HPV16-E6-DNA病毒載量對預測宮頸癌患者生存狀況的影響

帕提曼·米吉提唐努爾·阿不力米提古扎努爾·阿布都西庫爾古扎麗努爾·阿不力孜

新疆醫科大學附屬腫瘤醫院婦外五科，烏魯木齊830054

HPV16-E6-DNA病毒載量對預測宮頸癌患者生存狀況的影響

帕提曼·米吉提唐努爾·阿不力米提古扎努爾·阿布都西庫爾古扎麗努爾·阿不力孜#

新疆醫科大學附屬腫瘤醫院婦外五科，烏魯木齊830054

目的探討宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒16型致癌基因E6（HPV16-E6-DNA）的病毒載量對預測宮頸癌患者生存狀況的影響。方法選取126例宮頸癌患者為研究對象，提取宮頸癌組織DNA，利用熒光定量PCR技術檢測宮頸癌組織中HPV16-E6-DNA病毒載量，根據檢測的HPV16-E6-DNA載量將患者分為低載量組（＜106copy/ng）與高載量組（≥106copy/ng）。采用Kaplan-Meier法計算兩組患者的生存率，采用Cox回歸對影響患者5年生存率的因素進行分析。結果比較兩組患者間一般資料特征，年齡、FIGO分期及淋巴結轉移情況，差異有統計學意義（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存率分析顯示，低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%和74.29%，高載量組患者1年、3年及5年生存率分別為89.09%、62.60%和51.37%，低載量組高于高載量組，兩組差異均有統計學意義（P＜0.01）。Cox多因素回歸分析結果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結轉移是影響宮頸癌患者預后的主要因素。結論HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌患者的遠期預后密切相關，可作為術后宮頸癌患者預后的預測因子。

宮頸癌；人乳頭瘤病毒；預后

Oncol Prog，2016，14（6）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在發展中國家，占生殖系統惡性腫瘤的第一位，嚴重危害女性的健康［1］。高危型人乳頭狀瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）持續感染被公認為是引起宮頸癌的必要病因。致癌基因E6是HPV16型的早期基因，其病毒載量及所編碼的蛋白與宮頸癌的發生密切相關［2］。本研究對126例宮頸癌患者的HPV16-E6-DNA載量進行檢測，分析其對患者生存狀況的預測價值。

1　對象與方法

1.1研究對象

選取2009年1月至2010年1月于新疆醫科大學附屬腫瘤醫院采取宮頸癌根治術治療的126例宮頸癌患者為研究對象，年齡26～79歲，平均年齡（56.4±7.8）歲。納入標準：①患者初始治療均選擇宮頸癌根治術；②病理組織活檢確診為宮頸癌，凱普HPV分型法檢測法確定HPV16感染陽性；③婦產科聯盟（FIGO）對宮頸癌分期為Ib～IIa；④隨訪資料完整；⑤患者及家屬對本研究知情同意。排除未到達隨訪終止時間或事件失訪的患者。126例患者中，鱗癌109例，腺癌17例；組織學分化程度低分化23例，中分化45例，高分化58例。

1.2HPV16-E6-DNA載量檢測及分組

首先提取患者宮頸癌變組織中的DNA，采用Qiagen DNA提取試劑盒（德國QIAGEN公司生產）對凍存宮頸組織中的DNA進行提取，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書，DNA溶液-80℃冷藏備用。采用實時熒光定量PCR測定HPV16-DNA-E6載量，引物由大連寶生物工程公司合成（引物編號LZDl74），引物序列如下：

HPV16-DNA-E65'-GCAAGCAACAGTTACTGCGACGT-3'（nt201-223）5'-GCAACAAGACATACATCGACCGG-3'（nt501-523）

使用pUCm-T/HPV16-E6質粒（南京金斯瑞生物科技有限公司）制備標準品，檢測標準品和待測樣品的HPV16-E6基因，從而得出DNA相對含量，每個樣品重復3次，取平均值。將HPV16-E6-DNA載量＜106copy/ng患者分為低載量組（n=71），載量≥106copy/ng患者為高載量組（n=55）。

1.3觀察指標

從確診之日起進行隨訪，前2年每6個月隨訪1次，以后每12個月隨訪1次，隨訪采用門診或電話隨訪的形式。隨訪初共138例患者，隨訪期間12例患者失訪，最終126例患者納入研究。以患者死亡、隨訪截止作為隨訪結束點。分析比較兩組患者間臨床資料，觀察兩組患者1年、3年及5年的生存率。

1.4統計學方法

采用SPSS 19.0軟-件對本研究數據進行統計學分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗；計數資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法進行生存分析，Log-rank法進行組間對比，采用Cox回歸對影響患者5年生存率的因素進行分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2　結果

單因素卡方檢驗顯示年齡、FIGO分期、宮旁浸潤及淋巴結轉移情況與載量相關（P＜0.05）；組織學分化程度、病理類型、腫瘤直徑、病灶類型和深肌層浸潤與載量無關（P＞0.05）。（表1）

2.2病毒載量對生存狀況的影響

低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%及74.29%，高載量組患者1年、3年及5年生存率分別為89.09%、62.60%及51.37%，低載量組高于高載量組，差異有統計學意義（χ2= 8.539，P=0.004）。（圖1）

表1　126例患者HPV16-E6-DNA病毒載量與臨床特征的關系

2.3宮頸癌患者生存狀況的影響因素分析

采用Cox回歸分析對影響宮頸癌患者5生存率的因素進行分析，結果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結轉移是影響宮頸癌患者預后的主要因素（P＜0.05）。（表2）

3　討論

圖1　不同HPV16-E6-DNA病毒載量患者生存曲線

HR-HPV持續感染是宮頸癌及宮頸病變發生發展的必要條件［3］，HR-HPV感染狀態與宮頸癌的進展密切相關，HR-HPV陽性的CNI-I者向高度鱗狀上皮內瘤變進展的風險高于陰性者，而且隨著隨訪時間的延長，進展的風險逐漸增大［4］。在對非典型性鱗狀細胞患者疾病的進展情況的監測過程中，HR-HPV-DNA檢測優于重復細胞學檢查，病毒載量與宮頸病變嚴重程度相關［5］。流行病學調查顯示，HPV16型是我國女性最為常見的感染類型［6-7］。致癌基因及其所編碼蛋白在宮頸癌的發病機制和早期診治的作用而倍受關注，高危型HPV癌基因E6對于惡性腫瘤的轉化和生長起重要作用，其在宮頸癌發病機制中的作用成為目前學者們研究的熱點［8］。HPV16與50%以上的宮頸癌發生發展密切相關，其E6癌蛋白是病毒生命周期的主要蛋白之一，在誘導腫瘤發生與發展進程中起重要作用，且與病毒復制，宿主細胞周期調控，細胞凋亡，細胞增殖及細胞惡性表型轉化有關，通過多種作用機制影響宮頸癌的發生和進展［9-11］。本研究提取患者宮頸組織中的DNA，利用熒光定量PCR技術檢測宮頸癌組織中HPV16-E6-DNA病毒載量，分析HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌病理學特征的關系及其對患者預后的預測價值。

表2　宮頸癌患者5年生存率影響因素分析

本研究結果顯示，不同HPV16-E6-DNA載量患者間年齡、FIGO分期、宮旁浸潤及淋巴結轉移情況差異有統計學意義（P＜0.05）。這一結果說明HPV16-E6-DNA載量越高患者宮頸癌臨床分期越嚴重、伴有宮旁浸潤或淋巴結轉移。亦有研究報道腫瘤直徑，存在淋巴轉移是影響患者預后的主要原因［12］。本研究Kaplan-Meier生存分析顯示HPV16-E6-DNA低載量組患者1年、3年及5年生存率分別為95.67%、89.32%及74.29%，高于高載量組的89.09%、62.60%及51.37%，差異有統計學意義（P＜0.01）。國內有研究報道HPV16-E6-DNA病毒拷貝數＞107copy/ng組5年總生存率為39.4%，105～107copy/ng患者為44.0%，＜105copy/ng患者為86.3%，HPV16-E6-DNA病毒載量是宮頸癌根治性切除術后的總體生存率的獨立預后因素，可作為宮頸癌根治性切除術后的預后預測因子之一［13］。進一步采用Cox回歸對影響宮頸癌患者的5年生存率的因素進行分析，結果顯示，HPV16-E6-DNA病毒載量及淋巴結轉移是影響宮頸癌患者預后的主要因素，而淋巴結轉移在大多數研究中報道其是影響患者預后的獨立因素。

綜上所述，HPV16-E6-DNA病毒載量與宮頸癌患者的遠期預后密切相關，對評估術后宮頸癌患者的預后有指導作用，但尚需要多中心大樣本的研究進一步確定。

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The effect of HPV16-E6-DNAviral load on the survival of patients with cervical cancer

MIJITI Patiman ABULIMITI Tangnuer ABUDUXIKUER Guzhanuer ABULIZI Guzhalinuer#
Department of 5th Gynecological Surgery，Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，Xinjiang，China

ObjectiveTo investigate the predictive value of oncogenes E6 of human papillomavirus type 16（HPV16-E6-DNA）on the survival of patients with cervical cancer.Method126 patients with cervical cancer were included in the study，and the cervical cancer DNA were extracted from cervical tissues.Viral load of HPV16-E6-DNA were detected by fluorescence quantitative PCR，and then patients were stratified as low load group（HPV16-E6-DNA＜106copy/ng）and high load group（HPV16-E6-DNA≥106copy/ng）according to the PCR results.Survival rate was calculated by Kaplan-Meier，and the factors affecting the 5-year survival were analyzed by Cox regression analysis.ResultAge，FIGO stage and lymph node metastasis in the two groups were statistically different，which were of statistically significance（P＜0.05）.Kaplan-Meier survival analysis showed that，1-，3-and 5-year survival rates of low load group were 95.67%，89.32%and 74.29%，and were 89.09%，62.60%，51.37%in high load group，respectively，and the difference was statistically significant（P＜0.01）.Cox multivariate regression analysis showed that，HPV16-E6-DNA viral load and lymph node metastasis were the main prognostic factors in patients with cervical cancer.ConclusionHPV16-E6-DNA viral load was closely associated with the long-term prognosis of patients with cervical cancer，which is useful in predicting the postoperative prognosis in those patients.

cervical cancer；human papillomavirus；prognosis

R737.33

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.14

2015-12-18）

（corresponding author），郵箱：gzlnr@qq.com