淺談離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根

趙化芳

（新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆　烏魯木齊　830063）

淺談離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根

趙化芳

（新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆烏魯木齊830063）

應用離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根的檢測方法，用乙腈沉淀蛋白，嘗試冷凍離心法去除脂肪；對比等度淋洗與梯度淋洗檢測效果，尋找最快捷、準確、使用的檢測方法。

離子色譜法；生鮮乳；硫氰酸根

硫氰酸鈉（NaSCN）是白色斜方晶或粉末，在體內釋放的氰根離子可使組織不能利用氧，而出現惡心，嘔吐，抽搐，呼吸衰竭等中毒癥狀，并妨礙機體對碘的吸收，降低甲狀腺過氧化氫酶的活性，造成碘缺乏進而引起甲狀腺腫大［1］。我國于1995，1996年先后發布了在乳品中的使用規范和添加劑標準，規定添加硫氰酸鈉15 mg/kg，利用乳過氧化物酶體系保存生鮮牛奶，防止牛奶腐?。?］。由于硫氰酸鹽的毒性作用及其濫用，我國于2005年和2007年先后取消了在乳品中的使用規范和添加劑標準，并在2008年12月12日公布了《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批）》，明確規定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質［3］。我國指定的硫氰酸根檢測方法為離子色譜法。

1　原理

生鮮乳樣品經乙腈沉淀蛋白，經冷凍離心法或RP柱法去除脂肪后，過濾，用離子色譜儀外標法測定。

2　試劑和材料

（1）水為去離子水，符合GB/T 6682中用水規定，硫氰酸鈉（NaSCN，純度≥99.99%），乙腈（色譜純），旋渦震蕩儀。

（2）硫氰酸根標準儲備溶液：將硫氰酸鈉于101 ℃～103 ℃烘箱內烘干2 h，在干燥器內冷卻至室溫。準確稱取干燥后的硫氰酸鈉0.139 57 g于燒杯中，加水溶解，轉移定容于1 000 mL容量瓶內，混勻。該硫氰酸根標準儲備溶液濃度為100 mg/L。置于4 ℃保存，有效期一個月。

（3）硫氰酸根標準工作溶液：分別吸取硫氰酸根標準儲備溶液（1.2）0、20、50、100、400、800和1 000 μL于7個100 mL容量瓶內，用水定容，混勻，得到濃度分別為0、0.020、0.050、0.100、0.400、0.800和1.000 mg/L的硫氰酸根標準工作溶液。該標準工作溶液現用現配［3］。

3　儀器設備

離子色譜儀：配淋洗液發生器和電導檢測器，冷凍離心機，10 mL注射器，針孔濾頭：0.22 μm（有機系），分析天平：感量0.000 1 g，烘箱。

4　淺談樣品前處理

用移液槍準確量取經旋渦混勻的樣品4 ml，加入乙腈5 ml沉淀蛋白，取上清液稀釋10倍，過RP柱去脂。由于過RP柱去除脂肪較復雜，成本較高，影響因素較多，回收率低。在實驗中開始從兩個方面嘗試冷凍離心的方法去除脂肪。

方法一，溫度均為-4 ℃，轉速均為2 000 rmp，離心時間分別為2 min，5 min，8 min；

方法二，溫度均為-4 ℃，離心時間均為10 min，轉速分別為2 000 rmp，5 000 rmp，8 000 rmp。

經過多次試嘗和對比發現，在溫度為-4 ℃，轉速為8 000 rmp，離心時間為10 min時，得出的圖譜分離效果較好，且試驗操作過程簡捷，成本低，影響因素少，回收率高［4］。

5　色譜條件的選擇

在樣品前處理、儀器型號、色譜柱類型、柱溫、進樣量、流速等條件完全相同的情況下，通過梯度洗脫（濃度為40 mmol/L KOH）和等度洗脫（0～13 min和18.1～23 min，氫氧化鉀濃度為45 mmol/L，13.1～18 min，氫氧化鉀濃度為70 mmol/L）兩種色譜條件，測得0.2 mol/l標樣峰面積分別為：0.092 8 μS*min，0.091 6 μS*min［5］。其它檢測數據如表1：

經統計，等度洗脫與梯度洗脫平均保留時間相差1.976 min，平均回收率相差0.21%，經過計算，梯度洗脫和等度洗脫的保留時間、峰面積、回收率的RSD值均小于1，精密度和回收率均符合試驗要求，均可用于生鮮乳中硫氰酸根的檢測。但等度洗脫降低了淋洗液氫氧化鉀的濃度，縮短了保留時間，降低了試驗成本，提高了檢測效率。

表1　硫氰酸根0.2 mg/l添加樣品結果匯總表

在溫度為-4 ℃，轉速為8 000 rmp，離心時間為10 min的樣品前處理下，通過等度洗脫的色譜條件下進行試驗。標準曲線回歸方程為Y=0.486X-0.003，R=0.999 9。以時間為橫坐標，以面積為縱坐標，繪制標準品和樣品色譜圖，分別為圖1和圖2。通過試驗發現標準曲線相關系數好，基線穩定，分離度高，干擾物質少，出峰時間短，是可以應用生鮮乳中硫氰酸根的檢測的一種方法。

圖1　標準品色譜圖

圖2　樣品色譜圖

6　注意事項

在取樣和樣品稀釋過程均應充分混勻，增加數據的準確度；冷凍離心時，應提前將離心機的內部溫度調到需要的溫度范圍，因轉速和溫度都是影響去脂效果的重要因素；樣品上機前，先將排除氣泡，平衡離子色譜系統兩個小時以上，確?；€穩定，減少儀器干擾。

7　淺談小結

經過多次的嘗試和操作得出，在選擇離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根含量時，樣品前處理時，可采用溫度為-4 ℃，轉速為8 000 rmp，離心時間為10 min的冷凍離心去脂法；色譜條件選擇時，可采用等度淋洗的方法檢測。

［1］郭棟梁，阮嚴東，毛江勝.微膜過濾等度離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根殘留量［J］.山東農業科學，2011，（12）.

［2］劉全宇.不同地區生鮮乳中硫氰酸根的監測［J］.黑龍江畜牧獸醫，2015，（21）.

［3］夏淑鴻，劉偉華，李培根，等.等度離子色譜法測定生鮮乳中硫氰酸根的方法研究［J］.飼料廣角，2013，（1）.

［4］李輝，徐秀玲，穆阿麗.離子色譜法檢測生鮮乳中硫氰酸根改進初探［J］.山東畜牧獸醫，2014，（3）.

［5］傅徐陽，姜毓君.離子色譜法測定乳及乳制品中的硫氰酸根［J］.中國乳品工業，2014，（9）.

（編輯：晏兵兵）

TS252.7；O657.75

B

1006-799X（2016）14-0088-02

趙化芳（1987-），女，新疆烏魯木齊人，助理獸醫師，主要從事畜牧獸醫和實驗室相關檢測工作。