酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和主要代謝酶活力的影響

李學麗，王際英，宋志東，譚 青，孫永智，張利民

酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和主要代謝酶活力的影響

李學麗1，2，王際英2，宋志東2，譚 青1，2，孫永智2，張利民2

（1.上海海洋大學水產與生命學院，上海 201306；2.山東省海洋資源與環境研究院，山東省海洋生態修復重點實驗室，煙臺 264006）

用酶解豆粕替代基礎飼料中0、20%、40%、60%和80%的魚粉，配制5種等氮等能的飼料（HSM0、HSM20、HSM40、HSM60、HSM80，其中 HSM0為對照組）。研究了酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）幼魚生長、體組成、消化和代謝的影響。結果顯示：1）HSM40組幼魚的增重率和特定生長率顯著提高（P＜0.05），HSM80組增重率、特定生長率和蛋白質效率顯著降低（P＜0.05），酶解豆粕替代40%以上時顯著提高了幼魚的攝食率。2）HSM40組肌肉粗蛋白含量顯著升高（P＜0.05），HSM40～HSM80組全魚和肌肉粗脂肪含量顯著低于其余組（P＜0.05），HSM40和HSM60組全魚粗灰分含量顯著高于其余組（P＜0.05），各試驗組肌肉氨基酸含量差異不顯著（P＞0.05）。3）HSM80組胃蛋白酶和胰蛋白酶活力顯著降低（P＜0.05）；脂肪酶活力在替代量大于60%時顯著降低（P＜0.05），各組淀粉酶活力無顯著差異（P＞0.05）。4）各試驗組谷草轉氨酶活力與對照組無顯著差異（P＞0.05），HSM80組谷丙轉氨酶、脂肪酸合成酶活力顯著降低（P＜0.05），HSM20和HSM40組葡萄糖-6-磷酸酶活力顯著升高（P＜0.05）。綜合考慮，酶解豆粕可替代60%的魚粉而不降低珍珠龍膽石斑魚幼魚的生長，在替代量為40%時促進生長。

珍珠龍膽石斑魚；酶解豆粕；魚粉替代；生長；體組成；消化酶；代謝酶

魚粉作為水產飼料中最重要的蛋白源，具有抗營養因子少、氨基酸組成平衡及適口性好等諸多優點。但近年來由于漁業資源衰退以及水產養殖規模的增長，魚粉的供需矛盾導致其價格不斷上漲。因此尋找可以部分或完全替代魚粉的蛋白源成為當前水產養殖產業可持續發展的重要課題。

豆粕蛋白質含量高、來源穩定，是當前水產飼料中使用最為廣泛的植物性蛋白源。然而豆粕中含有胰蛋白酶抑制劑等抗營養因子，過量添加會導致魚體生長速度降低、飼料系數升高［1－2］、蛋白質利用率降低［3］、消化酶活性降低［4］、以及肝臟、腸道組織病變［5］等，從而制約了其在飼料中的添加比例。采用發酵、酶解、熱處理等技術可在一定程度上去除豆粕中的抗營養因子，提高豆粕的使用效率［6］。酶解豆粕是豆粕經酶水解后，得到的一種由少量游離氨基酸、小肽和多肽組成的混合物［7］。與豆粕相比，酶解豆粕含有大量分子量較小的肽段，具有更好的理化性質和生理活性［8］。宋志東等［9］用酶解大豆蛋白替代魚粉在對星斑川鰈（Platichthys stellatus）的研究中發現，適宜的替代比例能提高幼魚的生長性能和飼料利用，并對體組織脂肪蓄積有一定的改善作用。對海參（Apostichopus japonicus）的研究表明，酶解豆粕替代適量的藻粉能促進海參的生長，提高飼料利用，促進礦物質的沉積［10］。

珍珠龍膽石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）是棕點石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus，俗稱老虎斑，母本）與鞍帶石斑魚（Epinephelus lanceolatus，俗稱龍膽斑，父本）雜交培育的新品種，因其具有肉質細膩、營養豐富、生長速度快、抗病性能強等特點而成為石斑魚養殖的新寵。本研究以珍珠龍膽石斑魚為實驗對象，研究用酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚的生長、體組成、消化和代謝的影響，以期為大豆蛋白源的高效利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

實驗用的酶解豆粕根據SONG等［7］的方法酶解制成：用包含中性蛋白酶（100 000 U·g－1）、風味酶（50 000 U·g－1）和非淀粉多糖酶 （木聚糖酶，8 000 U·g－1；β-葡聚糖酶，2 000 U·g－1；β-甘露聚糖酶，150 U·g－1；纖維素酶，300 U·g－1）的復合酶（武漢新華揚生物科技有限公司）酶解豆粕。反應體系中豆粕占15%，加入占豆粕比例為1.5%的復合酶，50℃酶解6 h，然后凍干粉碎過80篩，制成酶解豆粕。根據MAMAUAG等［11］的方法測定蛋白質溶解度為49.0% （pH 7.0，22℃），水溶性氮由中國廣州分析測試中心（廣州）分析測定，分子量分布見表1。

表1 酶解豆粕水溶性氮的分子量分布Tab.1 Information of hydrolyzed soybean meal（HSBM）

設置魚粉含量為53%的基礎飼料，用酶解豆粕分別替代0、20%、40%、60%和80%的魚粉蛋白，配制成5組等氮等能的實驗飼料：HSM0、HSM20、HSM40、HSM60、HSM80，其中 HSM0為對照組。在各試驗組飼料中分別添加晶體蛋氨酸和賴氨酸以滿足幼魚生長需要，各組飼料組成及營養水平見表2。所有原料粉碎過80目篩，依據飼料配方，稱重并采用逐級擴大法混合均勻，加入魚油和適量的蒸餾水二次混合均勻，擠壓制成直徑為4 mm和6 mm的顆粒飼料，烘干冷卻后裝袋備用。

1.2 實驗魚及飼養管理

實驗所用珍珠龍膽石斑魚購自山東萊州明波水產有限公司，養殖實驗在山東省海洋資源與環境研究院東營基地的全封閉循環水系統中進行。實驗開始前投喂基礎飼料，馴養兩周后進行分組。選取大小均勻、健康無病的珍珠龍膽石斑魚幼魚［（47.18±0.45）g］，隨機放養于15個直徑70 cm、高80 cm的圓柱形養殖桶內，每桶30 ind，控制水深在50 cm左右，每組設3個平行。實驗期間每天在08∶30和16∶30飽食投喂兩次，投喂30 min后排殘餌并記錄殘餌數。實驗期間，控制水溫在（26.5±0.5）℃，溶氧 ＞5 mg·L－1，鹽度在23～26，pH 7.8～8.0，亞硝酸氮和氨氮含量均 ＜0.1 mg·L－1，實驗周期為 8周。

1.3 樣品采集

實驗魚取樣前禁食24 h，記錄每桶魚的總重及尾數，然后每桶隨機取10 ind，測定體重體長，其中3 ind作為全魚樣品用于體成分分析，其余7 ind解剖分離內臟和肝臟并稱重，取胃和前腸用于胃腸道消化酶活力測定；取肝臟用于代謝酶活力測定；取背肌用于常規成分及氨基酸測定。以上取樣操作均在冰盤中進行，取樣結束后將所有樣品保存在－70℃冰箱中冷藏待測。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能

增重率（WGR，%）＝（實驗末均重－實驗初均重）／實驗初均重×100；

特定生長率（SGR，%·d－1）＝（ln實驗末均重－ln實驗初均重）／養殖天數×100；

飼料系數（FCR）＝攝食干飼料質量／（實驗末總重－實驗初總重）；

表2 實驗飼料組成及營養水平（干物質基礎）Tab.2 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis）

蛋白質效率（PER，%）＝（實驗末總重－實驗初總重）／（攝食干飼料質量×飼料粗蛋白含量）×100；

攝食率（DFI，%·d－1）＝攝食干飼料質量／［（實驗初總重＋實驗末總重）／2×養殖天數］×100；

肝體比（HSI，%）＝肝臟質量／體質量 ×100；

臟體比（VSI，%）＝內臟質量／體質量 ×100；

肥滿度（CF，g·cm－3）＝體質量／體長3×100。

1.4.2 實驗飼料和魚體營養成分測定

水分測定采用105℃烘干恒重法（GB／T6435-2006）；粗蛋白質測定采用杜馬斯燃燒法（LECO FP-528，USA）；粗脂肪測定采用索氏抽提法（GB／T6433-1994）；灰分測定采用馬弗爐550℃灼燒法（GB／T6438-2007）；能量測定采用燃燒法（IKA，C6000，GERMANY）；氨基酸測定參照魏佳麗［12］的方法。

1.4.3 胃、腸道及肝臟組織粗酶液的制備

組織樣品冰上自然解凍，用4℃的生理鹽水沖洗表面后用濾紙吸干表面水分，稱取約1 g干凈無血的組織，剪碎放入小燒杯中，加入其9倍體積的預冷的勻漿介質或生理鹽水，冰浴勻漿后4℃下4 000 r·min－1離心10 min，取上清4℃保存并于24 h內完成測定。

1.4.4 胃腸道消化酶活力的測定

胃蛋白酶（Pepsin）、腸道胰蛋白酶（Trypsin）、脂肪酶（Lipase）和淀粉酶（Amylase）活性采用試劑盒測定，所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4.5 肝臟代謝酶活力的測定

肝臟中谷丙轉氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉氨酶（Aspertate aminotransferase，AST）活性采用日立自動生化分析儀（HITACHI-7020，JAPAN）測定，所用試劑盒購自四川邁克生化技術有限公司；脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase，FAS）和葡萄糖-6-磷酸酶（Glucose-6-phosphatase，G6PC）均采用 Elisa試劑盒進行測定，所用試劑盒購自上海酶聯生物技術有限公司。

1.5 數據統計分析

應用軟件SPSS 17.0對實驗數據進行單因素方差分析（one-way ANOVA），差異顯著時再進行Duncan氏多重比較，P＜0.05為差異顯著。數據以平均值±標準差（Mean±SD）的形式表示。

2 結果與分析

2.1 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和飼料利用的影響

由表3可知，隨著酶解豆粕替代魚粉比例的增加，幼魚的增重率和特定生長率呈現先升高后降低的趨勢，替代40%時顯著高于對照組（P＜0.05），替代80%時顯著低于對照組（P＜0.05）；替代60%以上魚粉顯著降低了蛋白質效率（P＜0.05），替代80%時顯著提高了飼料系數（P＜0.05）；幼魚的攝食率隨酶解豆粕替代比例的增加而升高，替代 40%以上時顯著升高（P＜0.05）；替代40%和60%魚粉顯著提高了幼魚的肝體比（P＜0.05）；各試驗組幼魚的存活率、肥滿度和臟體比不受酶解豆粕替代魚粉的的影響，各組間無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚體組成的影響

如表4所示，酶解豆粕替代魚粉對全魚水分和粗蛋白含量無顯著影響（P＞0.05）；全魚的粗脂肪含量隨酶解豆粕替代魚粉比例的增加而逐漸降低，當替代量達到40%及以上時顯著降低（P＜0.05）；替代40%和60%時全魚粗灰分含量顯著升高（P＜0.05）。隨著替代比例的增加，肌肉的粗蛋白含量先升高后降低，其中替代40%時顯著升高（P＜0.05），肌肉粗脂肪含量呈下降趨勢，替代40%以上時顯著降低（P＜0.05）。各組肌肉的粗灰分含量沒有顯著差異（P＞0.05）。

酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚肌肉氨基酸組成的影響見表5。在測出的17種氨基酸中，各試驗組幼魚肌肉的必需氨基酸和非必需氨基酸的含量與對照組均沒有顯著差異（P＞0.05）。

表3 酶解豆粕和豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和飼料利用的影響Tab.3 Effects of fishmeal replacement by HSM on growth performance and feed utilization of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

表4 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚體組成的影響（濕重基礎）Tab.4 Effects of fishmeal replacement by HSM on body composition of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂（wet weight basis）

表5 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚肌肉氨基酸組成的影響（干物質基礎）Tab.5 Effects of fishmeal replacement by HSM on muscular amino acid composition of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂（DM basis）

2.3 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚胃腸道消化酶活力的影響

由表6可以看出，隨酶解豆粕替代比例的增加，胃蛋白酶和胰蛋白酶活力呈現先升高后降低的趨勢，胃蛋白酶活力在80%替代組顯著降低（P＜0.05）；胰蛋白酶活力在替代量達到60%以上時顯著降低（P＜0.05），其它各組與對照組無顯著差異（P＞0.05）；脂肪酶活力隨替代比例的增加而降低，替代60%以上時顯著降低（P＜0.05）；各試驗組腸道淀粉酶活力與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚肝臟代謝酶活力的影響

如表7所示，隨著替代比例的增加，谷草轉氨酶活力呈先升高后降低的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），谷丙轉氨酶活力在替代量為80%時顯著降低（P＜0.05），其它各組與對照組無顯著差異（P＞0.05）；隨著替代量的增加，脂肪酸合成酶活力呈降低趨勢，在替代量為80%時顯著降低（P＜0.05）；G6PC活力在20%和40%替代組顯著高于對照組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和飼料利用的影響

本實驗結果顯示，酶解豆粕替代40%的魚粉時顯著促進了珍珠龍膽石斑魚幼魚的生長。關于酶解植物蛋白對水生動物的促生長作用已經有不少研究，劉文斌等［13］研究發現，在異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）中用酶解餅粕蛋白替代魚粉可促進其生長和飼料利用率。許合金等［14］研究表明，在飼料中添加適量的酶解小麥蛋白能提高凡納濱對蝦（Penaeus vannamei）的增重率和特定生長率。宋志東等［10］在海參中用酶解豆粕替代藻粉，可顯著提高海參的生長性能和飼料利用。酶解植物蛋白對水生生物的促生長作用可能與其富含生物活性小肽有關。研究發現，小肽在滿足動物對氨基酸的需求中有重要的作用，供給動物一定量的小肽可使其達到更大的生產性能。經測定，本實驗酶解豆粕中小于1 000 Da的小肽含量為21.81%，約占可溶性氮的1／2。小肽在消化道內可被直接吸收，從而節約了分解蛋白質所消耗的能量用于生長［15］。此外與游離氨基酸相比，小肽具有吸收速度快、耗能低、載體不易飽和等優勢，并且能消除游離氨基酸的吸收競爭［16］，加快蛋白質的合成從而促進生長。其二，有些功能類肽可促進細胞分裂，加快體組織的生長速度。飼料中過量的酶解植物蛋白會對幼魚的生長產生不利影響，在本實驗中80%替代組幼魚的生長顯著降低，可能是因為攝入了過量的小肽，ZAMBONINO等［17］研究發現飼料中高水平的小肽會顯著影響胰島素的合成和分泌，從而抑制魚體生長。

表6 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚胃腸道消化酶活力的影響Tab.6 Effects of fishmeal replacement by HSM on activities of digestive enzymes of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

表7 酶解豆粕和豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚肝臟代謝酶活力的影響Tab.7 Effects of fishmeal replacement by HSM on activities of metabolic enzymes of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

本實驗中酶解豆粕替代魚粉可顯著提高幼魚的攝食率，可能與所選用的風味酶有關，風味酶不僅可以降低酶解產物的苦味，還可以釋放具有誘食作用的游離氨基酸［18］，改善飼料的適口性從而提高攝食率。HSM80組幼魚攝食率顯著提高，可能是因為營養得不到滿足。

3.2 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚體組成的影響

在本實驗中用酶解豆粕替代魚粉沒有降低全魚的粗蛋白含量，肌肉的粗蛋白含量在一定范圍內有升高趨勢，替代40%組顯著高于對照組。豆粕經酶解后，各種有害物質降低，并且酶解產生的小肽可以被完整吸收，直接參與蛋白質的合成，并對氨基酸的轉運也有促進作用，從而有利于蛋白質的高效利用，提高蛋白質在魚體內的沉積［19］。隨酶解豆粕替代比例的增加，全魚和肌肉的粗脂肪含量呈降低趨勢，這與宋志東等［9］在星斑川鰈中用酶解大豆蛋白替代魚粉的結果類似。研究發現，大豆肽能刺激交感神經，阻止脂肪的吸收和促進脂質的分解代謝，此外大豆肽還能刺激產生熱能的褐色脂肪組織（BAT）的活性，提高甲狀腺素在血液中的濃度，從而提高基礎代謝水平，促進體內多余脂肪的消耗，以此來達到減肥降脂的作用［20］。酶解豆粕替代40%和60%魚粉組全魚的粗灰分含量顯著增加，肌肉的粗灰分含量也有上升趨勢。一般認為，魚體粗灰分含量與礦物質的沉積密切相關，因為大豆肽能與金屬元素結合生成螯合物，增加了鈣、鐵、銅、鋅等金屬離子的可溶性，促進其吸收和轉運速度，從而促進了魚體對礦物質的吸收利用和魚體粗灰分含量上升［21］。INFANTE等［22］研究證明在舌齒鱸（Dicentrarchus labrax）魚苗的飼料中添加大豆小分子肽后，能增強骨骼的正常發育并且能有效減少骨骼的畸形發生，其原因是大豆小分子肽能與金屬離子有效結合，而促進鈣、鐵、銅和鋅的有效轉運和在體內的儲存。

通過對魚體肌肉氨基酸的分析，表明用酶解豆粕替代魚粉對幼魚肌肉中各種氨基酸的含量沒有顯著影響。研究發現小肽對氨基酸的吸收有一定的促進作用，小肽獨特的吸收機制可使氨基酸被迅速吸收，同時小肽可提高二肽酶和氨基酸載體的數目，增加機體對氨基酸的吸收并沉積在肌肉中［23］；此外，小肽是腸道的吸收底物，而氨基酸的吸收受到腸腔中吸收底物濃度的影響，小肽含量高則氨基酸吸收快［24］。本實驗酶解豆粕中小肽含量約占可溶性氮的1／2，因此對氨基酸的吸收累積沒有造成不利影響。

3.3 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚胃腸道消化酶活力的影響

胃腸道消化酶活力的高低反映了魚類對進入機體內的營養物質的消化吸收能力，進而決定魚類的生長發育速度。本實驗中用酶解豆粕替代魚粉，在促生長的替代范圍內胃蛋白酶和胰蛋白酶的活力也有相應的提高，表明酶解豆粕可能通過提高消化酶活性等功能來促進魚類生長［25］。酶解豆粕提高蛋白酶的活力可能是因為豆粕經酶解后，抗營養因子被部分或完全消除，投喂幼魚后保證了其腸道健康，從而提高了消化酶活力［26］；此外，豆粕酶解后產生了大豆肽，大豆肽能有效刺激和誘導消化酶的合成分泌［31］。高比例的酶解豆粕替代魚粉造成消化酶活力的降低，這與CAHU等［27］在舌齒鱸的研究結果一致，這可能是因為大量酶解豆粕的攝入增加了腸道內部小肽和游離氨基酸的含量，消化酶所作用的底物減少從而降低了內源酶的需要量，以此反饋調節消化酶的表達量［25］。

3.4 酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚肝臟代謝酶活力的影響

肝臟ALT和AST活力的高低一定程度上反映了機體對蛋白質的合成和分解能力。AST活力升高則蛋白質合成代謝加強，分解代謝減弱，這有利于機體進行氮的積累；ALT活力升高則說明機體加快尿素的生成，以減少氨基酸代謝廢物對機體的毒害［28］。本實驗中各試驗組AST活力與對照組相比無顯著差異，說明在一定程度上酶解豆粕替代魚粉對幼魚蛋白質的合成沒有造成不利影響。FAS在機體脂肪沉積中起關鍵作用，動物的體脂沉積所需要的脂肪酸大多是由FAS催化乙酰CoA和丙二酸單酰CoA合成的。本實驗中，各酶解豆粕替代組全魚和肌肉的粗脂肪含量呈下降趨勢，相應的FAS的活力也降低，因此推測粗脂肪含量降低一部分原因可能是由于FAS的活力受到抑制。研究發現，大豆肽能提高血液中甲狀腺素的濃度，而FAS的表達調控受激素的影響，其中甲狀腺素能在轉錄水平對FAS基因的表達起到調控作用從而抑制其活性［29］。在本實驗中各替代組幼魚攝食含有大豆肽的飼料從而降低了FAS的活力。

［1］ 劉襄河，葉繼丹，王子甲，等.飼料中豆粕替代魚粉比例對牙鲆生長性能及生化指標的影響［J］.水產學報，2010，34（3）：450－459.

LIU X H，YE J D，WANG Z J，et al.Partial replacement of fish meal by soybean meal in diets for juvenile Japanese flounder（Paralichthys olivaceus）［J］.Journal of Fisheries of China，2010，34（3）：450－459.

［2］ 高榮兵，莊 平，章龍珍，等.豆粕替代魚粉對點籃子魚生長性能的影響［J］.水產學報，2010，34（10）：1534－1540.

GAO R B，ZHUANG P，ZHANG L Z，et al.Effects of replacement of fish meal by soybean meal on growth characters of Siganidae（Siganus guttatus）［J］.Journal of Fisheries of China，2010，34（10）：1534－1540.

［3］ REFSTIE S，KORSOEN?J，STOREBAKKEN T，et al.Differing nutritional responses to dietary soybean meal in rainbow trout（Oncorhynchus mykiss）and Atlantic salmon（Salmo salar）［J］.Aquaculture，2000，190（1）：49－63.

［4］ 劉 勇，冷向軍，李小勤，等.豆粕替代魚粉對奧尼羅非魚生長、表觀消化率及血清非特異性免疫的影響［J］.中國糧油學報，2009，24（12）：95－100.

LIU Y，LENG X J，LI X Q，et al.Effects of replacing fish meal with soybean meal on growth，digestibility and immunity of Tilapia（Oreochromis niloticus×O.aureus）［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Association，2009，24（12）：95－100.

［5］ 張 帆，張文兵，麥康森，等.飼料中豆粕替代魚粉對大黃魚生長、消化酶活性和消化道組織學的影響［J］.中國海洋大學學報（自然科學版），2012，42（S1）：75－82.

ZHANG F，ZHANG W B，MAI K S，et al.Effects of replacement of dietary fish meal by soybean meal on growth，digestive enzyme activity and digestive tract histology of Juvenile large yellow croaker，Pseudosciaena crocea R［J］.Periodical of Ocean University of China（Notural Scince Edition），2012，42（S1）：75－82.

［6］ EGOUNLETY M，AWORH O C.Effect of soaking，dehulling，cooking and fermentation with Rhizopus oligosporus on the oligosaccharides，trypsin inhibitor，phytic acid and tannins of soybean（Gycin emax Merr.）， cowpea （Vigna unguiculata L.Walp） and groundbean （Macrotyloma geocarpa Harms）［J］.Journal of Food Engineering，2003，56（2）：249－254.

［7］ SONG Z，LI H，WANG J，et al.Effects of fishmeal replacement with soy protein hydrolysates on growth performance， blood biochemistry， gastrointestinal digestion and muscle composition of juvenile starry flounder（Platichthys stellatus）［J］.Aquaculture，2014（426）：96－104.

［8］ HRCKOVA M，RUSNAKOVA M，ZEMANOVIC J.Enzymatic hydrolysis of defatted soy flour by three different proteases and their effect on the functional properties of resulting protein hydrolysates［J］.Czech Journal of Food Sciences，2002，20（1）：7－14.

［9］ 宋志東，王際英，李培玉，等.酶解大豆蛋白替代魚粉對星斑川鰈幼魚生長、血液生化和體組成的影響［J］.水生生物學報，2016，40（1）：165－172.

SONG Z D，WANG J Y，LI P Y，et al.Effects of replacement fish meal with soybean meal hydrolysates on growth，blood biochemistry，body composition of juvenile starry flounder Platichthys stellatus［J］.Acta Hydrobiologica Sinica，2016，40（1）：165－172.

［10］ SONG Z，LI P，WANG J，et al.Effects of seaweed replacement by hydrolyzed soybean meal on growth，metabolism，oxidation resistance and body composition of sea cucumber Apostichopus japonicus［J］.Aquaculture，2016（463）：135－144.

［11］ MAMAUAG R E P，KOSHIO S，ISHIKAWA M，et al.Soy peptide inclusion levels influence the growth performance，proteolytic enzyme activities， blood biochemical parameters and body composition of Japanese flounder， Paralichthys olivaceus［J］.Aquaculture，2011，321（3）：252－258.

［12］ 魏佳麗.磷蝦粉在星斑川鰈和珍珠龍膽石斑魚幼魚飼料中的應用研究［D］.上海：上海海洋大學，2015.

WEI JL.Application effects of krill meal in feeds for juvenile starry flounder（Platichthys stellatus）and pearl gentian grouper（Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatu♂）［D］.Shanghai：Shanghai Ocean University，2015.

［13］ 劉文斌，詹玉春，王 恬.四種餅粕酶解蛋白對異育銀鯽的營養作用研究［J］.中國糧油學報，2007，22（5）：108－112.

LIU W B，ZHAN Y C，WANG T.Nutritional value of plant protein hydrolysates for alloggnogeuetic Crucian Carp［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Association，2007，22（5）：108－112.

［14］ 許合金，馮 幼，王修啟.日糧中添加酶解小麥蛋白對南美白對蝦生長及非特異性免疫功能的影響［J］.華南農業大學學報，2011，32（4）：86-90.

XU H J，FENG Y，WANG X Q.Effects of dietary hydrolyzed wheat gluten supplement on growth performance and nonspecific immunity of Litopenaeus vannamei［J］.Journal of South China Agricultural University，2011，32（4）：86－90.

［15］ WEBB K E.Intestinal absorption of protein hydrolysis products：A review［J］.Journal of Animal Science，1990，68（9）：3011－3022.

［16］ 蔣金津，陳立祥.小肽的營養特性及其在動物生產中的應用［J］.中國畜牧獸醫，2010，37（6）：17－20.

JIANG JJ，CHEN L X.The progress of research into small peptide’s nutrition and application in animal production［J］. China Animal Husbandry ＆Veterinary Medicine，2010，37（6）：17－20.

［17］ ZAMBONINO L J，CAHU C，PERES A.Partial substitutionof di-and tripetides for native proteins in sea bass diets improves Dicentrarchus labrax larval development［J］.Nutrition，1997（127）：608－614.

［18］ MA Y S，WANG L T，SUN X H，et al.Study on hydrolysis conditions of flavourzyme in soybean polypeptide alcalase hydrolysate［J］.Advanced Materials Research，2013（652－654）：435－438.

［19］ 陸 烝，應朝陽，鄭 斌，等.植物肽的生理功能及其在飼料中的應用研究進展［J］.中國飼料，2015（12）：30－32，36.

LU Z，YING C Y，ZHENG B.The metabolic mechanism and physiological function of plant peptide and its application in feed［J］.China Feed，2015（12）：30－32，36.

［20］ 侯 麗.大豆多肽與運動醫學研究進展［J］.甘肅醫藥，2012，31（12）：907－909.

HOU L.Research progress of soybean peptide and sports medicine［J］.Gansu Medical Journal，2012，31（12）：907－909.

［21］ IWASAKI H，EMI M，EZURA Y，et al.Association of a Trp16Ser variation in the gonadotropin releasing hormone signal peptide with bone mineral density，revealed by SNP-dependent PCR typing［J］.Bone，2003，32（2）：185－190.

［22］ INFANTE J L Z，CAHU C L，PERES A.Partial substitution of di-and tripeptides for native proteins in sea bass diet improves Dicentrarchus labrax larval development［J］.The Journal of Nutrition，1997，127（4）：608－614.

［23］ BAMBA T，FUSE K，OBATA H，et al.Effects of small peptides as intraluminal substrates on transport carriers for amino acids and peptides［J］.Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition，1993，15（1）：33－42.

［24］ 蔣步國，馮 健，黃 鈞，等.酪蛋白小肽和氨基酸對草魚血液循環和組織蛋白質合成的影響［J］.海洋與湖沼，2010，41（1）：75－79.

JIANG B G，FENG J，HUANG J，et al.Effects of small peptides and amino acid on peptide circulation and tissue protein synthesis in grass carp Ctenopharyngodon idella［J］. Oceanologia Et Limnologia Sinica，2010，41（1）：75－79.

［25］ 劉文斌，王 恬.棉粕蛋白酶解物對異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）消化、生長和胰蛋白酶mRNA表達量的影響［J］.海洋與湖沼，2006，37（6）：568－574.

LIU WB，WANGT.Effect of hydroly sates of cotton seed meal protein on the digestibility，growth and expression level of trypsinogen mRNA of carp Carassius auratus gibelio［J］. Oceanologia Et Limnologia Sinica，2006，37（6）：568－574.

［26］ 鄭 裴，呂 峰，徐玉霞，等.植物乳桿菌發酵豆粕及其抗營養因子的研究［J］.安徽農學通報（下半月刊），2009（10）：63－64，137.

ZHENG P，LV F，XU Y X，et al.Research of soybean meal lactic by acid bacteria fermentation and anti-nutritional factor［J］. Anhui Agricultural Science Bulletin，2009（10）：63－64，137.

［27］ CAHU C L，INFANTE J L Z，QUAZUGUEL P，et al.Protein hydrolysate vs.fishmeal in compound diets for 10-day old sea bass Dicentrarchus labrax larvae［J］.Aquaculture，1999，71（1）：109－119.

［28］ 施永海，張根玉，張海明，等.配合飼料和活餌料對刀鱭幼魚生長、存活和消化酶、非特異性免疫酶、代謝酶及抗氧化酶活性的影響［J］.水產學報，2014，（12）：2029－2038.

SHI Y H，ZHANG G Y，ZHANG H M，et al.Effects of compound feed and live feed on the growth，survival，and the activities of digestive enzyme，nonspecific immunity enzyme，metabolic enzyme and antioxidant enzyme of young fish Coilia nasus［J］.Journal of Fisheries of China，2014，（12）：2029－2038.

［29］ 馬慧敏，劉昌奇.脂肪酸合成酶（FAS）基因的研究進展以及日糧成分對其表達的調控［J］.飼料工業，2007，28（22）：59－64.

MA H M，LIU C Q.Advances in fatty acid synthase（FAS）gene and regulation of its expression by dietary compositions［J］.Feed Industry，2007，28（22）：59－64.

Effects of fishmeal replacement by hydrolyzed soybean meal on growth，body composition，digestive and metabolic enzyme activities of juvenile Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

LI Xue-li1，2，WANG Ji-ying2，SONG Zhi-dong2，TAN Qing1，2，SUN Yong-zhi2，ZHANG Li-min2（1.College of Fisheries and Life，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306；2.Key Laboratory for Shandong Marine Ecological Restoration，
Shandong Marine Resource and Environment Research Institute，Yantai 264006）

An 8-week feeding experiment was conducted to evaluate the effects of fishmeal replacement by hydrolyzed soybean meal（HSM）on growth performance，body composition，digestion and metabolism of juvenile hybrid grouper（♀Epinephelus fuscoguttatus×♂Epinephelus lanceolatus）.Five isonitrogenous and isoenergetic diets were formulated by replacing 0，20%，40%，60%，80%of fishmeal protein with hydrolyzed soybean meal（HSM0-80）respectively.A total of 450 juvenile hybrid grouper with an average body weight of（47.18±0.45）g were randomly assigned into 5 groups with 3 replicates per group and 30 fish per replicate.Results showed as follows：1）The weight gain rate（WGR）and specific growth rate（SGR）of the juveniles increased significantly in group HSM40 while the WGR，SGR，protein efficiency ratio（PER）in group HSM80 were significantly lower than that of other groups（P＜0.05）.When dietary hydrolyzed soybean meal content was more than 40%，the DFI of the juveniles significantly increased（P＜0.05）；2）With the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content，the crude lipid content in whole body and muscle decreased and the values of group HSM40 to group HSM80 were significantly lower than that of other groups（P＜0.05），the crude ash content in whole body was significantly higher in group HSM40 and group HSM60（P＜0.05），there was no significant difference in the content of amino acids of muscle among the replacement groups（P＞0.05）；3）With the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content the pepsin and trypsin activities increased and then decreased and were significantly lower in group HSM80（P＜0.05），the activity of lipase was significantly lower when dietary hydrolyzed soybean meal content was more than 60%；4）The activities of alanine transaminase（ALT）decreased significantly in group HSM80（P＜0.05），with the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content，the activity of fatty acid synthase（FAS）decreased and was significantly lower in group HSM80（P＜0.05）.The activity of G6PC was significantly higher in group HSM20 and group HSM40.In conclusion，replacing up to 60%of dietary fishmeal with hydrolyzed soybean meal does not reduce the growth of juvenile hybrid grouper and the optimal replacement level is 40%.

Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂；hydrolyzed soybean meal；fishmeal replacement；growth；body composition；digestive enzymes；metabolic enzymes

S 963

A

1004－2490（2017）05－0529－10

2017－03－17

國家海洋生物產業水生動物營養與飼料研發創新示范平臺（201702001）；山東省重點研發計劃（2016GSF005005）；山東省自然科學基金（ZR2015CQ023）

李學麗（1991－），女，山東濟南人，碩士研究生，從事動物營養與飼料科學研究。

E-mail：lixueli1226＠126.com

張利民，研究員。E-mail：zhanglimin＠126.com