不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質的差異性研究

馮四平

（延安市人民醫院，延安 723000）

不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質的差異性研究

馮四平

（延安市人民醫院，延安 723000）

目的：研究不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質的差異性。方法：柱溫、檢測波長、流速分別為30℃、254nm、1.0ml/min，流動相A、B分別為0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（80：20）。結果：在4個廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質檢出量，而在A、C、D3個廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質檢出量；總雜質的檢出情況基本類似于最大雜質的檢出情況。在4個廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質檢出量和最多的檢出雜質峰，色譜柱2具有最小的總雜質檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質檢出量。結論：不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質具有較大的差異，從總體上來看，色譜柱3最好。

不同色譜柱；阿莫西林膠囊；有關物質；差異性

阿莫西林屬于青霉素類抗生素，對多種細菌的抗菌作用良好，如鏈球菌屬、沙門菌屬等，因此其被臨床當做基本藥物得到了日益廣泛的應用［1］。藥品不良反應一方面會在人的個體差異的影響下發生，另一方面也會在生產、應用阿莫西林制劑等過程中將雜質引入的情況下發生［2］。長期檢驗工作表明［3］，在阿莫西林制劑有關物質含量的檢測中，色譜柱廠家及型號不同，那么所得結果就有差異。本研究通過各種色譜柱對阿莫西林膠囊有關物質進行了考察，將能將有關物質最大量地檢出來的色譜柱篩選了出來，現報告如下。

1 資料與方法

所用儀器包括紫外檢測器和Agilent 1260型高效液相色譜儀，所用試藥為中國食品藥品檢定研究院生產的阿莫西林對照品（含量：86.9%，批號：130409-200810），分別用A、B、C、D為4個廠家生產的阿莫西林膠囊編號，將色譜純設定為乙腈，將分析純設定為其余試劑。

2 結果

2.1 色譜條件 色譜柱1：Agilent Zorbax SB-C18 柱，色譜柱2：Waters Sun Fire 柱，色譜柱3：Thermo ODS Hypersil柱，色譜柱4：Phenomenex Luna 5 μ C18 柱，規格分別為250 mm×4.6 mm，5 μm，150 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，250 mm×4.6 mm，5 μm，柱溫、檢測波長、流速分別為30℃、254 nm、1.0 mL/min，流動相A、B分別為0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（99：1）、0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液-乙腈（80：20），其中0.05 mol / L 磷酸鹽緩沖液的制備方法為用2mol/L氫氧化鉀溶液調節0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液的pH值為5.0。完成洗脫阿莫西林峰后進行梯度洗脫，方法具體見表1。

表1 流動相線性梯度洗脫表

2.2 溶液制備 對照品溶液的制備：取阿莫西林對照品10 mg左右，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相A稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

供試品溶液的制備：取供試品內容物，精密稱定，臨用前加流動相A溶解并定量稀釋制成每1 mL中含2.0 mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 A樣品有關物質檢測 有效檢測樣品A，檢測過程中嚴格依據擬定色譜條件，結果具體見圖1。

圖1 不同色譜柱測定樣品A高效液相色譜圖

2.4 最大雜質檢測 取對照品溶液和供試品溶液進行進樣試驗，試驗過程中嚴格依據色譜法，定量的依據是在一定濃度范圍內，濃度與峰面積（或峰高）成正比。一般單個雜質超過0.02%就需要做雜定鑒定［4］。結果顯示，在4個廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質檢出量，而在A、C、D3個廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質檢出量。具體見表2。

2.5 總雜質檢測 取對照品溶液和供試品溶液進行進樣試驗，試驗過程中嚴格依據相關方法［5］。結果顯示，總雜質的檢出情況基本類似于最大雜質的檢出情況。在4個廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質檢出量和最多的檢出雜質峰，色譜柱2具有最小的總雜質檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質檢出量。具體見表3。

3 討論

阿莫西林屬于青霉素類抗生素，具有廣譜性和半合成性，將一個對位羥基引入了氨芐西林分子的苯環上，使其在胃酸中具有更高的穩定性，口服吸收具有更高的安全性［6］。在以往的質量標準中，沒有對阿莫西林膠囊有關物質的質量提出特殊要求，但是隨著我國藥品質量標準的不斷提升，對抗生素有關物質提出了越來越高的要求［7］。2005年版的《中國藥典》將阿莫西林膠囊有關物質檢查添加在了其質量標準中［8］。有關物質檢查包括兩種類型，一種為檢查指定物質，另一種為檢查未指定物質，2-羥基-3-（4-羥基）本吡嗪、4-羥基苯甘氨酸、（2S，6R）-阿莫西林酸等均是阿莫西林的主要有關物質，而檢查未指定物質是檢查阿莫西林膠囊有關物質的主要方面［9］。

表2 最大雜質檢測結果

表3 總雜質檢出結果

現階段，在藥品質量控制過程中，各國藥典廣泛采用的一個重要手段就是反相高效液相色譜法，其基礎為硅烷鍵合硅膠色譜柱［10］?！吨袊幍洹份^為詳盡地描述了高效液相色譜法的溶液配置及流動相，但是通常情況下只指明了色譜柱的填料大類［11］。在實驗過程中，很多雜質峰會在具有較長的洗脫時間的情況下發生，其誘發因素包括樣品本身雜質、溶劑等，因此在進樣試驗過程中應該選擇空白進樣，只有這樣才能將溶劑引發的雜質峰的影響有效消除掉。同時，還會有很多負峰發生在實驗圖譜中，因此，在計算結果的過程中應該有效扣除這些負峰峰面積［12］。本研究結果表明，在4個廠家樣品中，色譜柱3均具有最大的雜質檢出量，而在A、C、D3個廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的最大雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的最大雜質檢出量，色譜柱1、4則具有相似的最大雜質檢出量；總雜質的檢出情況基本類似于最大雜質的檢出情況。在4個廠家樣品中，色譜柱3具有最大的總雜質檢出量和最多的檢出雜質峰，色譜柱2具有最小的總雜質檢出量。在A廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在C、D廠家樣品中，色譜柱1、2、4具有相似的總雜質檢出量，在B廠家樣品中，色譜柱2具有較小的總雜質檢出量，色譜柱1、4具有相似的總雜質檢出量，充分說明了不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質具有較大的差異，阿莫西林有關物質的質量控制受到色譜柱的直接而深刻的影響。針對這一情況，在對阿莫西林膠囊有關物質進行檢測的過程中應該給予色譜柱的選擇以充分重視。

總之，不同色譜柱測定阿莫西林膠囊有關物質具有較大的差異，從總體上來看，色譜柱3最好，值得充分重視。

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Differences study of Amoxicillin related substances between different columns

Feng Si-ping
（Yanan People’s Hospital Yanan 723000， China）

Objective To study the differences of Amoxicillin related substances between different columns. Methods Column， detection wavelength， the flow rate were 30 ℃， 254nm， 1.0 mL / min， mobile phase A， B were 0.05 mol / L phosphate buffer -acetonitrile （99：1）， 0.05 mol / L phosphate buffer solution - acetonitrile （80：20）， respectively. Results In 4 samples factories， columns 3 had maximum detectable amount of impurities， and in A， C， D3 factories samples， column 1，2，4 impurities had similar maximum detectable amount， in B Manufacturers sample， column 2 had smaller maximum detectable amount of magazines， columns 1，4 had similar maximum impurity detection limit； total impurities in detection of maximum impurity detection substantially similar situation. In 4 factories samples， column 3 had the largest and most detectable amount of total impurities of impurity peaks were detected， column 2 had the smallest detectable amount of total impurities. A factory in the sample， columns1，2，4 had similar total impurity detectable amount， in C， D manufacturers sample， columns 1，2，4 had similar amount of total impurities detected in the sample B factory in column 2 had smaller amount of total impurities detected， columns 1，4 had similar amount of total impurities detected. Conclusion Different columns have greater difference in the detection of amoxicillin related substances， on the whole， the best is column 3.

Different columns； Amoxicillin； Related substances； Differences

R927.2

A

1673-016X（2016）01-0136-03

2015-06-10

馮四平，E-mail:yxylw002@163.com