酵母多糖、殼聚糖、甘草酸對草魚非特異性免疫功能的影響

張濤

摘 要：將草魚放入網箱中，在基礎飼料中分別添加不同劑量的酵母多糖、殼聚糖和甘草酸后，進行投喂，研究其對草魚血清中菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）及補體C3活性的影響。結果表明：投喂添加中藥免疫添加劑的飼料49 d 后，與對照組比較，酵母多糖添加劑各組、殼聚糖高劑量組草魚血清LSZ活性顯著提高（P<0.05）；酵母多糖低劑量組、中劑量組和殼聚糖高劑量組草魚血清CAT含量顯著提高（P<0.05）；酵母多糖中劑量組草魚血清補體C3活性顯著提高（P<0.05），說明中藥免疫添加劑對增強草魚免疫活性具有一定的作用。

關鍵詞：中藥免疫添加劑；草魚；LSZ；CAT；補體C3

草魚俗稱鯇魚、鯇，東北俗稱草根子，屬鯉形目，鯉科，雅羅魚亞科，草魚屬，為中國東部廣西至黑龍江等平原地區特有經濟魚類；其生長迅速，飼料來源廣，肉質鮮美，是中國淡水養殖的四大家魚之一。近年來，隨著我國淡水養殖業的發展，人工養殖草魚受到水環境、飼料及養殖管理等條件變化因素影響，常常發生疾病而造成大量死亡，嚴重損害了我國淡水養殖業的發展。因此，研制草魚免疫添加劑，促進魚體的疾病抵抗能力，對人工養殖草魚技術的發展具有極其重要的意義。

免疫添加劑因為具有高效、毒副作用少、無污染等特點，是抗生素和化學藥物的最佳替代品，因此受到水產工作者的親睞。近年來，由國內外的研究報道可知，水產動物飼料中添加免疫添加劑可促進水產動物體的非特異性免疫指標的提高[1-5]，從而增強水生動物的免疫能力；曹振杰等[6]在草魚飼料中添加不同劑量的免疫多糖明顯增強了魚體的免疫能力，提高了SOD活力。本試驗中，在草魚的飼料中添加3種不同的免疫添加劑飼喂草魚，并通過試驗數據分析草魚血清中的幾種非特異性免疫指標，其目的是考察草魚的飼料添加劑能否有效提高草魚非特異性免疫指標，從而增強草魚抵抗疾病的能力。

1 材料與方法

1.1 試驗方法與飼料

在草魚的基礎飼料中分別添加相同濃度梯度的酵母多糖、殼聚糖和甘草酸，濃度梯度分別設計為0.22%、0.44%、0.66%，共9試驗組，一個對照組，每組設3個重復。飼料配制時，飼料原料經粉碎過40目篩后，制得3 mm顆粒，草魚基礎飼料配方見表1。

1.2 試驗用魚及養殖管理

試驗草魚平均體重97.6±5.2 g，購自遼寧省淡水水產科學研究院試驗場，暫養后挑取相同規格的健康草魚750尾，隨機分為10組，每組3個平行，即1個對照組和9個試驗組，共計30個網箱，網箱大小為1.2 m×0.6 m×1.2 m，放在8.5 m×1.6 m×8.5 m的水泥池塘中，每個網箱隨機放入25尾草魚。

試驗期間水溫26±2 ℃，每天在7∶00、12∶00、17∶00投喂飼料，投飼量為魚體重的4%，連續充氧，每日排污和換水各一次，共計49 d；其中，養殖水體NH+4-N<0.5 mg/L ，pH（7.4±0.3），DO≥6 mg/L。

1.3 血清免疫指標的測定

試驗結束后，從每個試驗箱中取6尾草魚，尾靜脈采血，3 000～5 000 r/min 離心 8 min，取血清于5 ml離心管中備用。溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）、補體C3活性均采用由南京建成生物技術研究所生產的試劑盒的測定方法測定。

1.4 數據分析與處理

試驗結果用“平均值±標準差”表示，采用SPSS14.0在a=0.05水平下進行統計分析，數據經單因素方差分析后，進行Duncans 多重比較統計分析。

2 結果

2.1 三種免疫添加劑對草魚血清溶菌酶（LSZ） 活性的影響

由表2和圖1可知，草魚血清溶菌酶（LSZ）活性由高到低依次為酵母多糖中劑量組、酵母多糖低劑量組、殼聚糖高劑量組、酵母多糖高劑量組、殼聚糖中劑量組、殼聚糖低劑量組與甘草酸中劑量組、甘草酸高劑量組、甘草酸低劑量組；其中，酵母多糖添加劑各組、殼聚糖高劑量組與對照組比較，草魚血清LSZ活性均顯著提高（P<0.05）；其他各組與對照組比較差異不顯著（P>0.05），只有甘草酸低劑量組草魚血清LSZ活性略低于對照組。

2.2 三種免疫添加劑對草魚血清CAT活性的影響

由表2和圖2可知，酵母多糖低劑量組、中劑量組和殼聚糖高劑量組草魚血清CAT含量顯著高于對照組（P<0.05），其余各組與對照組比較差異不顯著（P>0.05），只有甘草酸低劑量組與高劑量組草魚血清CAT略低于對照組。

2.3 三種免疫添加劑對草魚血清補體C3活性的影響

由表2和圖3可知，酵母多糖中劑量組草魚血清補體C3活性顯著高于對照組（P<0.05），其余各試驗組與對照組比較呈不顯著差異（P>0.05），只有甘草酸低劑量組草魚血清補體C3活性略低于對照組。

3 討論

魚類作為低等脊椎動物，其非特異性免疫功能具有抵抗外來病原入侵的主要作用[7-9]。

溶菌酶（LSZ）是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶（LSZ）作用機理主要是通過對菌體細胞壁進行破壞而使不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致菌體細胞壁破裂，胞壁里內容物質逸出而使菌體溶解[10]。另外，溶菌酶可與病毒蛋白結合，并與RNA、DNA、脫輔基蛋白形成復合鹽，致使病毒失去活性。近些年研究發現，中草藥的免疫添加劑對水產動物LSZ具有增強作用。胡宗云[11]等研究發現飼料中添加硬葡聚糖在增強草魚血清溶菌酶（LSZ）活性方面效果更好；許國煥[12]等研究發現肽多糖能提高彭澤鯽血清溶菌酶活性；王樹芹[13]等在異育銀鯽飼料中添加0.5%或1.0%的殼聚糖能夠顯著提高溶菌酶活性（P<0.01），這與本研究添加0.66%殼聚糖的飼料能顯著提高草魚血清溶菌酶（LSZ）活性（P<0.05）相近；同時，本研究在飼料中添加了0.22%、0.44%、0.66%的酵母多糖后，草魚血清溶菌酶（LSZ）活性均顯著提高（P<0.05），這與李桂峰[14]等研究發現添加了0.5%和0.8%酵母多糖的飼料能顯著提高赤眼鱒溶菌酶活性（P<0.05）相近。endprint

過氧化氫酶（CAT）是一種酶類清除劑，可清除機體氧自由基，是生物防御體系的重要抗氧化物關鍵酶；當魚類體內過氧化氫酶（CAT）活性降低時，魚體內自由基過多會使其代謝混亂、內分泌失調、機體免疫能力下降等，從而使魚體易受到病原微生物入侵，最終導致魚體發病[15-16]。王洪斌[17]等研究發現日本蟳在注射海洋紅酵母多糖48 h后，其血清中的過氧化氫酶（CAT）提高35%；這與本試驗中飼料在分別添加了0.22%、0.44%的酵母多糖后，草魚血清過氧化氫酶（CAT）活性顯著提高（P<0.05）相近。目前，關于魚類飼料中添加殼聚糖能夠使魚類血清CAT活性增高未見報道；但本試驗中飼料在添加了0.66%的殼聚糖后，草魚血清過氧化氫酶（CAT）活性顯著提高（P<0.05）。補體C3是機體抵抗微生物入侵的重要組成部分，是一個具有精密調控機制的蛋白質反應系統，并由多種具有酶活性的球蛋白構成，其主要存在機體的血清、組織液中；當該系統通過一定途徑被激活時，可發揮調理吞噬、裂解細胞、免疫調節等功能，這在魚類早期抗感染過程中發揮著重要作用[11]。李桂峰[14]等研究發現添加了0.5%和0.8%酵母多糖的飼料能顯著提高赤眼鱒補體C3水平（P<0.05）；這與本試驗中飼料在添加了0.44%的酵母多糖后，草魚血清補體C3活性顯著提高（P<0.05）相近。于翔[18]等研究發現添加一定量殼聚糖的飼料能顯著提高草魚血清補體C3水平（P<0.05），這與本試驗飼料添加了0.22%、0.44%、0.66%的殼聚糖后，草魚血清補體C3活性提高相近；但本試驗提高補體C3水平不顯著（P>0.05）。

劉麗萍[19]等報道甘草酸是有效的免疫添加劑，其免疫調節作用表現在對免疫活性細胞、細胞因子、補體等多方面。而本研究在飼料中添加了 0.22%、0.44%和0.66%的甘草酸后，草魚血清溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）、補體C3活性與對照組差異都不顯著（P>0.05），低劑量組的溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）、補體C3活性甚至低于對照組，筆者認為這是甘草酸并不能有效激活草魚血清中的溶菌酶（LSZ）、過氧化氫酶（CAT）、補體C3活性所致。

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