05）；Acrosome enzyme activity in control group was 92.64±18.75 iIU/106/mL，significantly higher than the observation group 1（28.79±3.05 iIU/106/mL）and observation group2（16.47±2.47 iIU/106/mL）（P＜0.05）.Conclusion Reduction of acrosome activity is closely associated with male infertility，Detection of sperm acrosome activity in infertile men，which can fully reflected in the quality of sperm，evaluation of their functional status，is of major clinical value.

infertile males；semen；acrosome enzyme activity

2016-03-01

成艷君，E-mail:cyjun118@126.com