液相色譜/串聯質譜法測定芹菜中甲拌磷及其代謝物殘留

吳 成*， 趙志強

(山東省農業環境保護和農村能源總站，山東濟南 250100)

甲拌磷屬高毒農藥。我國食品安全國家標準(GB2763-2014)規定甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜之和為甲拌磷殘留，蔬菜中最大殘留限量為0.01 mg/kg[1]。國標法(GB/T19648-2006)包括甲拌磷和甲拌磷砜，不包括甲拌磷亞砜[2]。當前甲拌磷檢測主要方法有：熒光光度法[3]、氣相色譜法、氣相色譜-質譜法[2,4]和氣相色譜-串聯質譜法[5]、液相色譜法[6]和液相色譜-串聯質譜法(LC/MS/MS)[7]等；甲拌磷砜檢測方法有氣相色譜-質譜法[2,4]和氣相色譜-串聯質譜法[5]。芹菜是生產用藥殘留問題較多的蔬菜，本文用LC/MS/MS開展芹菜中甲拌磷及其代謝物殘留檢測的研究，建立了甲拌磷及其代謝物殘留的快速確證檢測方法。該法操作簡單、快速、靈敏，精密度和回收率較好，適合芹菜中甲拌磷及其代謝物殘留的確證和定量測定。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

LCMS-8040液相色譜-串聯質譜儀(日本,島津公司)，配電噴霧離子源(ESI)；LDZ5-2離心機(北京京立離心機公司)；k600食品加工機(荷蘭,Philips公司)；IKA T18均質器(德國,IKA公司)。

甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜標準溶液(1 000 mg/L，農業部環境保護科研監測所)。用甲醇稀釋甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜標準溶液成100 mg/L單標準儲備液，置于-20.0 ℃冰箱中保存，使用時用甲醇-水(1+1)溶液稀釋配制標準工作液。乙腈和甲醇(色譜純，德國Merck公司)，甲酸、乙酸銨和氯化鈉(分析純，上?；瘜W試劑有限公司)。實驗用水為超純水。

1.2 液相色譜/串聯質譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18柱(150×3.9 mm,5 μm)；柱溫：40 ℃；流動相：甲醇-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸銨)(體積比75∶25)；流速：0.4 mL/min；等度洗脫；進樣量：1 μL；信號采集時長：10.0 min。電噴霧正離子源(ESI+)，接口電壓：4.5 kV；電噴霧負離子源(ESI-)，接口電壓：-3.5 kV；霧化氣：3.0 L/min氮氣；干燥氣：15.0 L/min氮氣；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度：250 ℃；加熱模塊溫度：400 ℃；掃描模式：多反應監測(MRM)；駐留時間：20 ms；延遲時間：3 ms；各監測離子對的質譜參數見表1。

表1 LC/MS/MS測定甲拌磷及其代謝物的部分參數

Note："*"referred to the qualitative ions."Q1" and "Q3" indicated the bias voltage in the pre rods of front and rear quadrupole of collision cell,respectively.“CE” meant collision cell voltage.“Relative intensity” referred to the signal intensity ratio of qualitative ion to quantitative ion.

1.4 樣品前處理

按國標(GB/T 8855-2008)方法抽取芹菜樣品，取可食部分[8]，縮分、切碎、混勻，放入食品加工機粉碎，制成待測樣，置于-20.0 ℃冰箱中保存。稱取樣品15.0 g于50 mL具塞離心管，加30.0 mL乙腈，用均質器以12 000 r/min均質2 min，加5.0 g NaCl，劇烈震搖2 min，以5 000 r/min離心5 min，取上清液10.0 mL于100 mL燒杯中，60 ℃水浴氮吹至干，用1.0 mL甲醇-水(1+1)溶液溶解殘渣，過0.22 μm尼龍膜，濾液待測。分別用氣相色譜-質譜法[2]和本實驗方法對購自市場的芹菜進行檢測，選擇不含甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜干擾的空白樣作為實驗對象。

2 結果與討論

2.1 質譜條件的優化

分別采用ESI+和ESI-對甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜進行母離子掃描。結果發現：ESI+模式下，甲拌磷和甲拌磷亞砜的加氫峰離子([M+H]+)和甲拌磷砜的加銨峰離子([M+NH4]+)信號均較強且穩定，以相應離子作母離子，利用島津LCMS-8040 Optimizer軟件對甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜的子離子(Daughter ion)、四極桿預桿偏置電壓(Q1和Q3)、碰撞池電壓(CE)等參數進行優化，優化結果見表1。用優化的色譜質譜條件，在MRM模式下，進0.1 mg/L甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜混標1.0 μL，得總離子流圖(TIC)見圖1。依據歐盟2002/657文件規定的質譜技術中相對離子強度的最大允許限度范圍，結合樣品色譜峰保留時間和扣背景質譜圖，可確證樣品中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜的存在。

2.2 線性范圍和檢出限

用芹菜空白基質液將甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜混合標準儲備液配制成 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 和 0.1 mg/L系列標準工作液，以峰面積(y)對質量濃度(x,mg/L)做標準曲線，以3倍和10倍信噪比(S/N)計算方法檢出限和定量限。其回歸方程、線性范圍及檢出限等見表2。本方法檢測靈敏度符合國標(GB2763-2014)對芹菜甲拌磷殘留檢測方法的要求。

表2 甲拌磷及其代謝物的線性范圍、回歸方程、相關系數、檢出限及定量限

2.3 準確度和精密度

在芹菜空白樣品中添加甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜 5、50、100 μg/kg三個水平，進行回收率試驗，用芹菜空白基質配制上機標準溶液，外標法定量，每個水平重復6次。結果見表3。

表3 甲拌磷及其代謝物在芹菜中的添加回收率(n=6)

3 結論

本文以乙腈作提取劑，采用液相色譜/串聯質譜法成功地建立了芹菜中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜殘留的快速檢測方法。該方法簡單、快速、靈敏度高，確證性和實用性強，可作為芹菜中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜殘留的確證定性和定量檢測。