雙黃連口服液（僅適用于兒童）的大鼠毒理學研究

賀一新+樊靜恒+董金鵬+邢澤田

摘要：目的 觀察雙黃連口服液（僅適用于兒童）對SD離乳大鼠一般狀況、體質量、攝食量、生長發育、血常規和病理學的影響，為臨床安全用藥提供實驗依據。方法 SD離乳大鼠按體質量隨機分為對照組和雙黃連口服液低、中、高劑量組，每組30只。各給藥組給予相應劑量雙黃連口服液（僅適用于兒童）濃縮膏灌胃，每日1次，連續33 d。分別觀察給藥期、恢復期（停藥25 d）各組大鼠毒性反應。結果 各組大鼠給藥期和恢復期一般狀況、個體發育、臟器質量和系數，以及剖檢肉眼觀察和病理結果均無明顯差異。雙黃連口服液高劑量組雌鼠和雄鼠體質量與攝食量不同程度低于對照組；給藥期血常規檢測顯示，雙黃連口服液高劑量組雌鼠和雄鼠淋巴細胞比率顯著降低、中性粒細胞比率顯著升高，恢復期恢復正常。結論 雙黃連口服液（僅適用于兒童）濃縮膏對幼年大鼠全身臟器和組織無相關毒性作用，安全性好。

關鍵詞：雙黃連口服液（僅適用于兒童）；毒理學實驗；安全劑量；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.016

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2017）04-0061-06

Rat Toxicological Study of Shuanghuanglian Oral Solution （Only for Children） HE Yi-xin， FAN Jing-heng， DONG Jin-peng， XING Ze-tian （Pharmaceutical Engineering Center， Henan Taloph Pharmaceutical Stock Co.， Ltd， Zhengzhou 450001， China）

Abstract： Objective To study the effects of Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） on general condition， body weight， food intake， growth and development， blood routine and pathologic changes of SD weanling rats； To provide experimental references for clinical safe medication. Methods SD weanling rats were randomly divided into control group， Shuanghuanglian （only for children） Oral Solution low-， medium- and high-dose group according to body mass， with 30 rats in each group. Each administration group was given corresponding amount of Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） concentrated ointment for gavage， once a day， for 33 d. The toxicity of the rats during dosing period and recovery period （medicine withdrawal 25 d） was observed. Results There were no significant differences in general condition， individual development， organ mass and coefficient， and internal fixation and pathological findings of rats in administration groups during dosing period and recovery period. The body mass and food intake of female and male rats in the Shuanghuanglian Oral Solution high-dose group were lower than those in the control group. The blood routine test during dosing period showed that the lymphocyte ratio of female rats and male rats in Shuanghuanglian Oral Solution high-dose group decreased significantly， neutrophil ratio increased significantly， and then returned to normal level in recovery period. Conclusion Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） concentrated ointment has no toxic effect on the whole body organs and tissues of juvenile rats， and the safety is good.

Key words： Shuanghuanglian Oral Solution （only for children）； toxicological test； safe dosage； ratsendprint

雙黃連口服液全方由金銀花、黃芩、連翹3味中藥組成，具有抗菌、抗病毒和解熱消炎的功效[1]。雙黃連口服液（僅適用于兒童）是在雙黃連口服液原有基礎上應用先進工藝將其制成兒童適宜的藥分含量。由于兒童生理解剖特點與成人不同，對藥物的吸收代謝、療效和毒性反應等均有其特殊性[2]，為保證兒童

用藥的安全性，本實驗對雙黃連口服液（僅適用于兒童）毒理學進行研究，為臨床安全用藥提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 動物

SPF級SD離乳（出生21 d）大鼠120只，雌雄各半，體質量40～60 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物許可證號SCXK（京）2012-0001。分籠飼養，2～5只/籠，室溫20～26 ℃，相對濕度40%～70%，人工光照，12 h明暗周期，通風≥15次/h，自由攝食飲水。

1.2 藥物

雙黃連口服液（僅適用于兒童）濃縮膏，河南太龍藥業股份有限公司，批號16030711。

1.3 主要試劑與儀器

PEROX SHEATH、PEROX1、PEROX2、PEROX3、RBC/PLT、AUTORETIC、SHEATH/RINSE，德國Simens。ADVIA2120血球計數儀（德國Simens），Excelsior ES全自動脫水機（英國Shandon），石蠟包埋機（英國Shandon Histocentre），切片機（英國Shandon Finesse），全自動染色機（英國Shandon Varistain Gemini），顯微鏡及圖像分析系統（日本Olympus）。

2 實驗方法

2.1 分組和給藥

實驗大鼠按體質量隨機分為對照組和雙黃連口服液低（28.5 g/kg）、中（57.0 g/kg）、高（113.9 g/kg）劑量組，每組30只，各給藥組予相應劑量雙黃連口服液（僅適用于兒童）濃縮膏灌胃，相當于小兒臨床使用劑量（1.8 g/kg體質量）的15.8、31.7、63.2倍，對照組給予等量純凈水。給藥體積均為10 mL/kg，每日1次，連續33 d。

2.2 指標檢測

于給藥期（33 d）和恢復期（停藥25 d）分別觀察每組大鼠一般狀況、體質量和攝食量；測量大鼠頂臀和脛骨長度，觀察個體發育情況；檢測血常規，包括紅細胞（RBC）、紅細胞壓積（HCT）、紅細胞平均體積（MCV）、紅細胞分布寬度（RDW）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞平均血紅蛋白量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板計數（PLT）、降鈣素原（PCT）、平均血小板體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、白細胞（WBC）、淋巴細胞（LYM）、中性粒細胞（NEUT）、單核細胞（MONO）及網織紅細胞（RET）；大鼠脫頸處死剖檢，檢測臟器質量，并計算臟器系數（臟器質量÷動物體質量×100%）。

3 統計學方法

采用SPSS20.0統計軟件進行分析。計量資料以—x±s表示，體質量、攝食量、生長發育、血常規、臟器指數等指標按雌雄進行分析，組間比較用單因素方差分析。檢驗水準α=0.05。

4 結果

4.1 雙黃連口服液（僅適用于兒童）對大鼠一般狀況、體質量及攝食量的影響

給藥期間各組大鼠自主活動、飲水、攝食及二便正常，精神狀態良好；毛色有光澤，口、鼻、眼均未見異常分泌物，未見呼吸異常。實驗期間各組大鼠均未死亡。各給藥組給藥后大鼠體質量均保持增長趨勢，給藥第5日至給藥結束高劑量組雄鼠體質量均低于對照組；恢復期高劑量組雌鼠體質量低于對照組，見圖1、圖2。低劑量組雌鼠給藥第17日和高劑量組雄鼠給藥第13、17日攝食量低于對照組，見圖3、圖4。

4.2 雙黃連口服液（僅適用于兒童）對大鼠個體發育的影響

給藥期高劑量組雄鼠脛骨長和恢復期高劑量組雌鼠頂臀長低于對照組，給藥期和恢復期其他各給藥組大鼠頂臀長和脛骨長度未見明顯差異。結果見表1、表2。

4.3 雙黃連口服液（僅適用于兒童）對大鼠血液學指標的影響

與對照組比較，給藥期低劑量組RDW、中劑量組PDW、高劑量MCV等指標雖有顯著變化，但未見明顯量效關系，數值變化也未見明顯的規律，且變化幅度?。〝抵底兓∮趯φ战M均值的5%），變化差異均無統計學意義。給藥期高劑量組雌鼠和雄鼠LYM比率顯著降低，NEUT比率顯著升高，恢復期恢復。結果見表3、表4。

4.4 雙黃連口服液（僅適用于兒童）對大鼠臟器質量和臟器系數的影響

與對照組比較，大鼠給藥期腎臟、胸腺、肺臟、腎上腺、附睪及恢復期心臟、脾臟、肺臟、腎上腺、子宮等臟器濕重與臟器系數有改變，但上述變化未見與藥理相關的病理改變，臟器系數無明顯異常，分析認為數值變化與藥物無關。結果見表5～表8。

4.5 雙黃連口服液（僅適用于兒童）對臟器組織病理的影響

給藥期對照組大鼠肝臟出現微小肉芽腫（10/20），肺被膜下或肺小葉內見微小炎性結節（5/20），腎小管內見蛋白管型（6/20），皮質部近曲小管上皮細胞內玻璃樣小滴變性（2/20）；高劑量組大鼠肝臟出現微小肉芽腫（7/20），肺被膜下或肺小葉內見微小炎性結節（2/20），腎皮質或髓質個別腎小管內形成蛋白管型（1/20），皮質部近曲小管上皮細胞內玻璃樣小滴變性（2/20）?；謴推?，對照組大鼠肝臟出現微小肉芽腫（6/10），肺被膜下見微小炎性結節（3/10），腎皮質部近曲小管上皮細胞內玻璃樣小滴變性（4/10）；高劑量組大鼠肝臟出現微小肉芽腫（5/10），肺被膜下見微小炎性結節（1/10），腎皮質部近曲小管上皮細胞內玻璃樣小滴變性（1/10）。高劑量組與對照組比較無明顯差異，且大多為動物的自發性病變，與藥物的毒性無關。endprint

5 討論

本實驗結果顯示，給藥期各給藥組大鼠體質量均保持增長趨勢，表明雙黃連口服液（僅適用于兒童）對幼鼠的總體營養狀態、生理狀態和健康狀況無明顯影響。作為動物體各項生理功能的具體執行者，動物臟器系數可近似反映該臟器的功能狀態和病變情況[3]，各給藥組大鼠脾臟、腎臟、腎上腺、子宮濕重有升高或降低的現象，但未見與藥物相關的病理改變，其臟器系數也無明顯異常，分析認為數值變化與藥物無關，雙黃連口服液（僅適用于兒童）在長期服用中未見明顯毒性靶器官。血常規檢測顯示，給藥期雌鼠和雄鼠高劑量組LYM比率降低、NEUT比率升高，提示高劑量雙黃連口服液（僅適用于兒童）可能引起幼鼠機體炎癥反應及肝臟脂質化損傷[4-6]。有研究發現，雙黃連口服液中有效成分之一綠原酸作為一種可疑的致敏因子在高劑量時會引起促炎因子白細胞介素（IL）-6和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達的增加，并引起組織中大量炎性細胞的浸潤，造成組織結構破壞，使機體發生炎性損傷；而高劑量綠原酸同樣能誘發氧化應激，包括促進活性氧的產生和降低抗氧化酶的活性，引起組織脂質氧化物的損傷；雙黃連口服液具有與綠原酸相同的促氧化作用及劑量依賴性，兩者均可上調組織中核因子-κB的表達、引起IL-10/TNF-α比率下降，破壞機體抗/促炎反應的平衡[7-10]。這可能是雙黃連口服液（僅適用于兒童）高劑量組給藥期引起LYM比率降低、NEUT比率升高的原因，但這種現象在恢復期恢復正常，顯示此種毒性作用可逆。

綜上，雙黃連口服液（僅適用于兒童）無明顯毒性反應，潛在可能毒性靶器官為肝臟，而此種毒性反應可逆，基本無毒作用劑量為28.5、57.0 g原藥材/kg（相當于臨床劑量15.8、31.7倍）。目前其毒性作用機制及物質基礎尚未明確，雙黃連口服液（僅適用于兒童）眾多有效成分中主要毒性物質還未闡明，今后仍需進一步研究。

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