銀萊湯對發熱大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響

萬宇翔，鄭子安，白 辰，王云輝，于 河，劉鐵鋼，谷曉紅

（北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029）

銀萊湯對發熱大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響

萬宇翔，鄭子安，白 辰，王云輝，于 河，劉鐵鋼*，谷曉紅*

（北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029）

目的研究銀萊湯對發熱大鼠體溫和血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響。方法 90只SD大鼠連續測溫3次，選取合格大鼠背部皮下注射20%干酵母混懸液10 mL/kg建立大鼠發熱模型，隨機平均分為正常組、模型組、阿司匹林組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組共6組，每組8只大鼠。分別于造模前0.5 h和造模后5 h兩次灌胃給藥，造模后每小時測溫一次，于末次給藥后3 h取血，通過ELISA和RIA方法檢測血清中炎性介質白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量水平。結果銀萊湯各劑量組體溫均低于模型組（P＜0.01）,銀萊湯各劑量組血清中IL-1β、TNF-α、IL-6含量均低于模型組（P＜0.05）。結論銀萊湯對發熱大鼠具有明顯的退熱效果，其作用機制可能與降低機體炎癥反應，減少血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的產生或加速降解相關。

銀萊湯；發熱；炎癥；IL-1β；TNF-α；IL-6

銀萊湯是谷曉紅教授在臨床中治療小兒外感發熱的經驗方，全方從肺胃同治角度立法，由金銀花、萊菔子、黃芩、連翹、前胡、魚腥草、瓜蔞七味藥組成，其中金銀花清肺胃之熱，又透達衛表之邪；萊菔子化滯消積，與金銀花共用為君；黃芩、連翹、前胡、魚腥草清宣肺熱；瓜蔞清降肺胃之火、潤腸通便，諸藥配伍，在臨床小兒外感發熱的治療上取得了較好療效[1]。本研究為了探討其解熱作用機理，采用建立大鼠發熱模型，觀察銀萊湯的解熱作用與調節血清中 IL-1β、TNF-α、IL-6 含量的關系。

1 材料和方法

1.1 材料

實驗動物：健康清潔級SD大鼠90只,雄性,體重 (150±20)g,購自斯貝福（北京）生物技術有限公司，許可證號:SCXK(京)2016-0002,飼養于北京中醫藥大學動物房實驗動物潔凈柜，飼養環境為明暗12 h循環,溫度為22～25℃，濕度50%～60%，自由進食、水。適應性喂養3天，為使實驗對象適應實驗操作，避免實驗當日應激性體溫升高，每日三個不同時間段各測量肛溫1次，每日共測量3次，第4天開始正式實驗。

1.2 試劑及儀器

中藥：銀萊湯處方為：金銀花30 g，萊菔子10 g，連翹15 g，黃芩10 g，前胡10 g，魚腥草20 g，瓜蔞15 g。飲片購自于北京中醫藥大學國醫堂。制備過程：（1）蒸餾提取金銀花、魚腥草、連翹三味藥的揮發油，封口膜封好，4℃保存備用；（2）其他藥物煎煮藥液，減壓濃縮藥液成膏狀，再加熱使藥液水分蒸發后干燥至固體，最后粉碎制成粉劑保存，使用時按比例滴加揮發油。陽性對照藥：阿司匹林腸溶片由拜耳醫藥保健有限公司生產，規格100 mg/片。干酵母粉由湖北安琪酵母有限公司生產。大鼠白介素 6（IL-6）酶聯免疫試劑盒（CSB-E04640r，規格96T）購于武漢華美生物工程有限公司，大鼠白細胞介素1β（IL-1β）放射免疫分析藥盒、大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）放射免疫分析藥盒均購于北京北方生物技術研究所有限公司。電子體溫計，MC-347,歐姆龍 （大連）有限公司生產。標準規格酶標儀，Multiskan MK3，Thermo Scientific公司生產。

1.3 方法

分組：大鼠于實驗環境中每日測量肛溫3次，使其適應，實驗前12 h禁食不禁水。實驗當日每小時測體溫1次，連續3次，3次體溫的平均值作為基礎體溫，正常范圍為 36.6～38.0 ℃，單次體溫＞38.0 ℃或3次肛溫波動＞0.3℃的大鼠淘汰。選取72只合格大鼠隨機分為6組：正常組、模型組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組，每組各12只。

造模：參照文獻方法[2]，健康成年SD雄性大鼠，背部皮下注射（sc）20%酵母混懸液10 mL/kg。正常組大鼠sc等體積生理鹽水。造模后每小時測量體溫一次，連續5次，體溫較基礎體溫升高0.8℃以上的大鼠為造模成功動物，剔除各組不符合造模成果標準的大鼠，最終每組8只。

給藥：造模前0.5 h，除正常組外，模型組給予超純水灌胃（ig），各給藥組給予相應藥物灌胃，灌胃后sc酵母混懸液，造模后5 h再次給藥（方式及劑量同首次）。各組每次ig給予藥物及劑量分別為:銀萊湯低、中、高劑量組分別予銀萊湯粉劑溶于無菌生理鹽水，按成人臨床用量的5倍、10倍、20倍量折算，折算后其生藥量濃度分別為 229.2 mg/mL、458.3 mg/mL，916.6 mg/mL 并按比例于臨用前滴加揮發油。阿司匹林組5 mg/mL灌胃。

觀察項目與指標檢測：從對大鼠給予sc干酵母混懸液開始，每1 h測量并記錄大鼠肛內溫度1次，末次給藥后3 h最后測溫1次，腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉，經腹主動脈采血，真空采血管分裝，離心并分離血清，將血清放置于-80℃冰箱內儲存，用于 IL-1β、TNF-α、IL-6 的測定。

1.4 統計學處理

統計數據分析采用SAS 9.3軟件進行分析，計量資料以均數“±s”表示。原始數據滿足正態分布及方差齊性，則采用單因素方差分析（one-way ANOVA），滿足正態分布且方差不齊，采用Welch檢驗，而組間兩兩比較則采用最小顯著差異t檢驗（LSD-t檢驗）。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 銀萊湯對發熱大鼠體溫的影響

各組大鼠的基礎體溫無統計學差異 （P＞0.05），即各組大鼠初始溫度無組間差異；造模后5 h，與正常組對比，模型組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組各組體溫有統計學意義（P＜0.01），但模型組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組體溫無統計學意義（P＞0.05），即除正常組外，各組造模成功，且造模各組溫度暫無組間差異；末次給藥后3 h，與模型組對比，銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組各組體溫有統計學意義（P＜0.01），與正常組對比，模型組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組各組體溫有統計學意義（P＜0.01），與阿司匹林組對比，銀萊湯高劑量組、銀萊湯低劑量組有統計學意義（P＜0.05）,銀萊湯各劑量間無統計學意義（P＞0.05）。見表 1。

表1 銀萊湯對發熱大鼠體溫的影響 (±s，n=8)

表1 銀萊湯對發熱大鼠體溫的影響 (±s，n=8)

注: 同正常組相比，aP＜0.01;同模型組相比，bP＜0.01；同阿司匹林組相比，cP＜0.05。

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2.2 銀萊湯對發熱大鼠血清 IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響

IL-1β：與正常組比較，模型組、阿司匹林組有統計學意義（P＜0.05），與模型組相比，銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組IL-1β 濃度有統計學意義（P＜0.05）。

TNF-α：與正常組比較，模型組有統計學意義（P＜0.05），與模型組相比，銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組TNF-α濃度有統計學意義（P＜0.05）。

IL-6：與正常組比較，模型組、銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組有統計學意義（P＜0.05），與模型組比較，銀萊湯高劑量組、銀萊湯中劑量組、銀萊湯低劑量組、阿司匹林組均有統計學意義（P＜0.05）。 見表 2。

表2 銀萊湯對發熱大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響(±s，n=8)

表2 銀萊湯對發熱大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響(±s，n=8)

注: 同正常組相比，aP＜0.05;同模型組相比，bP＜0.05。

組別正常組模型組銀萊湯高劑量組銀萊湯中劑量組銀萊湯低劑量組阿司匹林組IL-1β（ng/mL）0.13±0.03 0.18±0.05a 0.14±0.02b 0.11±0.02b 0.14±0.03b 0.10±0.03ab TNF-α（fmol/mL）7.96±13.8 11.12±0.87a 8.01±0.79b 7.17±0.71b 7.64±0.99b 7.03±1.05b IL-6（pg/mL）2.31±1.17 7.40±1.46a 4.91±0.63ab 3.70±1.18ab 4.28±0.78ab 3.13±1.35b

3 討論

外感發熱主要是指感受六淫之邪或溫熱疫毒之氣，導致營衛失和，臟腑陰陽失調，出現病理性體溫升高，可伴有惡寒、面赤、煩躁、脈浮數等臨床表現的一類外感病證[3]。作為溫病的主癥，發熱是機體對溫邪的一種全身性反應，根據病程階段不同，其相關臟腑有所差異，溫邪從口鼻上受而入，肺主氣，屬衛，外合皮毛，《素問·咳論》有言：“皮毛者，肺之合也。皮毛先受邪氣，邪氣從其合也?！睙嵊粜l表而為發熱。外邪入肺，陽明胃家對發熱的程度與轉歸有著重要的影響。陽明既為祛邪外達的途徑，又為營衛之氣的來源。若陽明有熱，則可引邪深入，病邪順傳于陽明，若陽明健運，則可鼓動衛氣，御邪外出，防邪深入，使病不致傳于中焦。正如王孟英所云：“肺胃大腸，一氣相通，溫熱究三焦，以此一臟二腑為最要，肺開竅于鼻，吸入之邪，先犯于肺，肺經不解，則傳于胃，謂之順傳，不但臟病傳腑為順，而自上及中，順流而下，其順也有不待言者，故溫熱以大便不閉者易治，為邪有出路也?！惫市皻怆m未入腑而無里結者，亦可在解表清熱方中配以理氣、運中、潤導之品，增強機體抵御外邪的同時給邪以出路，總要把握以逐邪為第一要義，正如吳又可所言“大凡客邪貴乎早逐”之理。銀萊湯由金銀花、連翹、黃芩、魚腥草、前胡、萊菔子、全瓜蔞七味藥組成。方中金銀花味甘性寒，清熱解毒而兼輕清宣透，且無苦寒傷胃之弊，善于清透肺胃之熱；萊菔子下氣化積，導滯祛邪，則熱邪無盤踞之處，勢必孤也，二藥共用為君。連翹體空質輕，上能清宣肺經熱邪，與金銀花相配，疏散清熱之功更勝，下可通利小便，而清利逐邪。更用苦寒之黃芩，清肺之功愈著；肺受熱灼，津液不布，痰熱蘊肺，故治以辛寒之魚腥草清熱宣肺化痰，全瓜蔞甘寒質潤，肺腸同治，上可清肺泄熱滌痰、利膈寬胸，下可滑腸通便；前胡功擅下氣，氣下則火降，痰亦降矣。其中連翹、前胡、魚腥草入肺經，清宣肺熱；金銀花、黃芩、萊菔子、全瓜蔞同入肺、胃、大腸經，上下同治。全方諸藥配伍，在上清宣太陰肺經之熱邪，在下清泄胃腸之積熱，共奏肺胃同治之效，故在臨床治療小兒外感發熱的過程中，往往收獲滿意療效。因此，肺胃同治在外感發熱治療過程中具有重要的臨床價值。

現代醫學基于“體溫調定點”學說，認為發熱是指當由于致熱源的作用使體溫調定點上移而引起調節性體溫升高的癥狀[4]。外源性致熱原主要通過激活血液中的中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和單核-吞噬細胞系統，使其產生并釋放內源性致熱原。IL-1β、TNF-α、IL-6均為重要的內源性致熱源，其在細胞內合成后即可釋放入血，通過血液循環進入腦內到達體溫調節中樞，體溫正調節介質釋放的增多以及體溫負調節介質釋放的減少，從而使調定點上移導致機體由于產熱增加和散熱減少出現發熱癥狀，與此同時，當外源性致熱源刺激機體而產生的炎癥反應過程中，一些細胞因子起到重要的促進作用，也包括 IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α 等可促進炎癥細胞的聚集、活化和炎癥介質的釋放，可直接刺激發熱中樞引起體溫增高[5-6]。

本實驗使用的酵母誘導的發熱模型基于酵母菌進入機體后，可激活內源性致熱源細胞產生和釋放內源性致熱源，進而作用于體溫調節中樞，引起發熱介質的釋放，繼而改變調定點。酵母菌的致熱特點具有先引起動物體溫下降，一段時間后體溫明顯升高，并持續較長時間[6]。由于注射部位的局部潰爛引起的劇烈炎癥反應導致動物全身表現與臨床伴內臟或皮膚明顯炎癥的里熱證類似[7]，對銀萊湯的解熱作用的考察尤為適宜。

實驗結果表明，銀萊湯各劑量均能降低發熱大鼠的體溫，阿司匹林對發熱大鼠體溫降低效果優于銀萊湯，根據比較均值判斷，銀萊湯中劑量退熱趨勢可能相對較佳。而對于血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響，銀萊湯均能降低其含量，且根據均值比較，中劑量存在效果較高劑量、低劑量更佳的作用趨勢，但較阿司匹林效果仍略低，故可知銀萊湯在大鼠酵母致熱作用下影響其血清IL-1β、TNF-α、IL-6的含量下降。

綜上所述，銀萊湯對大鼠酵母所致發熱具有明顯的解熱作用。其解熱機制之一可能是通過減輕機體因外源性致熱源進入體內所導致的全身性炎癥反應，減少血清中IL-1β、TNF-α、IL-6的產生或加速其降解而起到解熱作用。

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[4]王建枝,殷蓮華.病理生理學[M].北京：人民衛生出版社,2013:103-109.

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[6]趙國榮，張 衎，何宜榮，等.清熱解毒化濁片對ETM兔肝組織CD14及TNF-α、IL-1表達的影響[J].湖南中醫藥大學學報,2016,36（9）:26-28.

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（本文編輯 李 杰）

Effect of Yinlai Decoction on IL-1β,TNF-α,IL-6 Levels in Serum of Fever Rats

WAN Yuxiang,ZHENG Zian,BAI Chen,WANG Yunhui,YU He,LIU Tiegang*,GU Xiaohong*
（School of Basic Medical Science,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China）

ObjectiveTo explore the effect of Yinlai decoction on body temperature,Serum Content of IL-1β,TNF-α,IL-6 ofFeverRats.Methods90 maleratswererandomlydivided intonormalgroup,modelgroup,aspirin group,and high,middle and low dose Yinlaidecoction groups,8 rats in each group.Feverratmodels were induced with dorsal hypodermic injection of 20%dry yeast suspension,and they were fed with leechdom half an hour before building the fever model and 5 hours after building the fever model.The blood were taken at the 8th hour after building the model.The levels of IL-6,IL-1β and TNF-α in serum were detected by ELISA and RIA.ResultsTemperature in different doses of Yinlai decoction groups are lower than the model group (P＜0.01).The IL-1β,TNF-α,IL-6 levels in serum were significantly lower than those in the model group (P＜0.05).ConclusionYinlai decoction shows obvious anti-febrile effect on fever rats.Its mechanism may relate to restraining the inflammation reaction and reducing the expression of IL-1β,TNF-α,IL-6 in serum.

Yinlai decoction；pyrexia;inflammation;IL-1β;TNF-α;IL-6

R289.5；R392.7

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.11.004

本文引用：萬宇翔，鄭子安，白 辰，王云輝，于 河，劉鐵鋼，谷曉紅.銀萊湯對發熱大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響[J].湖南中醫藥大學學報，2017，37（11）：1184-1187.

2016-09-05

國家自然科學基金項目（81403328）；北京市教委產學研項目（1000062520040）；北京中醫藥大學自主選題資助項目（2016-JYBXS031）。

萬宇翔，男，碩士研究生，研究方向：運用溫病學辨治思路指導臨床相關熱證的研究。

* 劉鐵鋼，男，博士，副教授，E-mail：liutiegang2009@163.com；谷曉紅，女，博士生導師，教授，E-mail：guxh1003@163.com。