李芳++蘇益瓊++羅生++覃周嵐++覃萬福++吳雙燕++余波++經孝紅++施佳露++梁麗娟
摘要 為了切實掌握山羊小反芻獸疫疫苗免疫狀況,評估免疫效果。通過用不同廠家的試劑盒來評估小反芻獸疫疫苗的大田效果,其中一種是由青島立見診斷技術發展中心生產的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒,另一種為法國ID-VET生產的ID Screen?誖PPR Competition小反芻獸疫抗體檢測試劑盒。結果表明,其檢測結果一致,只是法國ID-VET生產的試劑盒檢測的OD值較青島立見的高0.07。說明國產試劑盒與進口試劑盒效果一致,但青島立見的試劑盒經濟實惠許多。
關鍵詞 山羊;小反芻獸疫;疫苗;檢測試劑;效果;田間試驗
中圖分類號 F858.27 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739(2017)01-0233-01
小反芻獸疫(Peste des Petits Ruminants,PPR)也稱羊瘟,是由副粘病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒(PPRV)引起的,以發熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的一種急性接觸性傳染病。山羊和綿羊易感,山羊發病率和死亡率均較高。該病是我國的一類動物疫病,OIE規定疫情必須上報[1]。2014年在我國大范圍暴發,一直呈擴大趨勢,成為了嚴重危害畜牧業生產安全的重大跨國動物疫病之一[2]。2014年我國農業部共發布小反芻獸疫疫情260起,涉及21個省份,給我國的養羊業造成了巨大損失[3]。2015年我國將其列為強制免疫病種,為了準確掌握山羊小反芻獸疫疫苗臨床免疫狀況和評估免疫效果,研究了小反芻獸疫疫苗不同劑量免疫接種山羊的田間試驗,現將結果報告如下。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.1.1 疫苗。試驗所使用疫苗為政府采購,由新疆天康畜牧生物技術股份有限公司生產(批號:2015005-1,規格100頭份/瓶;批號:2016020,規格50頭份/瓶),凍干苗。試驗用疫苗均取自廣西鹿寨縣疫苗儲備庫。
1.1.2 試驗羊場。臨床免疫試驗羊場為鹿寨縣中渡鎮、平山鎮、黃冕鎮的8家羊場,中渡鎮、平山鎮的羊場位于山腳,天然防疫屏障良好,飼養的是本地山羊,方式為放養,黃冕鎮的羊場為圈養;場主經驗豐富,注重防疫,管理意識較強。
1.1.3 檢測試劑。小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒(批號:201513)由青島立見診斷技術發展中心生產;小反芻獸疫抗體檢測抗體試劑盒(ID Screen?誖PPR Competition,批號:923)由法國ID-VET生產。
1.2 試驗方法
1.2.1 免疫試驗。嚴格按照說明書操作,每只羊皮下注射疫苗1頭份,免疫接種后對羊只進行臨床觀察。2015年采集注射批號為2015005-1的小反芻獸疫疫苗的羊場5個,免疫4周后每個場采集15份血樣,分離血清,冷凍待檢。2016年采集注射批號2016020的小反芻獸疫疫苗的羊場3個,免疫4周后每個場采集22份血樣、分離血清,冷凍待檢。
1.2.2 檢測方法。阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒,用青島立見診斷技術發展中心生產的試劑盒檢測血清中的PPRV抗體(阻斷ELISA法,PB>50為陽性),嚴格按試劑盒的操作說明及判定標準進行;競爭酶聯免疫吸附試驗(GB/T 27982—2011)[4],用法國ID-VET生產的ID Screen?誖PPR Competition小反芻獸疫抗體檢測試劑盒檢測血清中的PPRV抗體(競爭ELISA法,S/N≤50%為陽性),嚴格按試劑盒的操作說明及判定標準進行。
2 結果與分析
臨床應用安全性好,免疫后的羊只采食正常,精神狀況良好,沒有免疫反應死亡,生長發育正常。免疫4周后抗體檢測結果見表1。
2015年隨機抽取5個場,其中4個場的抗體轉陽率都超過農業部規定的70%,而C場的抗體轉陽率只有13.33%,可能是操作失誤致使疫苗失效所致。2016年隨機抽取3個場,其中2個場的抗體轉陽率都超過農業部規定的70%,而F場的抗體轉陽率為54.17%,原因是當年出生的小羊還未進行免疫。隨機抽取的2016年的抗體轉陽率比2015年高5.82個百分點,說明養殖戶的防疫水平有了進一步的提升。
通過比較,試劑盒競爭ELISA法與阻斷ELISA法的檢測的結果一致,只是OD值相差0.070,基本可以忽略,另外,在操作方法上,阻斷ELISA試劑盒比競爭ELISA試劑盒的洗滌次數多1次,時間較長,但從經濟效益考慮,青島立見生產的阻斷ELISA試劑盒(平均約12元/份)比法國ID-VET生產的競爭ELISA試劑盒(平均約30元/份)經濟實惠許多[5-6]。
3 結論
通過試驗,所有免疫動物接種后沒有出現明顯的免疫副反應,說明該疫苗具有良好的免疫安全性,可以大規模使用。同時,試劑盒競爭ELISA法與阻斷ELISA法的檢測結果一致,僅OD值相差0.070,且阻斷ELISA試劑盒比競爭ELISA試劑盒更經濟實惠。
4 參考文獻
[1] 薛青紅,印春生,李 寧,等.小反芻獸疫活疫苗效力評[J].中國獸醫學報,2011,31(9):1276-1278.
[2] 龍云鳳,劉曉慧,周曉黎,等.小反芻獸疫流行病學及防控研究進展[J].動物醫學進展,2012,33(5):94-98.
[3] 王昌建,林源,何世成,等.湖南省小反芻獸疫防控措施及評估[J].畜牧獸醫科技信息,2015(7):19-20.
[4] 刁新育,楊林.基層動物疫病監測指導手冊[M].北京:中國農業出版社,2013:75-76.
[5] 張東東,寧宜寶,劉燦,等.兩種豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒對疫苗免疫豬血清抗體檢測的比較試驗[J].中國獸醫雜志,2016(7):28-29.
[6] 李娟,陳震,霍子威,等.殘余牛血清白蛋白含量檢測試劑盒抗干擾性研究[J].微生物學免疫學進展,2010(4):39-41.