蜜柚中農藥殘留快速檢測的方法初探

蜜柚中農藥殘留快速檢測的方法初探

蜜柚是我國特色的農產品之一。福建省平和縣作為我國最大的蜜柚種植產業園，承載著生產和出口兩大任務。近年來，蜜柚的銷量不斷增長，成為當地農民的主要收入來源。蜜柚種植過程中，雖然對果實進行套袋的農事操作，并且延長了采摘前噴藥的時間間隔，但蜜柚中仍會存在一定的農藥殘留，這給蜜柚產品的出口和銷量帶來了巨大影響，同時也給種植蜜柚的農民造成了一定的經濟損失。所以，為了保障農民的正常收入，提高蜜柚的銷售額，提出一種有效的蜜柚中農藥殘留快速檢測的方法是我們目前需要解決的主要問題。

實驗材料和主要方法

快速檢測需要的材料：氣相色譜-質譜聯用儀器、高速冷凍離心機、超聲波清洗劑、固相萃取裝置、乙腈等試劑、混合器、DN-24A氮吹儀以及一些農業標準物等。

快速檢測的方法：首先，進行檢測的提取過程，將一定的蜜柚樣品放置在50ml的離心管當中，并且放入10ml的乙腈試劑，利用超聲波提取蜜柚樣品中的農藥殘余物質10分鐘左右，再往離心管當中加入少許的氯化鈉，進行離心操作，大約5分鐘之后，將離心后的上層物質放入到試劑瓶當中，重復提取的過程，接下來把有機層混合起來，進行蒸發、濃縮，其次進入到凈化的實驗過程。在進行凈化時，我們使用固相萃取的凈化方法，可提高樣品的凈化程度。

氣相色譜以及質譜條件：(1)氣相色譜需要的條件。利用氣相色譜進行檢測時，其載氣是高純度的氦氣，純度高達99.9%；色譜柱儀器要符合檢測的規格標準，進樣口的溫度要保持在230℃左右，并且以脈沖不分流進樣的方式進去，進樣量不得高于1.0ul。其次，柱升溫裝置的起始溫度為50℃，在后續的反應過程中，要以相應的速度持續增溫。(2)質譜需要的條件。質譜檢測需要的條件包括：電子能量70eV，其質譜檢測手段可以采用SIR每一種化合物選取一種定量離子以及2種定性離子，每種農藥的檢測條件不同。此外，質譜檢測要求傳輸線的溫度要達到280℃，而離子源溫度要達到230℃，質譜的參數可以通過自動調節生成快速檢測需要的參數。

蜜柚中農藥殘留快速檢測的過程

快速檢測預處理的條件需求：可以選擇乙腈作為提取劑，其通用性能較好，不僅可以把大部分的農藥殘留溶解，而且吸入的油脂量也較少。此外，氯化鈉物質可以去除樣品中的一些雜質，同時分離水相和有機相，可以有效地提高農藥殘留提取的精確度。

色譜柱的選?。嚎梢愿鶕V分離的基本原理，對樣品中的不同組分進行有效的分離實驗。色譜柱的選取對檢測過程非常重要，根據農藥的不同性質來選擇色譜柱，針對本文檢測的農藥殘留，我們可以選擇DB-35MS毛細管柱。

基質效應的消除：基質效應是指標本中除分析物以外的其他成分對分析樣測定值的影響，即基質對分析方法準確測定分析物的能力的干擾。影響基質效應的因素有很多種。我們通過對蜜柚基質干擾物的檢測，發型主要的基質物質是烯烴類化合物以及脂肪酸等，其干擾物都會使得蜜柚中的基質效應提高。為了有效地消除基質效應，使用PSA和Amino等小柱物質，將兩者結合起來可以達到有效消除蜜柚樣品中基質效應的目的。

快速檢測結果：為了檢測氣相色譜-質譜聯用的方法對蜜柚中農藥殘留的檢測是否有效，我們可以在市場上隨機挑選一些蜜柚產品，對其樣品用上述的方法進行快速檢測，實驗結果發現，此方法可以快速、準確地檢測出蜜柚樣品中農藥殘留量和農藥物質。

通過對蜜柚中農藥殘留快速檢測的方法的探析，我們了解到，氣相色譜-質譜聯用的檢測方法可以快速、準確檢測出蜜柚產品中的農藥殘留。通過實驗材料與裝置的選擇，建立合適的氣相色譜以及質譜條件，預處理的條件以及色譜柱的選擇，基質效應的消除等一系列的過程，可以有效地檢測出蜜柚中的農藥殘留。

乙酸酐和三乙胺組合衍生在水產品中氯霉素測定的應用

氯霉素廣泛應用于動物傳染性疾病的治療，曾在水產養殖業中得到廣泛的應用，但同時也帶來了嚴重的殘留問題，氯霉素能夠抑制人體骨髓造血功能，引起貧血等。因此對水產品中的氯霉素的檢測具有特殊意義。

國內外文獻報道氯霉素類藥物的檢測方法主要采用氣相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法和液相色譜-質譜聯用法。氣相色譜-質譜聯用法和液相色譜-質譜聯用法靈敏度高，但價格昂貴，一般基層實驗室不配備這樣的儀器，因此不適合于基層實驗室大量檢測市場上水產品中氯霉素的含量。氣相色譜儀價格便宜，適合于我們日常生活中水產品中氯霉素的檢測。國內外檢測氯霉素的常用方法大多數與國家標準SC/T 3018-2004方法類似，利用N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）作為衍生劑,吡啶作為催化劑。但BSTFA對環境的濕度很敏感，需要嚴格控制反應條件，并且衍生后的氮-硅鍵和氧-硅鍵在氣相色譜的加熱環境下有可能分解，影響測定和實驗重現性。吡啶是一個具有惡臭的有毒氣體，應用吡啶作為催化劑具有二次污染和對實驗人員造成危害。

針對現有技術的不足，我們研發了一種新的氯霉素測定方法。

實驗部分 材料、試劑、儀器：檢測的樣品為魚、蝦和蟹。甲醇、正己烷、乙腈；乙酸乙酯。氣相色譜儀；旋轉蒸發儀；電子天平；旋渦混合器；毛細管氣相色譜柱RTX-5ms。氯霉素標準品來自于德國Dr.Ehrenstorfer標準品公司，純度≥99%。

方法 氣相色譜的條件為：采用RTX-5ms作為固定相的毛細管柱，所述毛細管柱的柱長為30m、內徑為0.25mm、膜厚度為0.25μm；柱溫為程序升溫，初始溫度150℃，保持1min，以15℃/min的速率升溫至260℃，保持10min，再以30℃/min的速率升溫至280℃，保持5min；總運行時間為24min；載氣為氦氣，純度≥99.99%；采用恒流模式，線速度為31.1cm/s；進樣口溫度為260℃，不分離進樣；檢測器為63Ni電子捕獲檢測器。

樣品處理 樣品預處理：取待測水產品，取肌肉部分，稱取5g置于離心管中，加入20mL乙酸乙酯，均質機均質1min，4000r/min離心3min，得到的混合液轉移到細口雞心瓶中；再向離心管加入10mL乙酸乙酯，均質1min,4000r/min離心3min，合并乙酸乙酯提取液，于40℃水浴中減壓旋轉蒸發近干。

樣品凈化：向雞心瓶中加入1mL甲醇旋渦混合溶解經樣品預處理處理的樣品殘留物，再加入15mL正己烷和25mL4%氯化鈉溶液，振蕩混合1min后轉移到離心管中，4000r/min下離心2min，棄去上層正己烷相；再向水相中加入10mL正己烷，振蕩、離心后棄去正己烷相；向所述水相中加入15mL乙酸乙酯，旋渦混合2min，3000r/min離心3min，吸取乙酸乙酯層，經過無水硫酸鈉柱脫水過濾于50mL雞心瓶中；再向水相中加入5mL乙酸乙酯，旋渦混合、離心后吸取乙酸乙酯層，經無水硫酸鈉柱脫水過濾；用少量乙酸乙酯淋洗無水硫酸鈉柱，合并提取液，40℃水浴中減壓旋轉蒸發近干。

樣品及標準品的衍生化 樣品的衍生化：往旋轉蒸發近干的提取物中加入2mL乙酸乙酯溶解并轉移到離心管中，再用1-2mL乙酸乙酯洗滌提取物，合并乙酸乙酯，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到樣品溶液，供氣相色譜分析備用；標準品的衍生化：取適量標準品于離心管中，加入300μl乙酸酐和300μl的三乙胺，用乙酸乙酯定容到5mL后旋渦2min，得到標準品溶液，供氣相色譜分析備用。

氣相色譜檢測 分別吸取衍生后的標準品溶液和樣品溶液，注入氣相色譜儀中進行測定。

結果與討論 取衍生后的氯霉素標準品溶液進行檢測，結果見圖1。從圖1可以看出，標準品的色譜圖峰形尖銳、對稱，與鄰近峰完全分離。

圖1 氯霉素衍生后的氣相色譜圖

催化劑的選擇：本實驗室嘗試過采用乙酸酐和吡啶作為組合衍生試劑，效果良好。但吡啶具有惡臭和對人體毒性大，經過考慮，本實驗室采用價格更便宜的，極少采用的三乙胺催化劑來代替吡啶，減少對環境的污染和對實驗人員的傷害。

衍生試劑的選擇：N,O-雙（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺/三甲基氯硅烷是一組經常使用的衍生試劑，但其對環境要求嚴格，衍生試劑昂貴，不能大量使用。改用乙酸酐后，乙酸酐價格便宜，能夠大量使用，并且對水的穩定性比較好。

標準曲線、檢出限、回收率與精密度：在20-250μg/L范圍內，氯霉素濃度與峰面積呈現良好的線性關系,其線性回歸方程為：Y=8665.5X，相關系數為0.9990，檢出限為3μg/L。取一份經檢測不含有氯霉素的樣品作為空白樣品，測得平均加標回收率大于72%，標準偏差為2.6%～5.8%。

□ 簡小君 平和縣農業局檢測中心

□ 潘金銅 浙江海洋大學羅杰鴻 廣州京誠檢測技術有限公司