賽山梅組培快繁技術初探

張 琦，臧巧路，林新春

（浙江農林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培養基地，浙江 臨安 311300）

賽山梅組培快繁技術初探

張 琦，臧巧路，林新春

（浙江農林大學 亞熱帶森林培育國家重點實驗室培養基地，浙江 臨安 311300）

以賽山梅Styrax confusus的帶芽莖段為外植體，MS為基本培養基，對其進行微繁實驗。結果表明，賽山梅的最佳增殖培養基為MS+1 mg·L-1BA，其最高增殖系數為4.00，且芽叢生長旺盛；最佳生根培養基為1/2MS +1 mg·L-1IBA，生根率為40%，根系較長且健壯；試管苗移栽至泥炭、蛭石、珍珠巖配制比例為1:1:1的混合基質中，成活率為58%。

賽山梅；組織培養；快繁

賽山梅Styrax co nfusus，安息香科Styracaceae安息香屬Styrax落葉喬木，廣泛分布于浙江、江蘇、四川、廣東、廣西、福建等省海拔100 ~ 1 700 m的丘陵、山地疏林中[1-2]。安息香屬植物具有生長迅速的特點而被作為一種速生樹種利用；安息香科中秤錘樹Sinojackia xylocarpa，野茉莉Styrax japonicus等植物的花或成熟果實顏色艷麗，可作為觀賞植物[3]；另有中華安息香S. ch inensis的樹干通直，材質堅硬，紋理清晰致密，便于加工，可作為工業用材；安息香屬植物分泌的樹脂稱“安息香”，含較多的香脂酸，是貴重的藥材，還可用于制作高級香料[4-5]。安息香具有提神、活血、止痛等功能，安息香屬植物具有很高的經濟及社會價值而具有廣闊的市場前景。安息香屬植物的傳統繁殖技術主要有種子繁殖、扦插繁殖、根蘗繁殖，但這些技術往往繁殖周期較長、增殖系數較低，且受季節限制，而組織培養具有繁殖速度快、增殖系數大、縮短生產周期、不受季節限制等優點，已在各種觀賞、藥用和材用植物中得到了廣泛應用[6-8]。賽山梅傳統的繁殖方式為種子繁殖，其繁殖周期過長，種子發芽率低，無法滿足市場需求，利用植物組織培養技術有望實現其快速繁殖[9-11]。目前在安息香屬植物中，僅對越南安息香Styrax tonkinensis（又名白花樹）進行了組培快繁技術研究[12]。本實驗通過植物組織培養技術來實現賽山梅的離體快速繁殖，為賽山梅的無性快繁和產業化育苗提供技術支持，對安息香屬其他樹種的組織培養具有重要的參考和借鑒價值。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為賽山梅的無菌試管苗，來自浙江農林大學智能實驗樓培養室，賽山梅種子來自浙江省林業科學研究院。

1.2 試驗方法

1.2.1 初代培養 選用MS為賽山梅增殖培養的基本培養基，添加BA濃度為0.3 mg·L-1，選取長勢良好帶有2 ~ 5個芽的莖段為試驗材料，每試管一莖段。4周后，選取生長良好、健壯的植株進行實驗。

1.2.2 芽增殖培養 選用MS為賽山梅芽增殖培養的基本培養基，采用完全隨機區組設計，6芐基腺嘌呤(BA)設置0，0.3 mg·L-1，1.0 mg·L-13個濃度梯度，萘乙酸(NAA)設置0，1.0 mg·L-1，3 mg·L-13個濃度梯度，共9組處理（表1）。各培養基中添加30 g·L-1蔗糖以及3 g·L-1固化劑，pH為5.7。選取長度2 cm左右，帶有一個頂芽且長勢一致的莖段為試驗材料（圖1a），接種于增殖培養基中。每組處理20管，4周后，統計芽的生長和增殖狀況，實驗重復2次。

1.2.3 生根培養 選用 1/2 MS為賽山梅生根培養的基本培養基，分別添加0，0.3，1.0，3.0，10.0 mg·L-1濃度的吲哚乙酸(IBA)和1，2，4 mg·L-1濃度的NAA，共8組處理（表2）。各培養基中添加30 g·L-1蔗糖以及3 g·L-1固化劑，pH為5.7。選取芽長大于1 cm和長勢一致的帶芽莖段為試驗材料，接種于生根培養基中。每組處理20管，4周后，統計根的生長狀況，實驗重復2次。

1.2.4 試管苗移栽 選取高4 ~ 5 cm，根系長且粗壯的試管苗于強光下（20 000 lx）煉苗1周。1周后取出試管苗，在40℃左右溫水中洗凈殘余的培養基后，移栽到混合基質中（泥炭：蛭石：珍珠巖=1:1:1），4周后統計移栽成活率。

1.2.5 培養條件和數據統計分析 光培養條件：溫度（25±2）℃，光周期16 h/8 h，光照強度2 400 lx；芽增殖系數=新生總芽數/接種總芽數；試管苗根誘導率=誘導出根的試管苗/試管苗總數×100%；運用SPSS 19.0與DPS 6.50進行數據分析，方差分析采用Duncan法。

表1 不同植物激素對賽山梅增殖的影響Table 1 Effect of different hormones on proliferation of shoot

2 結果與分析

2.1不同濃度BA和NAA組合對賽山梅芽增殖的影響

不同的NAA和BA配比會對賽山梅芽的增殖產生不同的影響。從表1可以看出，NAA濃度不變時，隨BA濃度的增加，芽的增殖系數總體呈上升的趨勢；當BA濃度不變時，隨NAA濃度的增加，芽的增殖系數呈下降趨勢。在BA濃度1.0 mg·L-1，NAA濃度為0 mg·L-1時，葉片嫩綠，不易褐化，芽生長旺盛（圖1b）且增殖系數達到4.00。實驗顯示，賽山梅的最佳增殖培養基為MS+1mg·L-1BA。

2.2 不同濃度的IBA和NAA對賽山梅生根誘導的影響

5個不同濃度的IBA和3個不同濃度的NAA對賽山梅進行生根誘導。由表2可知，隨著IBA濃度的增加，根的數量先增加后減少，在濃度為1 mg·L-1和3 mg·L-1的IBA中達到峰值，但在含有3 mg·L-1IBA的培養基中誘導出的根基部有愈傷化現象（圖1c）。在1 mg·L-1濃度的IBA中，根粗壯，較長，生根數也最多（圖1d）。而

2 不同濃度IBA ent concentration生根率/% NAA /(mmg·L-1） IB表2 Table 2 Differe BA /(mg·L-1）A和NAA對賽山ns of IBA and NA % 平 生根特征0影響tion of S. confusus 0.00無生根根0 0 0 0 1 2 4 0.3 1.0 3.0 10.0 0 0 0 0 40 40 30 30 30 60 2.7 2.7 0.9 2.3 1.1 2.0無生根較粗壯纖細較粗短，粗短，粗短，粗短，根壯，較長較長，有部分愈傷基部膨大基部膨大基部膨大基部膨大，部分傷化分愈傷化注：生根數代代表平均值±標準準誤；多重比較采采用Duncan法，數數值后有相同字母山梅生根誘導的影AA on root induct平均每株生根數0b 0b 75±1.056a70±1.161a95±0.450ab35±1.193ab15±0.625ab00±0.580ab母表示差異不顯著著（P<0.05）。

研究結果表明，一定濃度的BA可以促進芽的增殖，而NAA會抑制芽的增殖且隨著NAA濃度的增加抑制作用更強。該結論與張亮亮的研究結果一致，NAA對安息香屬的白花樹芽增殖也有抑制作用[12]，但白花樹的最佳增殖的BA的濃度為0.3 mg·L-1，而賽山梅最佳的增殖所需BA濃度更高，為1 mg·L-1。

大多研究認為，IBA和NAA都有促進植株生根的作用[13-14]。本實驗結果表明一定濃度的IBA，NAA都可以促進生根，但過高質量濃度的IBA易導致基部膨大，出現愈傷化現象嚴重且根較短，不利于移栽成活，這與陳芳等的研究存在較大差異[10]。不同的木本植物對生根誘導所需生長調節劑的濃度不同，因此 NAA的濃度不適宜用來進行賽山梅試管苗的誘導。更低濃度的NAA是否有利于促進賽山梅生根將在今后的實驗中做進一步論證。同時，本研究中試管苗的生根率不高，仍需對生根條件進行優化。

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Experiment on Microprapagation of Styrax confuses

ZHANG Qi，ZANG Qiao-lu，LIN Xin-chun
(State Key Laboratory Cultivation Base of Subtropical Silviculture, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, China)

Experiments were conducted on tissue culture of Styrax confuses by stem with bud as explants. The results showed that MS supplemented with 1 mg/L of BA had the best effect for bud multiplication, with the highest proliferation coefficient of 4.00, and the bud cluster grew well. The best medium for rooting was 1/2 MS supplemented with 1 mg/L of IBA, with rooting rate up to 40%, and the roots were long and strong. Plantlets were transplanted in medium of peat, vermiculite and perlite with a ratio at 1:1:1. Survival rate was 58% after 4 weeks.

Styrax; S. confusus; tissue culture; micropropagation

S723.1+32.6

A

1001-3776（2017）01-0051-04

10.3969/j.issn.1001-3776.2017.01.009

2016-09-21 ；

2016-12-31

浙江省科技廳項目(2012C22097)，浙江農林大學學生科技創新項目(1011210047)

張琦，碩士研究生，從事森林培育方向研究；E-mail：754989034@qq.com。通信作者：林新春，教授，博士，從事植物生物技術研究；E-mail：lxc@zafu.edu.cn。