CD44V 6在大腸癌組織和外周血表達及其臨床意義

宋云駿， 姜林鶴， 季世強， 黃 微， 關亞男， 許再超， 楊金光

（河北省承德市中心醫院急診外科， 河北 承德 067000）

CD44V 6在大腸癌組織和外周血表達及其臨床意義

宋云駿， 姜林鶴， 季世強， 黃 微， 關亞男， 許再超， 楊金光

（河北省承德市中心醫院急診外科， 河北 承德 067000）

目的：檢測大腸癌組織中CD44V6的表達和外周血中CD44V6的水平，分析與大腸癌的臨床病理學特征和患者預后的關系。方法：收集57例大腸癌手術組織和外周血血清標本，分別應用免疫組織化學方法（SP）和酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測CD44V6的表達，分析其與大腸癌的臨床病理特征之間的關系以及與患者預后的相關性。結果：CD44V6在大腸癌組織中的表達（63.16%）明顯高于其在正常大腸黏膜中的表達水平，差異有統計學意義（10.00%，P=0.002）?；颊哐逯蠧D44V6為14. 62±3.344ng/m L，而正常對照組血清中為 3.22±1.65ng/m L，兩組差異有統計學意義。大腸癌中的CD44V6表達與腫瘤的浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移情況及臨床分期有關。通過Kaplan-Meier生存分析發現，CD44V6高表達的患者五年生存率低于低表達患者，兩組間差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：CD44V6在大腸癌組織和血清中高表達，并可能成為預測大腸癌浸潤轉移和預后的指標。

大腸癌； CD44V6； 免疫組化； ELLSA

本研究為CD44V64作為臨床判斷預測大腸癌轉移和預后指標提供有力證據；對臨床評價療效、評估病情和指導治療具有重要的參考意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取2011年1月至2012年12月間在承德市中心醫院腫瘤科入院的大腸癌患者57例，所有患者均為初診手術患者，術前未接受放、化療及免疫治療?；颊吣挲g36～70歲，中位年齡47歲；其中男性35例，女性22例。手術切除組織，4%多聚甲醛固定并進行石蠟包埋。同時收集距離癌組織15cm遠處的腸黏膜組織作為正常對照。根據第六版的惡性腫瘤TNM分類進行臨床分期，并由兩位病理科醫師進行準確的確診。其中結腸癌38例，直腸癌19例。按照浸潤深度分為兩組：浸潤至漿膜及漿膜外32例、未超過肌層25例；根據腫瘤分化程度分為：高分化腺癌11例，中分化腺癌34例，低分化腺癌12例。Duke's分期：A 期6例，B期18例，C期33例；按照是否有淋巴結轉移，分為兩組：淋巴結轉移陽性33例，淋巴結轉移陰性24例。同時在術前取患者空腹靜脈血2～3mL，待血液凝固后分離上清液，在-70℃下冰凍保存。另取10例正常人外周血作為正常對照。

1.2 免疫組織化學染色法：免疫組織化學染色（SP兩步法）熱修復抗原后采用兩步法檢測大腸癌和癌旁組織中CD44V6的表達。實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行操作。CD44V6單克隆抗體為北京中杉金橋生物科技有限公司產品，工作濃度均為1：100。染色判斷標準：按D.Horst等的標準。選擇5個具有代表性的高倍視野（10×40），以細胞膜或細胞質出現棕黃或棕褐色為陽性染色。不著色為陰性（-），著色為（+）。

1.3 酶聯免疫吸附實驗（ELISA）：CD44V6 ELLSA試劑盒購買北京金杉公司，實驗方法嚴格按照試劑盒說明書進行操作，檢測血清中CD44V6的含量。

1.4 統計學分析：采用SPSS13.00統計軟件包進行統計學處理，計量資料以均數±標準差（ˉx±s）表示，兩組數據間比較采用兩獨立樣本t檢驗；分類資料采用χ2檢驗及校正χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

圖1 免疫組織化學檢測大腸癌組織中CD44V6的表達（400×）

圖2 Kaplan-Meier生存分析CD44V6表達水平與大腸癌患者預后關系

2.1 CD44V6在大腸癌患者組織和血清中的表達：CD44V6陽性物質定位于細胞膜和（或）細胞質。大腸癌組織中CD44V6的陽性表達率為63.16%（36/57）；在正常癌旁組織中的陽性表達率為8.77%（5/57）。在大腸癌組織中的表達高于正常組織，差異有統計學意義（χ2=9.722、P=0.002）。大腸癌患者血清中CD44V6水平為14.62±3.344ng/mL，而正常對照組血清中CD44V6水平為3.22±1.65ng/mL，大腸癌組水平高于對照組，兩組差異有統計學意義（t=1.523，P=0. 001）。

2.2 CD44V6在大腸癌組織和血清中的表達與臨床病理特征的關系：不同年齡、不同性別及不同腫瘤大小的患者CD44V6在大腸癌組織中的表達差異均無統計學意義；而不同腫瘤浸潤深度、不同組織學分化程度、有無淋巴結轉移及不同臨床病理分期者CD44V6在大腸癌組織中的表達差異均有統計學意義，見表1。

表1 CD44V6在大腸癌組織和血清中的表達與臨床病理特征的關系

2.3 CD44V6在大腸癌患者組織中的表達與生存率的關系：在57例大腸癌患者中，5年后生存的患者34例，其中17例CD44V6表達陽性，陽性率為50.00%；死亡患者23例，其中19例CD44V6表達陽性，陽性率為82.61%。CD44V6陰性表達組平均生存時間為55.810 ±2.046，CD44V6陽性表達組平均生存時間為49.361± 2.136，兩組差異有統計學意義（t=5.543，P=0.019），見圖2。

3 討 論

大腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤中位居第3位。目前大腸癌的治療主要采用以手術為主結合放化療的綜合治療。但大腸癌的遠期生存率并不高，其中肝轉移是治療失敗的主要原因之一［1］。隨著對大腸癌病因、發病機制的深入研究，人們發現了眾多大腸癌早期診斷和預后有意義的腫瘤標志物，其中最廣泛的就是CD44V6。

CD44是一種廣泛分布的多功能、多結構的細胞表面跨膜糖蛋白［2］，屬于未分類的細胞粘附分子。近年來研究發現，CD44能促進腫瘤細胞與血管內皮細胞之間的黏附，并促進與基底膜的浸潤，同時影響細胞骨架蛋白的分布及構型，增加癌細胞的運動能力，進而促進腫瘤的轉移［3］。CD44V6是CD44的變異體，參與了腫瘤細胞的粘附，生長調控，逃逸，分化以及游動。CD44V6是一組跨膜糖蛋白，是細胞外基質ECM家族中一個重要成員的受體，主要在大腸癌中表達［4］。CD44V6參與了很多重要的細胞活動過程，如粘附，生長調控，逃逸，分化以及游動，也因此被認為既是一種腫瘤抑制因子又是一種生長侵襲促進因子。Wielenga等［5］通過免疫組織化學法檢測直腸癌組織中的CD44V6的表達情況，結果表明CD44V6能夠提示癌癥的遠處轉移，可以作為判斷大腸癌預后的重要指標。王道榮等研究也表明在發生遠處轉移的大腸癌中CD44V6的表達水平要明顯增高。

本研究采用免疫組化法檢測大腸癌及癌旁組織中CD44v6蛋白的表達情況，結果顯示，在57例大腸癌組織中CD44V6的表達率明顯高于其在癌旁組織中的表達。隨浸潤程度的加重，CD44V6蛋白的陽性表達率增加，差異有統計學意義（P=0.034）；在腫瘤細胞的不同分化程度間，CD44V6的表達差異有統計學意義（P =0.001）。在臨床分期上，Dukes C期病例組的陽性率高于Dukes A、B期病例組，差異有統計學意義（P=0. 000）。淋巴結轉移組的陽性表達率也高于淋巴結未轉移組（P=0.001）。以上結果提示CD44V6蛋白表達的大腸癌具有更強的侵襲力，易發生淋巴結轉移，在大腸癌的臨床病理進展和侵襲轉移過程中發揮重要的促進作用。

［1］ Bourguignon L Y，Wong G，Earle C，et al.Hyaluronan-CD44v3 interaction with Oct4-Sox2-Nanog promotesmiR-302 expression leading to self-renewal，clonal formation，and cisplatin resistance in cancer stem cells from head and neck squamous cell carcinoma［J］.Biol Chem，2012，287 （39）：32800～32824.

［2］ Nurwidya F，Murakami A，Takahashi F，et al.Molecular mechanisms contributing to resistance to tyrosine kinase-targeted therapy for non-small cell lung cancer［J］.Cancer Biol Med，2012，9（1）：18～22.

［3］ Heider K H，Kiefer K，Zenz T，et al.A novel Fc-engineered monoclonal antibody to CD37 with enhanced ADCC and high proapoptotic activity for treatment of B-cellmalignancies［J］.Blood，2011，118（15）：4159～4168.

［4］ 高艷薇.喉和下咽鱗癌中CD44V6的表達及意義［J］.中國醫藥導報，2009，6（1）：76～78.

［5］ Bendardaf R，Algars A，Elzagheid A，et al.Comparison of CD44 expression in primary tumors and metastases of colorectal cancer［J］.Oncol Rep，2006，16（4）：741～746.

Expression and Clinical Significance of CD44V6 in Colorectal Cancer Tissues and Peripheral Blood

SONG Yunjun， JIANG Linhe， JIShiqiang， et al

（The Central Hospital of Chengde，Hebei Chengde 067000，China）

【Abstract】Objective：To investigate the expression of CD44V6 in colorectal cancer tissue and eripheral blood，to analyze the relationship between clinical pathological features and prognosis of patientswith colorectal cancer.M ethods：Serum samples in peripheral blood and tissue of colorectal cancer from 57 patientswere collected.The expression of CD44V6 was detected by immunohistochemicalmethod（SP）and enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）.The relationship between the clinical pathological characteristics and the prognosis of patientswith colorectal cancerwere analyzed.Results：The expression of CD44V6 was obviously higher （63.16%）in colorectal cancer tissue than that in the adjacent tissue（10.00%，P=0.002）.The expression levels of CD44V6 in serum was 14.62±3.344ng/mL，while thatwas3.22±1.65ng/mL in normal control group. There was significant difference between the two groups.There were relationship between the expression of CD44V6 and tumor depth，the degree of differentiation，lymph nodes and pathological degree.Kaplan-Meier survival analysis showed that the 5-year survival rate in CD44V7 high expression group was significantly higher than that in low expression group（P＜0.05）.Conclusions：CD44V67 is highly expressed in colorectal cancer tissues and serum，and may be an indicator for predicting the invasion and metastasis of colorectal cancer.

Colorectal cancer； CD44V6； Immunohistochemistry； ELISA

1006-6233（2016）08-1238-04

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.08.003

河北省承德市科學技術研究與發展計劃項目，（編號：201601A016）