端粒結合蛋白PinX1在大腸癌中的表達及其臨床意義

遲濤　錢東　王銳　郭亞飛　袁中旭

端粒結合蛋白PinX1在大腸癌中的表達及其臨床意義

遲濤1錢東2王銳1郭亞飛1袁中旭1

目的：研究端粒結合蛋白PinX1在大腸癌組織中的表達及臨床意義。方法：收集共86例接受根治性手術的大腸癌病人術后標本，運用免疫組化的方法（IHC）檢測標本中PinX1的表達并分析PinX1的表達與病人臨床病理因素及預后的關系。結果：與正常結腸上皮相比，PinX1在大腸癌組織中呈低表達。生存分析發現PinX1的低表達預示著病人的不良預后，多因素分析揭示PinX1的表達是預測病人預后的獨立因素。結論：研究揭示PinX1是大腸癌病人預后的獨立預測因子，其可作為臨床大腸癌患者預后分析判斷依據之一。

大腸癌PinX1臨床預后

大腸癌的發病率占據歐美國家癌癥發病率的第2位，全世界每年大約有100萬新增病例，同時至少50萬人死亡［1～2］。在中國，大腸癌的發病率逐年上升，排在惡性腫瘤第4～6位。大腸癌從遺傳學上實質是基因相關病，癌基因的激活和（或）抑癌基因的失活與其發生發展密切相關。尋找更多更有效的可以預測病人預后及治療的基因靶標對于優化病人的治療方案及改善臨床治療效果十分必要。

1　資料與方法

1.1一般資料從天津市腫瘤醫院收集2005～2010年86例大腸癌病人及25例正常大腸組織石蠟標本（標本來源于結直腸良性腫瘤患者）。所有組織均為術后標本并經過病理學確診。所有納入研究的病人均具有完整的隨訪資料。病人的臨床病理特征見表1。

1.2方法

1.2.1免疫組化染色常規石蠟包埋組織，4μm厚連續切片后脫蠟，梯度酒精水化后進行抗原修復，自然冷卻至室溫。加3%雙氧水（H2O2）室溫孵育5～10min，PBS沖洗。滴加正常山羊血清封閉非特異性抗原后，加一抗，4℃孵育過夜，PBS沖洗。滴加二抗37℃反應15min，PBS沖洗。DAB顯色。蘇木素輕度復染，脫水、透明、封片。免疫組織化學陽性結果判斷標準：免疫組化結果以陽性染色腫瘤細胞占所有腫瘤細胞總數的百分比進行打分，將PinX1陽性染色細胞比率＞50%定為高表達組，而＜50%定為低表達組。病理結果由兩位病理醫生在不知病例資料的情況下，獨立進行閱片并評分，當出現分歧時，由兩位專家將不同的判斷結果進行重新評估，直到兩位專家得到一致的意見。

1.2.2統計學分析使用SPSS17.0統計學軟件進行數據分析。采用Kaplan-Meier法計算不同分組病人的生存率，Log-rank法進行顯著性檢驗，Cox回歸模型進行單變量及多變量預后分析，相關計數資料采用x2檢驗。組間均數比較采用單因素方差分析，數據以±s表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

表1　PinX1的表達和病人臨床病理參數之間的關系

2　結果

2.1PinX1蛋白在大腸癌組織中呈低表達通過免疫組化檢測，我們發現，PinX1在細胞核中表達（圖1A-D）。根據我們的評分原則（見材料與方法），總共86例病人腫瘤組織中，PinX1低表達的為52例（60%），而在25例正常大腸黏膜組織中，PinX1低表達的僅為6例（24%），兩者之間存在統計學差異（P=0.012）。此外，PinX1的表達水平和腫瘤的分化程度呈正相關（P=0.037；圖1）。未發現PinX1的表達與病人其它臨床病理因素之間的相關性（P＞0.05；圖1）。

圖1　PinX1在正常結腸腺體及大腸癌組織中的表達（免疫組化染色）

2.2腫瘤組織中PinX1低表達預示病人不良預后根據我們的評分標準將病人分別分為兩個亞組：PinX1高表達組和PinX1低表達組。我們發現，無論是比較總生存率（圖2A，P=0.016）還是無病生存率（圖2B，P=0.042），PinX1高表達組病人的預后均明顯好于PinX1低表達組，比較數據具有統計學差異。多因素分析顯示，和病人TNM分期及有無淋巴結轉移等指標一樣，PinX1的表達可以作為預測病人生存的獨立指標（P=0.015；見表2）。

圖2　Kaplan-Meier分析PinX1的表達和入組的大腸癌病人的生存預后關系

表2　多因素Cox回歸分析結直腸癌總生存期

3　討論

從分子水平尋找預測腫瘤病人預后生物標志物的研究越來越廣泛，而相關研究成果也越來越多地應用于腫瘤的診斷、治療及預后判斷。PinX1是在進化上高度保守并與端粒/端粒酶相互作用的核蛋白。因為其與端粒酶結合并且其蛋白炭端有較強的抑制端粒酶活性的功能，PinX1被認為是一種端粒酶抑制因子和潛在的抑癌基因［3］。有研究報道PinX1在肝癌中低表達，而錢東等［4～5］研究提示其在食管鱗癌組織中呈高表達并與病人放化療抵抗相關。這提示PinX1在腫瘤中的表達及作用具有腫瘤特異性。本研究旨在研究PinX1在大腸癌組織中的表達情況及其對病人生存預后的影響。

我們的研究發現：與正常的結腸組織相比，PinX1在大腸癌病人組織中普遍呈現低表達。我們知道，比較正常組織與腫瘤組織遺傳學及表觀遺傳學的差異是現代腫瘤分子生物學的基石，也是發現腫瘤相關基因（包括癌基因和抑癌基因）的有效途徑［6～7］。PinX1的這種差異表達提示我們其可能在大腸癌的發生發展中發揮著一定的功能。進一步，我們根據PinX1在大腸癌中的表達強度不同，將病人分為高表達組和低表達組。生存分析的結果清晰的顯示，PinX1高表達組病人的預后明顯好于PinX1低表達組，PinX1的表達可以作為預測病人預后的獨立指標。這些結果和之前在腸癌及肝癌中的相關研究結果一致［4～7］。但是，也有研究提示PinX1在食管鱗癌中呈高表達，PinX1高表達是接受根治性放化療食管鱗癌病人預后不良因素［5］。這提示PinX1在腫瘤中的表達、狀態及功能并非一成不變，而是具有腫瘤特異性。腺癌和鱗癌中PinX1參與腫瘤發生發展的生物學功能可能不同。

綜上所述，我們的研究發現，PinX1在大腸癌中呈低表達，而大腸癌中表達PinX1較高的患者總體預后較PinX1較低的患者好，PinX1可以作為預測大腸癌患者預后判斷分子生物學標志之一。

1Henry LR，Lee HO，Lee JS，et al.Clinical implications of fibroblast activation protein in patients with colon cancer.Clinical cancer research：an official journal of the American Association for Cancer Research.2007；13：1736～1741.

2Cancer statistics.Jama.2013，310：982.

3Zhou XZ，Lu KP.The Pin2/TRF1-interacting protein PinX1 is a potent telomerase inhibitor.Cell.2001，107：347～359.

4Zhou XZ，Huang P，Shi R.The telomerase inhibitor PinX1 is a major haploinsufficient tumor suppressor essential for chromosome stability in mice.The Journal of clinical investigation.2011，121：1266～1282.

5Qian D，Zhang B，He LR.The telomere/telomerase binding factor PinX1 is a new target to improve the radiotherapyeffectofoesophagealsquamouscellcarcinomas.The Journal of pathology.2013，229：765～774.

6Campbell RM，Tummino PJ.Cancer epigenetics drug discovery and development：the challenge of hitting the mark.The Journal of clinical investigation. 2014，124：64～69.

7Dawson MA，Kouzarides T.Cancer epigenetics：from mechanism to therapy.Cell.2012，150：12～27.

/（編審：劉文斌施仲賦）

Expression and Clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma

1.Anhui No.2 People's Hospital，Hefei 230041，Anhui
2.Tianjin Medical University，Tianjin 300060，China
CHI Tao1，QIAN Dong2，WANG Rui1，et al

Objective:To investigate the expression and clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma （CRC）.Methods:The expression dynamics of PinX1 was detected byimmunohistochemistry（IHC）in one cohort of CRC patients；The prognostic significance of PinX1 in CRC patients was analysis by Kaplan-Meier；Results:the expression of PinX1 in CRC tissues was lower than that in normal non-cancerous tissues.Low expression of PinX1 was an independent predictor for short overall survival（OS）and disease-specific survival（DFS）of CRC patients.Conclusion:our data suggested that PinX1 was a novel prognostic biomarker for CRC patients survival，and it can be used as one analysis judgment of the clinical prognosis of patients with colorectal cancer.

Colorectal Carcinoma；PinX1；clinical prognosis

R735.34【文獻標識碼】A

1671－8054（2016）01-0030-03

1.安徽省第二人民醫院普外科合肥230041 2.天津醫科大學腫瘤醫院放射治療科天津300060

許榕生，男，主任醫師

2015-11-10收稿，2016-01-12修回