細胞蠟塊及免疫組化在肺腺癌癌性胸水診斷中的應用

廖志東，朱文標，鄭少秋，謝壽城

(1.梅州市中醫醫院病理科，廣東梅州514071；2.中山大學附屬梅州市人民醫院病理科，廣東梅州514031)

細胞蠟塊及免疫組化在肺腺癌癌性胸水診斷中的應用

廖志東1，朱文標2，鄭少秋2，謝壽城2

(1.梅州市中醫醫院病理科，廣東梅州514071；2.中山大學附屬梅州市人民醫院病理科，廣東梅州514031)

目的研究胸水沉渣包埋制成細胞蠟塊聯合免疫組化檢測對肺腺癌癌性胸水與非癌性胸水的診斷及鑒別診斷價值。方法選取梅州市人民醫院2015年1～12月經組織病理確診的肺原發腺癌伴有胸水的患者57例及炎癥性胸水患者36例，采用胸水沉渣包埋制成細胞蠟塊，并行甲狀腺轉錄因子1(TTF1)、癌胚抗原(CEA)、天門冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、間皮細胞(MC)、鈣結合蛋白(CR)、腎母細胞瘤1(WT1)等6種免疫標記的免疫組化檢測。結果癌性胸水細胞蠟塊中腫瘤細胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的陽性表達率依次為89.47%、78.94%、92.98%、17.54%、19.30%及7.54%；炎癥性胸水細胞蠟塊中間皮細胞TTF1、CEA、NapsinA、MC、CR、WT1的陽性表達率依次為8.33%、13.89%、22.22%、80.56%、97.22%及52.78%。癌性胸水中腫瘤細胞與炎癥性胸水中的間皮細胞的免疫組化表達率比較差異均有顯著統計學意義(P?0.01)。結論胸水沉渣包埋制成細胞蠟塊聯合免疫組化檢測對肺腺癌癌性胸水的腫瘤細胞與炎癥性胸水中不典型間皮細胞的鑒別診斷有重要臨床意義。

肺腺癌；胸水；細胞蠟塊；免疫組化

胸腔積液是一種常見的多種臨床疾病的肺部臨床表征。胸腔積液良性與惡性的鑒別診斷是臨床病理常見的難點之一[1]，不典型增生間皮細胞與對肺腺癌細胞形態上有時非常相似，細胞學涂片難以區別，主觀性強，特別是低年資醫師，容易誤診[1-2]。本文通過聯合免疫組化染色方法及胸水沉渣包埋方法對兩者進行鑒別診斷，提高對肺腺癌癌性胸水的診斷準確性，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 胸水標本收集梅州市人民醫院2015年1～12月經臨床綜合檢查已確診病例肺原發腺癌患者伴胸水57例及肺炎患者伴胸水36例；57例肺原發腺癌患者胸水標本中男性34例，女性23例，年齡20～90歲，平均(63±19.53)歲；36例肺炎患者胸水標本中男性20例，女性16例，年齡18～88歲，平均(61±16.20)歲；兩組患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法采用細胞沉渣包埋聯合免疫組化染色進行檢測。

1.2.1 沉渣包埋取胸水50 mL放置于試管，2500 r/min，離心10 min，用吸管吸出上清液丟棄，取沉渣加4%中性福爾馬林固定24 h，用濾紙將沉渣包好，常規脫水，石蠟包埋，常規切片，HE染色制片，觀察細胞形態。

1.2.2 免疫組化采用SP法檢測，檢測試劑盒均購于福州邁新生物公司，步驟按試劑盒說明書進行，所選擇CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1鼠抗單克隆抗體及試劑盒均來自福州邁新生物公司。所有抗體均在同一張切片上設置了陽性對照及陰性對照。

1.3 結果判定CEA、NapsinA、CR陽性表達定位于細胞質，棕黃色，顆粒狀；TTF1、WT1陽性表達定位于細胞核，棕黃色；MC陽性表達定位于細胞膜，棕黃色。

1.4 統計學方法應用SPSS13.0軟件處理數據，計數資料行χ2檢驗，以P?0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 細胞形態學沉渣包埋與常規細胞學涂片相比較，沉渣包埋切片中細胞更加豐富，所有的細胞都在同一平面上，與組織學切片相似，結構清晰，堆聚成團狀或環狀，無常規涂片的細胞重疊性，結構清晰，無常規涂片細胞立體感，見圖1。

2.2 免疫組化免疫組化顯示肺腺癌胸水沉渣中癌細胞表達情況：CEA陽性率為89.47%、TTF1為78.94%、NapsinA為92.98%、MC為17.54%、CR為19.30%、WT1為7.54%；炎癥性胸水沉渣增生間皮細胞表達情況：CEA陽性率為8.33%、TTF1為13.89%、NapsinA為22.22%、MC為80.56%、CR為97.22%、WT1為52.78%。癌性胸水中腫瘤細胞與炎癥性胸水中的間皮細胞的免疫組化表達率比較差異均有顯著統計學意義(P? 0.01)，見表1。肺原發腺癌胸水沉渣包埋免疫組化結果與肺腺癌組織學免疫組化表達結果相一致。不典型增生的間皮細胞胸水沉渣包埋免疫組化結果與胸膜活檢間皮細胞免疫組化表達結果相一致，見圖2。

圖1 胸水細胞蠟塊切片HE染色(×200)

圖2 胸水細胞蠟塊免疫組化表達(×200)注：A：TTF1；B：CEA；C：NapsinA；D：MC；E：CR；F：WT1；紅色箭頭示癌細胞，黑色箭頭示間皮細胞。

表1 肺腺癌性胸水與炎癥伴間皮細胞不典型增生性胸水免疫組化結果

3 討論

在胸腔積液中，腫瘤細胞學檢查肺腺癌與反應性不典型增生胸膜間皮細胞在細胞形態上非常相似[3]，需要有較特異性的指標來協助診斷，減少診斷醫師的主觀意識。常規細胞學涂片檢查具有方便簡潔的特點，但是，由于涂片技術及人為因素，造成細胞涂片厚薄不一，細胞重疊，結構欠清晰，細胞變性及血性背景遮掩腫瘤細胞等特點，給診斷醫師帶來干擾和困惑[4]。我們采用胸水沉渣包埋方法，可以排除上述各種原因帶來的不便，同時還可以聯合免疫組化應用得到客觀的特異性強的明確的診斷依據而減少了人為主觀因素。

肺腺癌細胞與反應性不典型增生胸膜間皮細胞的診斷不僅僅是依據細胞學形態，還需要結合應用免疫組化檢查才能更好地做出正確的診斷[5-7]。肺腺癌與反應性不典型增生胸膜間皮細胞，細胞學形態相近，均可以排列形成管狀、片狀、團塊狀、腺腔樣，細胞核大，可有異型性，胞漿豐富，染色質深染等，光鏡下很難鑒別。細胞沉渣包埋石蠟切片能夠較好地區別兩者，聯合免疫組化一般可以明確診斷及判斷來源。同時，與涂片相比較，沉渣包埋石蠟塊可長期保存，可行免疫組化、特殊染色及基因分析，對于晚期肺癌患者，可以代替組織學標本，臨床應該廣泛[5-8]。

免疫組化肺腺癌組選用TTF-1、NapsinA和CEA單克隆抗體，TTF-1是分子量為38～40 kDa的核蛋白，在成人組織中主要分布在內胚層分化的甲狀腺濾泡細胞，間腦局部和呼吸道上皮中，在肺小細胞癌及肺原發型腺癌中高表達。結果顯示：本組TTF-1在肺腺癌中陽性率為89.47%，不典型增生間皮細胞中陽性率為8.33%，表明TTF-1可作為診斷肺腺癌與不典型增生間皮細胞相鑒別的特異性指標。NapsinA是一種胃酶樣天冬氨酸蛋白酶，分子量接近38 kDa的單鏈蛋白，該蛋白在人類肺和腎組織中高表達，在部分TTF-1陰性的低分化肺腺癌中亦有表達。本組57例肺腺癌陽性率為92.98%，不典型增生間皮細胞中陽性率為22.22%。CEA是一種在胎兒腸道產生的癌胚抗原，在成人結腸正常黏膜上皮及其他組織中表達率極低，在胃腸道腺癌和肺腺癌中有較高表達，本組例肺腺癌陽性率為78.94%，不典型增生間皮細胞中陽性率為13.89%。不典型增生胸膜間皮細胞組選用了間皮細胞相對特異的抗體MC、CR和WT1，MC主要表達于間皮細胞，腺上皮一般不表達，而且腺上皮若表達側在胞漿上，不是間皮細胞的細胞膜位置。在本組中不典型增生的間皮細胞陽性率為80.56%，腺癌中陽性率為17.54%。Wieczorek等[9]研究顯示，MC在反應性間皮細胞中具有較高的敏感性和特異性，是間皮細胞較好的一個指標，是鑒別腺癌細胞及間皮細胞的較好標記物。CR是一種細胞內結合蛋白，屬于激動蛋白C超家族，表達于正常和腫瘤性間皮細胞中，在本組中間皮細胞的陽性率為97.22%，腺癌中陽性率為19.30%。因此，MC和CR結合使用能較好的鑒別胸水中的不典型增生間皮細胞與腺癌細胞。WT1是一種抑癌基因，和腎母細胞瘤等腫瘤的發生有關，在間皮細胞、卵巢漿液性腫瘤中表達。在本組不典型增生間皮細胞中的陽性率為52.78%，在腺癌中的陽性率為7.54%，因此，它在間皮細胞增生與肺腺癌的鑒別診斷中具有一定意義?？傊?，CEA、TTF1、NapsinA、MC、CR、WT1等一組免疫組化抗體，對反應性不典型增生胸膜間皮細胞與肺腺癌的診斷與鑒別診斷有重要意義。

綜上所述，常規涂片中未能明確診斷的胸水，沉渣包埋切片聯合免疫組化檢查能夠提供良好的形態學診斷及特異性標記物，對反應性不典型增生胸膜間皮細胞與肺腺癌的診斷與鑒別診斷具有重大意義。胸水沉渣包埋制成細胞蠟塊技術明顯提高了惡性胸腔積液的診斷率，這是一個簡單實用的技術，實用性強，基層醫院都可以開展，值得推廣。

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[4]魏謹,朱有珍.胸腔積液的細胞塊技術應用體會[J].臨床肺科雜志, 2012,17(2)：352.

[5]周曉明,馮學威,趙立.胸腔積液脫落細胞免疫組織化學染色檢測相關抗體對胸膜轉移性肺腺癌和惡性胸膜間皮瘤的鑒別診斷價值[J].中國全科醫學,2012,15(35)：4075-4078．

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Application of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for in the diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.

LIAO Zhi-dong1,ZHU Wen-biao2,ZHENG Shao-qiu2,XIE Shou-cheng2.
1.Department of Pathology,Meizhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Meizhou 514071, Guangdong,CHINA;2.Department of Pathology,Meizhou People's Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University,Meizhou 514031,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the value of paraffin imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry for diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion.MethodsFrom Jan.2015 to Dec.2015,57 patients clinically confirmed as lung adenocarcinoma with pleural effusion and 36 patients of pneumonia with pleural effusion were selected from Meizhou People’s Hospital.The paraffin imbedded cell blocks technology was applied,and immunohistochemistry was used to detect thyroid transcription factor 1(TTF1),carcino-embryonic antigen(CEA),aspartie proteinase A(NapsinA),mesothelial cells(MC),calretinin(CR),and Wilms Tumor Protein(WT1).ResultsThe positive rates were 89.47%for TTF1,78.94%for CEA,92.98%for NapsinA,17.54%for MC,19.30%for CR,and 7.54%for WT1 in lung adenocarcinoma with pleural effusion,as compared with 8.33%for TTF1,13.89%for CEA, 22.22%for NapsinA,80.56%for MC,97.22%for CR,and 52.78%for WT1 in pneumonia with pleural effusion(all P? 0.01).ConclusionParaflln imbedded cell blocks technology combined with immunohistochemistry has significant value in the differential diagnosis of lung adenocarcinoma with pleural effusion and pneumonia with pleural effusion．

Lung adenocarcinoma;Pleural effusion;Paraffin imbedded cell blocks;Immunohistochemistry

R734.2

A

1003—6350（2017）11—1773—03

2016-12-21)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.018

廖志東。E-mail：hony96@163.com