貂狐貉犬瘟熱疫苗研究進展

張爽，尹茉莉 ，冷雪，李福軍

（1.吉林市園林管理中心，吉林 吉林 132000；2.吉林醫藥學院，吉林 吉林 132000；3.吉林農業大學，吉林 吉林 130000）

犬瘟熱（Canine distemper，CD）是一種急性、熱性的病毒性傳染病?？筛腥舅?、狐、貉等多種動物，是我國毛皮動物的一種重要的傳染病[1]。在全世界大部分國家和地區均有犬、狐、貉、水貂和多種野生動物暴發犬瘟熱的報道。死亡率很高，平均為23.2%，每年不斷暴發流行，發病率約10%，給毛皮動物養殖業造成了巨大的經濟損失[2]。目前，預防犬瘟熱最有效的方法是免疫接種犬瘟熱疫苗。在毛皮動物養殖業，傳統疫苗的使用一直是該病的主要防控手段，但是隨著科學技術的發展，各類新型疫苗已被深入研究，并取得較大進展。

1 滅活疫苗

Puntoni首次使用福爾馬林滅活感染CDV的犬腦組織，制備了組織滅活苗，該疫苗無法有效地控制犬瘟熱。夏咸柱等用靜水壓高壓方法滅活CDV后，以蜂膠為佐劑制備的犬瘟熱滅活疫苗，該疫苗對犬的保護率達89%。國外對于水貂、狐、貉犬瘟熱的防治曾使用臟器滅活疫苗，由于犬瘟熱滅活苗免疫原性差、產生抗體水平較低、保護期短等缺點，現已很少使用。

2 弱毒活疫苗

國外研制多種疫苗用于犬瘟熱的防治，在弱毒活疫苗研究方面曾使用雞胚成纖維細胞制備弱毒疫苗，目前主要使用Vero細胞傳代制備犬瘟熱弱毒疫苗。在我國從60～80年代學者主要從國外引進的弱毒疫苗中分離毒種，接種雞胚成纖維細胞制備水貂犬瘟熱弱毒疫苗,如錢國成等從國外水貂犬瘟熱弱毒疫苗中分離出左FDV3毒種，接種雞胚致病變，成功研制了水貂犬瘟熱弱毒雞胚細胞疫苗，經過實驗證明，能控制犬瘟熱流行。目前，國內也使用Vero細胞增殖犬瘟熱病毒制成犬瘟熱弱毒活疫苗，目前國內使用最廣泛的犬瘟熱弱毒疫苗主要有吉林特研生物技術有限責任公司生產的水貂犬瘟熱活疫苗（濕苗、凍干苗）、齊魯動物保健品公司生產的犬瘟熱凍干活疫苗，能有效的防治、控制毛皮動物犬瘟熱的發生。由于水貂犬瘟熱活疫苗存在毒種變異、散毒、不利于保存等問題，研制一種安全有效的疫苗防控毛皮動物犬瘟熱發生具有重要意義。

3 重組活載體疫苗

活載體疫苗是應用基因工程技術將能夠刺激機體產生強烈免疫應答的相關抗原基因通過某些非致病性病毒或細菌進行表達，然后利用分子生物學的方法將一種抗原基因整合入另一種病原的非編碼區內構成的重組活載體疫苗。在研究犬瘟熱重組活載體疫苗時國內外學者使用痘病毒和腺病毒為載體的較多。

4 基因疫苗

基因疫苗是指將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達系統的質粒上，然后將質粒直接導入人或動物體內，讓其在宿主細胞中表達抗原蛋白，誘導機體產生免疫應答。

張紹興為了研制新一代安全、高效的基因工程疫苗,將構建的真核表達質粒pIRES H、pIRES F、pIRES N1和pIRES N2為基因疫苗,進行了小鼠和貉子的動物免疫試驗,對免疫鼠和貉子體內免疫應答水平進行了ELISA檢測,并對貉子進行了攻毒保護實驗。結果顯示所構建的基因疫苗可以誘導小鼠和貉子產生特異性免疫應答反應，基因疫苗免疫貉子后的保護率為33%～77%，對犬瘟熱基因免疫進行了初步研究，為進一步研究奠定了基礎。羅彬構建帶有 CDV-H 、N及2者聯合表達的pVAX真核重組質pVAX-CDV-H、pVAX-CDV-N、pVAX-CDV-H-N，為探索犬瘟熱病毒DNA疫苗免疫效果，免疫Balb/c小鼠，設立注射劑量梯度，使用間接ELISA試驗檢測小鼠血清中抗體水平。確定了試驗中最佳免疫劑量為10μg～30μg，聯合表達載體效果優于單獨表達。蘇鳳艷等應用已構建的水貂源犬瘟熱病毒F基因真核表達質粒pcDNA3.1-CDVF肌注免疫日本大耳白兔，在兔體內初步探討其免疫應答，為研究在自然宿主水貂體內免疫試驗打下基礎。實驗結果顯示該重組表達質粒在家兔體內產生了針對CDV的特異性抗體，該基因疫苗的免疫效果不及弱毒疫苗，但可刺激機體產生細胞免疫且安全性較好。

隨著我們特種毛皮動物飼養規模的加大，而特種毛皮動物飼養管理水平較落后，使我國毛皮動物犬瘟熱常呈流行性爆發，嚴重威脅毛皮動物的生命安全。目前，對于犬瘟熱疫病防控主要使用的犬瘟熱弱毒活疫苗，該疫苗免疫效果好并且遺傳穩定，但是存在弱毒疫苗可能會發生毒力反祖現象或者與野生毒株發生基因重組的現象，同時弱毒疫苗穩定性較差，要求有較高的保存和運輸條件?；诜肿由飳W研究的不斷深入，使我國犬瘟熱基因工程疫苗的研究取得了長足的進展，為尋求更安全、更有效的新型犬瘟熱疫苗奠定基礎，對于我國毛皮動物犬瘟熱疫情的防控具有重要意義。

[1]王珺瑋.貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學特性研究[D].南京:南京農業大學,2008.

[2]羅國良,趙建軍,張海玲,等.2006-2007年我國水貂、狐和貉主要疾病發生和流行情況調查與分析[J].特產研究,2008,30（4）：71-74.