miR-125b調控ART4蛋白對肝癌細胞增殖和侵襲的影響①

李建華 韓 玲 楊志良

(新鄉市中心醫院普外科,新鄉 453000)

miR-125b調控ART4蛋白對肝癌細胞增殖和侵襲的影響①

李建華 韓 玲 楊志良

(新鄉市中心醫院普外科,新鄉 453000)

目的探討miR-125b對ART4蛋白的調控作用及在肝癌細胞中對其增殖和侵襲能力的影響。方法qPCR檢測肝癌組織和肝癌細胞中miR-125b的表達情況；過表達miR-125b 后qPCR檢測ART4的表達；雙熒光素酶實驗檢測miR-125b和ART4的關系；MTT實驗檢測過表達miR-125b對肝癌細胞增殖能力的影響；Transwell侵襲實驗檢測miR-125b的過表達對肝癌細胞侵襲能力的影響；MTT實驗檢測過表達ART4后逆轉miR-125b對肝癌細胞增殖能力的影響；Transwell侵襲實驗檢測過表達ART4后逆轉miR-125b對肝癌細胞侵襲能力的影響。結果miR-125b在肝癌細胞中表達水平較低，過表達miR-125b可以有效抑制ART4蛋白的表達；過表達miR-125b可以抑制肝癌細胞的增殖侵襲能力；過表達ART4后可以逆轉肝癌細胞被miR-125b抑制的增殖侵襲能力。結論miR-125b在肝癌中表達下調，同時miR-125b可以調控ART4的表達影響肝癌細胞增殖和侵襲能力。

miR-125b；肝癌；ART4；Transwell

肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球第二大癌癥死亡原因，是惡性腫瘤中發病率和死亡率居高不下的一種類型[1]。盡管目前針對肝細胞癌的手術、化療和生物治療方法都在不斷改善，但由于其本身高轉移率和術后高復發率，肝細胞癌患者的預后現狀很差，不能達到令人滿意的程度[2]。因此，研究肝癌發病的高危因素和了解其具體分子發病機制對改善肝癌患者的治療至關重要。

微小RNA(microRNA)是由20～24個核苷酸編碼的非蛋白質RNA，其可以通過靶向結合mRNA下游的39個非翻譯區位點，進而調控其靶基因的表達水平，干擾mRNA降解和翻譯過程[3,4]。目前已經鑒定出多種miRNA異常表達，與多種類型的惡性腫瘤進展相關[5,6]。最近有研究發現，miRNA在肝細胞癌中明顯下調，并且也顯示肝細胞癌的發生，轉移，復發和預后有一定相關關系[7,8]。然而，需要進一步的研究來確定miRNA對肝細胞癌發生發展的具體分子機制。以往研究報道，位于染色體脆性位點或異?；蚪M區域的幾種miRNA在人類惡性腫瘤的進展中起著致癌或抑癌作用[9]。 MiR-125b位于19q13，在多種人類腫瘤表達水平下調，例如，在乳腺癌ERBB2依賴性SKBR3細胞系中，通過過表達MiR-125b可以抑制乳腺癌細胞的生長，遷移和侵襲行為[10]。研究人員發現miR-125b可以抑制人胃癌細胞的增殖和侵襲，甚至減弱其耐藥性的產生[11]。此外，miR-125b在非小細胞肺癌中也存在表達水平降低的狀態，對肺癌細胞的侵襲和遷移具有抑制作用[12]。miR-125b的過度表達可以誘導高侵襲性卵巢癌細胞從間充質轉化為上皮形態，這表明miR-125b是卵巢EMT的負調節因子[13]。然而，目前尚沒有相關研究miR-125b在肝細胞癌中的表達和作用。

ART4是一類在結構上與ADP-核糖基轉移酶類似的修飾蛋白，其可以共價修飾細胞內影響細胞運動的靶蛋白，調控細胞的運動能力[14]。哺乳動物中ART由5名成員組成中分別是ART1～ART5，其中ART4已經在小鼠模型進行了廣泛的研究[15]。在5個已知的ART中，只有ART1、ART2和ART4才具有特異酶活性，ART3和ART5似乎已經失去了相應的催化活性，通常ART4在哺乳動物中表現為活躍蛋白[16]。因此，探討ART4的編碼序列及蛋白功能發展方式是目前研究的主要方向。

在本研究中，我們將肝細胞癌組織與配對鄰近非腫瘤肝組織相比，miR-125b在肝細胞癌組織中表達明顯下調，且miR-125b的異常表達可以抑制體外和體內肝癌細胞株的增殖和侵襲行為。因此，我們通過研究miR-125b與ART4的關系來進一步探討其對肝細胞癌抑制作用的具體機制。

1 材料與方法

1.1細胞株和相關試劑 細胞系和人體樣本人類肝癌細胞(SMMC7721，MHCC97L，MHCC97H)由復旦大學中山醫院肝癌研究所提供。 HepG2細胞系獲自武漢典型培養物保藏中心(ATCC號：HB-8065，Manassas，VA)。將所有細胞系在1640 DMEM培養基，含有10%FBS，100 mg/ml青霉素和100 mg/ml鏈霉素的培養基中，37℃在5%CO2培養箱中培養。來自醫院病理科的80例患者的組織型肝癌組織均獲得了醫院保護人類受試者委員會的批準，并獲得了所有患者的知情同意書。

1.2方法

1.2.1qPCR實驗 使用Trizol(Invitrogen)從細胞系和組織樣品中提取總RNA，并通過測量其在260 nm處的吸光度來定量測定總RNA的濃度。使用SYBRH Green PCR Kit進行qPCR分析。miR-125b和U6 snRNA的引物(內部對照)購自QIAGEN(MS00003423和MS00033740)。使用22DDCT方法計算肝癌組織和相鄰非腫瘤肝組織的mRNA的倍數變化。通過qPCR測定肝細胞癌細胞株中的相對mRNA水平，使用GAPDH作為內部對照引物。實驗重復3次。所使用的基因的引物如下。miR-125b的前體序列如下生成：正向5′-CTATGTTTGAATGA GGCTTCAG-3′和反向5′-CGCGTCGCCGCGTGTTT-AAACG-3′。

1.2.2Western印跡分析 使用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離總蛋白，并將其轉移到硝酸纖維素膜(Bio-Rad，Hercules，CA)。使用5%脫脂牛奶充分封閉膜，并與ART4抗體(濃度1∶1 000)，內參GAPDH(濃度1∶2 000)，4℃，孵育過夜。次日，TBST充分沖洗過后，使用二抗辣根酶標記物(濃度1∶5 000)孵育2 h，TBST充分沖洗過后，使用增強的化學發光試劑ECL顯影液檢測目標蛋白的表達水平。

1.2.3熒光素酶報告基因測定 驗證miR-125b和ART4的相關關系，我們使用雙熒光素酶測定，將24孔板中的miR-125b或NC細胞與0.4 mg螢火蟲熒光素酶報告載體和0.08 mg含有海腎螢光素酶(Promega)的pRL-TK對照載體共轉染，使用siPORTneoFX(Ambion，Austin，TX)，根據使用方法操作，在轉染后48 h制備裂解物。使用雙熒光素酶報告基因測定(Applied Biosystems)測量熒光素酶活性。將螢火蟲熒光素酶活性標準化后測定海腎螢光素酶活性。實驗重復3次。所使用的miR-125序列見上述1.2.1。

1.2.4MTT測定肝細胞癌細胞增殖的速度 將對數期細胞使用胰蛋白酶消化后，制成單細胞懸浮液并以1×103細胞/孔的密度接種到96孔板中。在細胞培養7 d后，加入20 μl MTT測定液，每孔充分混合均勻，并在37℃下孵育4～6 h。然后使用無菌吸管吸出上清液，每孔加入150 μl二甲基亞砜(DMSO)，在室溫下攪拌10 min保證晶體充分溶解。然后在24、48、72和96 h進行MTT測定波長為490 nm時的吸光度，計算肝癌細胞的增殖情況。實驗重復3次

1.2.5細胞侵襲測定 對肝癌細胞進行細胞遷移和侵襲能力測定。將SMMC7721細胞在含有0.1%FBS的DMEM中培養。 24 h后，在沒有FBS或HGF的DMEM中的2×105個饑餓過的細胞用含有基質膠的小室(直徑6.5 mm，孔徑為8 μmol/L，Corning，NY，USA)接種在上室中，將具有10%FBS和HGF(20 ng/ml)的培養基置于下腔中。在37℃下孵育24 h后，小心地去除上膜表面上的細胞。用95%乙醇固定20 min后，用0.5%結晶紫溶液染色10 min，自來水沖洗干凈過后，于倒置顯微鏡下計數。三次獨立測定后取其平均值。

1.3統計學分析 所有的統計分析均采用SPSS 16.0軟件包(SPSS，Chicago，IL)進行，P<0.05表示差異具有統計學意義。使用Wilcoxon秩和檢驗分析miR-125b在肝細胞癌和配對鄰近組織中的差異表達。采用單因素方差分析方法評估細胞增殖和侵襲試驗三項之間差異，采用最小差別t檢驗分析兩組。

2 結果

2.1MiR-125b在肝細胞癌組織和不同細胞株中的表達情況 使用qPCR檢測80例患者的肝細胞癌和配對臨近非腫瘤肝組織中miR-125b的表達情況。結果表明，與匹配的相鄰肝組織相比，miR-125b的表達在肝細胞癌組織中下調(圖1A)。在不同肝癌細胞株中，在所有4種肝癌細胞株(SMMC-7721、HepG2、MHCC-97L和HCC-LM3)中觀察到miR-125b的表達均較低，未超過50%相對表達量，其中(圖1B) SMMC-7721和其他細胞株相比，miR-125b表達最低，而且SMMC-7721的侵襲性相對較強。因此，我們選擇了SMMC-7721細胞株進行后續研究。

2.2雙熒光素酶驗證miR-125b與ART4的關聯 我們通過生物信息學分析發現，下游幾種致瘤性相關基因可作為miR-125b的潛在靶標，包括MMP11、ERBB2、ERBB3、EDN1、VEGF-A、ART4和BCL-9L等等。而且miR-125b和下游ART4基因有相似可結合的位點，為了驗證二者之間是否有調節關系，我們進行雙熒光素酶標記實驗。首先我們構建了攜帶3′-UTR的熒光素酶報告因子，其中每個基因的結合位點與miR-125b結合位點相對應。熒光素酶測定顯示miR-125b下游結合3′-UTR結合位點與ART4相符合，而不是其他靶點基因，過表達miR-125b可以導致熒光素酶活性的顯著降低(圖2B)。過表達miR-125b后可明顯抑制SMMC-7721細胞中ART4的表達(圖2A)。表明miR-125b可以調控下游ART4的基因表達情況，可能是通過調控ART4的表達影響肝癌細胞株的生物學行為。

圖1 miR-125b的表達在肝癌癌組織和細胞株中的表達Fig.1 Expression of miR-125b in liver cancer tissues and cell linesNote: *.P<0.05.

2.3過表達MiR-125b抑制肝癌細胞株的增殖能力 為了研究miR-125b對肝細胞癌增殖能力的影響，使用SMMC-7721細胞株進行質粒轉染以增加miR-125b的表達。如圖3所示，與對照組相比，qPCR分析證實，轉染miR-125-mimic后，SMMC-7721細胞株中miR-125b表達水平明顯上調。然后進行MTT實驗檢測miR-125b對SMMC-7721細胞增殖情況的影響。miR-125b-mimic組的細胞的生長速度比其對照組明顯減慢(P<0.01)，培養96 h后抑制效果顯示具有統計學意義(圖3)。綜上所述，過表達miR-125b后可以明顯抑制SMMC-7721肝癌細胞株的增殖能力。

圖2 miR-125b與ART4之間的相互關系Fig.2 Relationship between miR-125b and ART4Note: A.Effect of miR-125b on expression of ART4;B.Double luciferase to verify the relationship between miR-125b and ART4,*.P<0.05.

圖3 miR-125b對肝癌細胞增殖能力的影響Fig.3 Effect of miR-125b on proliferation of liver cancer cells

圖4miR-125b對肝癌細胞侵襲能力的影響

Fig.4EffectofmiR-125boninvasionoflivercancercells

Note: *.P<0.05.

圖5 過表達ART4可以逆轉miR-125b對肝癌細胞增殖能力的抑制Fig.5 Overexpression of ART4 can reverse inhibitory effect of miR-125b on proliferation of liver cancer cells

2.4過表達miR-125b抑制肝癌細胞侵襲能力 為了研究miR-125b對肝細胞癌侵襲能力的影響，使用SMMC-7721細胞株進行慢病毒轉染以增加miR-125b的表達。如圖4所示，Transwell侵襲實驗檢測miR-125b對SMMC-7721細胞增殖情況的影響。miR-125b-mimic組侵襲細胞數目比其對照組明顯減少[(186.5±15.1)% vs(48.4±4.2)%,P<0.01]，差異具有統計學意義(圖4，P<0.05)。綜上所述，過表達miR-125b后可以明顯抑制SMMC-7721肝癌細胞株的侵襲能力。

2.5過表達ART4可以逆轉miR-125b對肝癌細胞增殖能力的抑制 如上述實驗所示，過表達miR-125b后肝癌細胞株增殖能力受到抑制，然后我們miR-125b-mimic組細胞中過表達ART4蛋白，觀察肝癌細胞株的增殖能力是否能被逆轉。實驗結果(圖5)，miR-125b-mimic+LV5-ART4組肝癌細胞株的細胞生長速度快于對照組。我們可以得到結論，在肝癌細胞株中過表達ART4蛋白可以逆轉miR-125b對其的抑制能力，也側面說明了miR-125b和ART4之間有間接調控關系。

圖6過表達ART4可以逆轉miR-125b對肝癌細胞侵襲能力的抑制

Fig.6OverexpressionofART4canreverseinhibitoryeffectofmiR-125boninvasionoflivercancercells

Note: *.P<0.05.

2.6過表達ART4可以逆轉miR-125b對肝癌細胞侵襲能力的抑制 如上述實驗所示，過表達miR-125b后肝癌細胞株侵襲能力受到抑制，然后我們miR-125b-mimic組細胞中過表達ART4蛋白，觀察肝癌細胞株的侵襲能力是否能被逆轉。實驗結果如圖6，miR-125b-mimic+LV5-ART4組肝癌細胞株的細胞侵襲數目明顯多于對照組[(146.5±12.8)% vs(44.7±3.1)%,P<0.01]，差異具有統計學意義(P<0.05)。我們可以得到結論，在肝癌細胞株中過表達ART4蛋白可以逆轉miR-125b對其的抑制能力，也側面說明了miR-125b和ART4之間有間接調控關系。

3 討論

肝細胞癌(HCC)在全球范圍內都是影響人類健康的主要問題，對于感染了肝炎病毒的患者來說，肝癌的患病率會明顯升高[17]。目前手術仍是肝細胞癌最主要的治療療法，雖然化療、放療及生物療法一直在發展，但一切都是以手術為中心[18]。然而，超過80%的患者因肝功能受損或其他器官的原因，錯了肝移植的最佳時期，手術切除局部肝臟是唯一的治療方案[19,20]。因此，除了手術治療之外，尋找發現新的分子靶向治療方案顯得尤為重要，可以明顯延長肝癌晚期患者的生存率，改善其生存質量[21]。盡管目前尋找肝癌有效的治療靶向分子研較多，但是都尚在實驗室階段，探討其具體分子機制也是必要的過程[22]。

最近幾項研究表明，肝癌組織中多種miRNA的表達下調明顯，可能與肝細胞癌的惡性進展相關[23]。然而，由于miRNA可以在轉錄后調節數個下游靶信號通過相關信號通路影響腫瘤的行為，而信號通路的范圍較廣泛，未能徹底研究透徹，所以miRNA在肝細胞癌中的致癌原因和具體過程尚未得到充分的闡明。因此，探索肝癌腫瘤發展的miRNA的臨床潛力和分子機制對于延緩肝細胞癌發展和改善患者生活質量是有幫助的。

以前的研究表明miR-125b在多種不同類型的腫瘤中表達下調，包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌和胃癌等等[24-26]。而且人類miRNA微陣列的結果已經表明肝癌組織中miR-125b低表達水平是普遍存在的[27]。然而這些研究都很少關注肝癌患者腫瘤樣本中miR-125b與相關下游靶基因作用后對其治療和預后價值的估計。在本研究中，肝癌組織與匹配非腫瘤相鄰肝組織相比，我們首次證實了miR-125b在肝細胞癌中顯著下調，而且miR-125b的低表達狀態與肝癌患者的進展有一定關系。在肝細胞株中也同時觀察到miR-125b的表達水平較低，miR-125b的低表達水平可以抑制體外和體內肝細胞癌的增殖和侵襲行為。同時我們發現，MTT測定顯示，培養7 d后miR-125b對肝癌細胞的增殖的抑制具有統計學意義，然而細胞侵襲能力的測定結果為24 h，表明miR-125b對肝癌細胞侵襲能力的抑制作用不是由細胞增殖減少引起的。因此，需要進一步的實驗來闡明機制。

曾經有研究表明，miR-125b可以阻斷p53腫瘤抑制基因的翻譯過程，影響其下游基因的表達，并且干擾乙型肝炎病毒表面抗原的表達[28]。使用生物學信息檢測法的分析表明，以下幾種相關癌基因包括都是miR-125b的潛在靶基因，MMP11、EDN1、VEGF-A、ART4和BCL-9L。有趣的是，miR-125b的過度表達并沒有明顯抑制所有下游靶基因的表達情況，這證明對于不同類型的腫瘤來說，miR-125b的抑制作用是不相同的[29]。而且根據雙熒光素酶報道分析證實，在肝癌細胞中，ART4是miR-125b下游的有效靶基因。通過qPCR和Western blot蛋白質印跡分析的結果也進一步證實了這些發現的正確性?；谶@些數據，我們懷疑miR-125b可以通過下調ART4來抑制肝細胞癌的增殖和侵襲。

以前的研究表明，靶向沉默ART4的表達能夠在體內抑制腫瘤生長和腫瘤血管生成[30]，并且在缺氧條件下對肝細胞癌患者具有抗腫瘤功效[31]。我們的研究表明，ART4的上調可以逆轉miR-125b對肝細胞癌的抑制能力，進一步證實miR-125a通過調控ART4的表達發揮相應作用。

我們通過檢測肝癌細胞的生物學行為檢測發現，miR-125b的過表達可以抑制肝癌細胞的增殖和侵襲，通過前面實驗的結果，我們可以發現miR-125b在肝癌細胞中表達下調，ART4在肝癌細胞系中上調。于是我們推測，在生理狀態下，miR-125b保持穩定高表達的狀態，當外界因素或自身情況影響抑制miR-125b的表達進入病理狀態時，機體的平衡狀態被破壞，可能引起部分肝細胞的惡性突變，引發肝細胞癌的發生，且隨著病程進展，可以影響到肝癌細胞的生物學行為。綜上所述，本實驗闡明了miR-125b/ART4在肝癌中發生發展中的作用，有可能為肝癌的早期診斷和治療進展方面提供參考意見。

[1] Jemal A,Bray F,Center MM,etal.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[2] Bartel DP.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanism,and function[J].Cell,2004,116(2):281-297.

[3] 鄭榮壽,左婷婷,曾紅梅,等.中國肝癌死亡狀況與生存分析[J].中華腫瘤雜志,2015,37(9):697.

[4] Ding J,Huang S,Wu S,etal.Gain of miR-151 on chromosome 8q24.3 facilitates tumour cell migration and spreading through down regulating RhoGDIA[J].Nat Cell Biol,2010,12(4):390-399.

[5] He XX,Chang Y,Meng FY,etal.MicroRNA-375 targets AEG-1 in hepatocellular carcinoma and suppresses liver cancer cell growth in vitro and in vivo[J].Oncogene,2012,31(28):3357-3369.

[6] Yang F,Zhang L,Wang F,etal.Modulation of the unfolded protein response is the core of microRNA-122-involved sensitivity to chemotherapy in hepatocellular carcinoma[J].Neoplasia,2011,13(7):590IN3-600IN4.

[7] Caygill EE,Johnston LA.Temporal regulation of metamorphic processes in Drosophila by the let-7 and miR-125 heterochronicmicroRNAs[J].Curr Biol,2008,18(13):943-950.

[8] Garbuzov A,Tatar M.Hormonal regulation of Drosophila microRNA let-7 and miR-125 that target innate immunity[J].Fly,2010,4(4):306-311.

[9] 魯艷明,銀 鐸,王 寧,等.miRNA-200c 對卵巢癌細胞侵襲能力影響觀察[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(10):732-735.

[10] 李 楓,姚 麗,張喜紅,等.miRNA-22 在卵巢癌組織的表達及其對卵巢癌細胞增殖,遷移與侵襲的影響[J].中國病理生理雜志,2016,32(12):2251-2255.

[11] Kim SW,Ramasamy K,Bouamar H,etal.MicroRNAs miR-125a and miR-125b constitutively activate the NF-κB pathway by targeting the tumor necrosis factor alpha-induced protein 3(TNFAIP3,A20)[J].Proc Natl Acad Sci,2012,109(20):7865-7870.

[12] Jiang L,Huang Q,Zhang S,etal.Hsa-miR-125a-3p and hsa-miR-125a-5p are downregulated in non-small cell lung cancer and have inverse effects on invasion and migration of lung cancer cells[J].BMC Cancer,2010,10(1):318.

[13] Bi Q,Tang S,Xia L,etal.Ectopic expression of MiR-125a inhibits the proliferation and metastasis of hepatocellular carcinoma by targeting MMP11 and VEGF[J].PLoS One,2012,7(6):e40169.

[14] Parusel I,Kahl S,Braasch F,etal.A panel of monoclonal antibodies recognizing GPI-anchored ADP-ribosyltransferase ART4,the carrier of the Dombrock blood group antigens[J].Cell Immunol,2005,236(1):59-65.

[15] Friedrich M,Grahnert A,Hauschildt S.Analysis of the 3′ UTR of the ART3 and ART4 gene by 3′ inverse RACE-PCR[J].DNA Sequence,2005,16(1):53-57.

[16] Durousseau de Coulgeans C,Chiaroni J,Bailly P,etal.Sequencing of the ART4 gene in sub-Saharan cohorts reveals ethnic differences and two new DO alleles:DO* B-Ile5Thr and DO* B-Trp266Arg[J].Transfusion,2015,55(10):2376-2383.

[17] 李 焱,程 朋.中晚期肝癌臨床治療進展[J].臨床肝膽病雜志,2014,30(3):233-236.

[18] 戴朝六,趙 陽.原發性肝癌的綜合治療[J].中國普外基礎與臨床雜志,2014,21(2):133-137.

[19] Murakami Y,Yasuda T,Saigo K,etal.Comprehensive analysis of microRNA expression patterns in hepatocellular carcinoma and non-tumorous tissues[J].Oncogene,2006,25(17):2537-2545.

[20] 褚志強,吳向未,楊宏強,等.原發性肝癌手術治療的生存率分析及影響因素研究[J].實用醫學雜志,2013,29(5):787-789.

[21] Meng F,Henson R,Wehbe-Janek H,etal.MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer[J].Gastroenterology,2007,133(2):647-658.

[22] Wang J,Liu X,Wu H,etal.CREB up-regulates long non-coding RNA,HULC expression through interaction with microRNA-372 in liver cancer[J].Nucleic Acids Res,2010,38(16):5366-5383.

[23] Zhang Y,Gao JS,Tang X,etal.MicroRNA 125a and its regulation of the p53 tumor suppressor gene[J].FEBS Lett,2009,583(22):3725-3730.

[24] Wojtowicz EE,Walasek MA,Broekhuis MJC,etal.MicroRNA-125 family members exert a similar role in the regulation of murine hematopoiesis[J].Exp Hematol,2014,42(10):909-918.e1.

[25] 郭曉東,張 璇,劉樹紅,等.miRNA-125 在肝癌中表達變化的研究[J].現代生物醫學進展,2013，(7):1253-1255.

[26] Potenza N,Papa U,Mosca N,etal.Human microRNA hsa-miR-125a-5p interferes with expression of hepatitis B virus surface antigen[J].Nucleic Acids Res,2011:gkr067.

[27] Raskopf E,Vogt A,Sauerbruch T,etal.siRNA targeting VEGF inhibits hepatocellular carcinoma growth and tumor angiogenesis in vivo[J].J Hepatol,2008,49(6):977-984.

[28] Jopling CL,Yi MK,Lancaster AM,etal.Modulation of hepatitis C virus RNA abundance by a liver-specific MicroRNA[J].Science,2005,309(5740):1577-1581.

[29] 劉建華,程 濤,王洪敏,等.血清 miRNA 表達水平檢測與原發性肝癌早期診斷的研究[J].熱帶醫學雜志,2010,10(6):666-668.

[30] Fan R,Li X,Du W,etal.Adenoviral-mediated RNA interference targeting URG11 inhibits growth of human hepatocellular carcinoma[J].Int J Cancer,2011,128(12):2980-2993.

[31] Ezzat WM,Amr KS.Insights for hepatitis C virus related hepatocellular carcinoma genetic biomarkers:Early diagnosis and therapeutic intervention[J].World J Hepatol,2016,8(30):1251.

EffectsofmiR-125bonproliferationandinvasionofhepatocarcinomacellsbyART4protein

LIJian-Hua,HANLing,YANGZhi-Liang.

DepartmentofGeneralSurgery,XinxiangCentralHospital,Xinxiang453000,China

Objective:To investigate the effect of miR-125b on ART4 protein and its effect on proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma cells.MethodsThe expression of miR-125b in hepatocellular carcinoma and hepatocellular cells was detected by qPCR.The expression of miR-125b and ART4 was detected by qPCR after overexpression of miR-125b.The expression of miR-125b and ART4 was detected by double luciferase assay.The effect of miR-125b on the proliferation of hepatoma cells was detected by MTT assay.The effect of miR-125b on the invasion of hepatoma cells was detected by Transwell invasion assay.MTT assay was used to detect the effect of miR-125b on the proliferation of hepatoma cells after overexpression of ART4.Transwell invasion assay was used to detect the effect of miR-125b on the invasion of hepatoma cells after overexpression of ART4.ResultsThe expression of miR-125b in hepatoma cells was low,and overexpression of miR-125b could inhibit the expression of ART4 protein.Overexpression of miR-125b could inhibit the proliferation and invasion of hepatoma cells.Overexpression of ART4 could reverse the proliferation and invasion of hepatoma cells by miR-125b.ConclusionExpression of miR-125b in hepatocellular carcinoma was down-regulated.Meanwhile,miR-125b can regulate the expression of ART4 and affect the proliferation and invasion of hepatoma cells.

miR-125b;Hepatoma;ART4;Transwell

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.12.002

R735.7

A

1000-484X(2017)12-1765-06

①本文為河南省醫學科技攻關計劃基金資助項目(201602362)。

李建華(1973年-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事胃腸肝膽方面的研究，E-mail：yisheng111yy@163.com。

[收稿2017-05-31 修回2017-07-13]

(編輯 張曉舟)

·啟事·

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《中國免疫學雜志》編輯部