水產品中孔雀石綠殘留檢測技術研究進展

熊雅婷+劉薇

北京維德維康生物技術有限公司

隨著人們對獸藥殘留危害的深入了解，水產品中的獸藥殘留已經成為食品安全領域關注的的熱點和焦點。在我國，濫用、亂用限用藥物和非法使用禁用藥物等現象屢禁不止，這已成為導致我國水產品中獸藥殘留超標的主要原因，還引發了水產品消費安全問題和食品貿易爭端等嚴重后果。

2017年，中央把食品安全問題放在了重要位置，這體現了國家對食品安全問題的重視。習主席對食品安全工作作出了重要指示，他指出，民以食為天，加強食品安全工作，關系我國13億多人的身體健康和生命安全，必須抓得緊而又緊。2017年1月，國家食品藥品監督管理總局制定了2017年食品安全抽檢計劃及要求，農業部制定了2017年動物及動物產品獸藥殘留監控計劃，來確保2017年食品安全環境利好。其中，農業部印發的監控計劃繼續強調了對水產品中氯霉素、孔雀石綠、硝基呋喃代謝物、喹乙醇、激素類等藥物及其代謝物檢測的重要性，明確規定了限量標準、抽檢要求、抽樣流程、結果報送、查處及負責單位等要求。

正確認識孔雀石綠

孔雀石綠（Malachite green，MG）是三苯甲烷類工業染料，早在1933年就作為殺菌劑、防腐劑而被廣泛用于預防與治療水產動物養殖中的水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等。但是，孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠具有潛在“三致”作用，會對人類健康與環境造成危害，因此，美國、加拿大、歐盟等國家和地區都已經明確禁止在水產養殖中使用孔雀石綠。我國于2002年將孔雀石綠列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》中，并且于2005年制定了孔雀石綠的使用標準，要求孔雀石綠在水產品中的檢出值不得超過1μg/kg，這一標準比歐盟2μg/kg的標準還要嚴格。然而，由于孔雀石綠殺菌、防腐效果好，且價格低廉，所以一些生產者受利益驅動在水產品養殖、運輸及貯存中違規使用的情況依然存在。

孔雀石綠檢測方法分析

目前，檢測孔雀石綠的方法主要有高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）、薄層色譜法（Thin-layer Chromatography，TLC）、分光光度法（ultraviolet-visible spectrophotometry，UV-VIS）、聯用檢測法、拉曼光譜法（Raman spectra）以及免疫分析法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）等。常規的儀器分析方法雖然準確、靈敏，但其檢測時間長、成本高，難以及時、有效地檢測出水產品中孔雀石綠含量。隨著科學技術的發展，快速檢測方法以其便捷、靈敏的優勢在現場檢測、快速篩查等方面起著非常重要的作用。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是一種靈敏度較高、可靠性較強的方法，此法重復性好、速度快，可使許多極難分離的待測物得以分析，目前大多數水產品藥物殘留分析都采用HPLC法。但是，因動物體內成分復雜，并且一些雜質會干擾測定，所以應用HPLC法檢測時對于樣品預處理必須仔細謹慎，以提高測定準確性和靈敏度。目前，已有許多研究采用HPLC對孔雀石綠進行檢測，檢出限一般在5～10μg/kg，而且通常需要連接紫外檢測器、熒光檢測器、二極管陣列檢測器等儀器來提升檢測精度。因此，高效液相色譜法無法滿足大批量快速檢測的需求。

2 拉曼光譜法

拉曼光譜法是利用孔雀石綠在拉曼光譜上的特征峰及強度對其進行定性和半定量，這種方法檢測速度比較快，一個樣品從處理至檢測完成只需3min，檢測限約為5μg/kg。此外，表面增強拉曼散射技術在定量檢測食品中化學污染物上具有更高的準確度，但水產品原料的復雜性限制了檢測方法的建立。拉曼光譜技術常需要優化樣品前處理方法，實現水產品中目標化合物精確的分離和富集，從而實現痕量化學污染物檢測，這限制了拉曼光譜技術在水產品中孔雀石綠殘留量檢測的廣泛普及應用。

3 分光光度法

分光光度法用于孔雀石綠檢測時，檢測限較高、靈敏度較低、準確性較差，目前尚無報道此方法在復雜基質中的應用，還不能用于水產品中低濃孔雀石綠及其產物的檢測。國內學者曾利用分光光度法檢測水產品中的孔雀石綠殘留，結果顯示，檢出限為20μg/kg，且測定的最佳pH值為3，前處理過程比較繁瑣，需用大量有機溶劑抽提和離心分離，會產生較多的有機廢液，并不適用于水產品中孔雀石綠殘留的快速大量檢測。

4 聯用技術

常用的聯用技術有氣相色譜-質譜聯用、液相色譜-質譜聯用、薄層色譜-質譜法、毛細管電泳-質譜等，可揚長避短，一般兼分離、定量和定性（分子結構信息）于一體，因而特別適用于確證性分析。但是由于聯用技術需要的儀器設備昂貴，所以目前普及率不高。

5 免疫分析法

免疫分析法是近幾年發展起來的以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的新型分析技術。目前使用最普遍的是酶聯免疫法（ELISA），具有操作簡便、靈敏度高、樣品容量大、儀器化程度和分析成本低的優點，是最理想的殘留篩選性分析方法之一。有學者分別采用直接競爭酶聯免疫法和間接競爭酶聯免疫吸附法測定魚肉、蝦肉等水產品中的孔雀石綠，檢出限大約為0.37μg/kg，平均回收率大約為87.5%～110.4%，實驗結果良好，證實了酶聯免疫方法在水產品中孔雀石綠殘留量檢測的潛在優勢。

憑借深厚底蘊，

不斷創新檢測解決方案

北京維德維康生物技術有限公司（以下簡稱“維德維康”），是一家專業從事食品安全檢測、獸藥殘留快速檢測技術、動物疫病快速診斷技術研究及產品開發的高新技術企業。其在獸藥、非法添加劑、毒素、細菌蛋白等化合物的抗原和抗體制備方面具有豐富的理論基礎和實踐經驗，已經建立了完善的食品安全快速檢測試劑盒、膠體金免疫試紙條開發以及單克隆抗體和抗原合成、免疫檢測技術的研究平臺。維德維康堅持自主創新，現已建成了針對小分子化合物的抗體資源庫，庫容量近千種；并且借助國家獸藥安全評價中心的先進技術平臺，整合自身的工藝優勢，實現了產品的高效產業化，迅速推出了當前市場緊缺的檢測產品，為食品安全檢測市場提供了更多更優的選擇。

維德維康基于扎實深厚的產品研發能力，不斷創新，利用酶聯免疫技術、膠體金免疫層析技術，自主研發了孔雀石綠酶聯免疫試劑盒及孔雀石綠快速檢測卡系列產品?？兹甘G酶聯免疫試劑盒基于酶聯免疫技術，樣本中抗原與酶標板上固定的抗原特異性競爭抗體，通過加入酶標記物，催化底物顯色，根據顯色程度來判斷樣本中孔雀石綠的含量，檢出限可達到0.5μg/kg，準確度高、靈敏性強，可快速準確實現水產品中孔雀石綠殘留的定性、定量檢測。

孔雀石綠快速檢測卡基于膠體金免疫層析技術，以膠體金為顯色媒介，利用抗原抗體特異性結合的原理，根據檢測卡顯色情況來判斷樣本中是否殘留孔雀石綠，實現定性或半定量檢測。經驗證，孔雀石綠檢測卡在魚肉、蝦肉等水產品中的檢出限為2.0μg/kg，具有方便快速靈敏等特點，適合用于大批量樣本現場篩查，能夠有效為國內水產品質量安全提供技術參考與服務。