IL-10基因的單核苷酸多態性與兒童哮喘的相關性研究*

甄 宏，謝慶玲，唐曉燕，譚 穎（廣西壯族自治區人民醫院兒科，廣西南寧530021）

兒童哮喘是常見的呼吸道疾病，對兒童的身體健康造成嚴重的影響，臨床表現有胸悶、氣促、咳嗽、喘息等。變應性體質和家族遺傳的基因特征是兒童哮喘重要的易感因素，被認為是一種多基因遺傳性疾病[1]。有報道顯示，白細胞介素-10（IL-10）基因與哮喘發病相關，IL-10基因中的單核苷酸多態性（SNP）位點與兒童哮喘的易感性有一定相關性。本研究對IL-10基因的SNP進行研究，探討其與兒童哮喘易感性的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2004年1月至2005年8月收治的84例兒童哮喘患兒作為哮喘組，其中男49例，女 35 例；年齡 6～14 歲，平均（8.96±1.64）歲；漢族 57例，壯族27例。84例患兒均為廣西本地人，符合《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》中的相關診斷標準，排除嚴重肝腎相關疾病者及其他慢性呼吸系統疾病者。選取同期116例無血緣關系的健康體檢兒童作為對照組，其中男 66例，女 50例；年齡 5～15歲，平均（9.10±1.47）歲；漢族79例，壯族 37例。2組性別、年齡、民族比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。哮喘組血清總IgE水平明顯高于對照組。

表1 IL-10基因5個SNP位點引物序列

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA的提取 采集2組受檢人員的外周血，使用美國Promega公司生產的基因組提取試劑盒，嚴格參照說明書進行操作，順利提取基因組DNA后，對DNA的樣本純度進行嚴格的質量檢測，之后將其保存于-20℃的環境下。

1.2.2 基因多態性分析 通過MassARRAY系統（美國Sequenom公司）采用基于基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜技術（MALDI-TOF）完成。檢測IL-10基因rs1800871、rs1800872、rs1800896、rs3024492 和 rs3024496 SNP位點的基因型變化。引物序列見表1。

1.2.3 血清總IgE水平的測定 采用免疫發光法測定血清總IgE水平，以IgE水平超過1 000 kU/L為高IgE水平。

1.3 統計學處理 用直接記數法計算各組IL-10基因SNP的等位基因頻率。2組間基因頻率的比較采用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗。IL-10基因SNP位點各基因型所對應的IgE水平數據以±s表示，比較采用方差分析?；蝾l率在哮喘組和對照組間有差異的基因認為可能是哮喘關聯基因，進一步采用多因素logistic回歸分析查找IL-10基因與哮喘發病的相關單體型，并校正民族因素影響。計算OR值及其95%CI，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 IL-10基因SNP分型結果 成功獲得84例哮喘患兒和116例健康對照兒童IL-10基因5個SNP位點的分型資料。在對照組中，漢族與壯族各位點均達到Hardy-Weinberg遺傳平衡（P＞0.05），見表2。

2.2 2 組5個SNP位點的基因型構成比比較 哮喘組rs1800871、rs1800872、rs1800896、rs3024492、rs3024496這5個SNP位點的基因型構成比與對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表3。

2.3 IL-10基因SNP位點各基因型與哮喘患兒的高IgE水平的相關性分析 IL-10基因SNP rs1800871位點的TT基因型攜帶者和rs1800872的AA基因型攜帶者血清IgE水平較高，與其他基因型的血清IgE水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表4。rs1800871位點的TT基因型攜帶者和rs1800872的AA基因型攜帶者更容易表現為高 IgE水平（OR=5.000、4.599，95%CI1.926～24.709、1.012～22.452，P=0.033、0.046）。

表2 對照組IL-10基因5個SNP位點Hardy-Weinberg平衡定律檢驗結果

表3 2組5個SNP位點的基因型構成比比較（%）

表4 IL-10基因SNP位點各基因型所對應的IgE水平（±s，kU/L）

表4 IL-10基因SNP位點各基因型所對應的IgE水平（±s，kU/L）

SNP位點rs1800871基因型IgE水平FP 8.359＜0.05 TT TC或CC 872.9±1 313.5 422.9±537.8 rs1800872 7.314＜0.05 AA AC或CC 799.3±1 274.9 455.6±534.0 rs1800896 0.429＞0.05 AA GA 683.5±1 073.5 452.5±761.3 rs30244920.302＞0.05 AA TA 661.3±1 042.3 402.7±487.1 rs30244960.060＞0.05 TT CT 662.3±1 049.2 553.7±966.6

3 討 論

哮喘是臨床醫學中的常見病與多發病，其可發生在任何年齡階段，而兒童階段的發病率最高[2]。該病對兒童的身心健康造成嚴重的影響，干擾兒童的正常生活與學習，給社會造成巨大的經濟負擔。國內研究顯示，近年來，隨著我國人民生活水平的提高及生活環境、生活方式的改變，兒童哮喘的發病率呈現逐年增長的趨勢，與20世紀90年代相比，我國兒童哮喘的發病率上升50%，兒童哮喘已經成為全世界共同面臨的主要公共衛生問題之一，不容忽視[3]。兒童哮喘的發病原因較為復雜，環境、遺傳等因素均與其有著密切的關系。國內有研究顯示，SNP與兒童哮喘易感性有一定的相關性[4]。

SNP是人類最常見的一種可遺傳變異，其主要指基因序列的單個核苷酸出現變異，從而導致DNA序列的多態性。SNP廣泛存在于人類基因組中，在所有的已知多態性中占90%以上。朱瑮等[5]指出，SNP對人體的細胞功能影響較小，但其在一定程度上增加了患病的可能性，同時對藥物的敏感性有一定的影響。目前，SNP所展現的多態性通常只涉及單個堿基的變異。閆梅等[6]認為，SNP既可應用在生物治療及基因制藥方面，又可應用于基因組數識別方面，在未來遺傳研究中將發揮著重要作用。在綜合分析SNP定位、連鎖不平衡等方面時，可以探索與疾病易感性有關的遺傳多態性，判斷有某種基因型的個體患某種疾病的風險，為疾病關聯性的進一步研究提供重要依據，為疾病的個體化治療提供可能性[7]。近年來，我國在SNP研究方面有了較大的發展，而隨著第3代遺傳標記圖的繪制，SNP在某些精神類疾病、糖尿病、哮喘、心血管疾病、癌癥等疾病發病過程中的作用逐漸被挖掘出來，SNP已經成為某種疾病相關性研究及臨床個體化治療的關鍵因素之一[8]。

IL是在白細胞或免疫細胞間相互作用，具有抗炎、免疫抑制等多種功能的細胞因子，其也是影響兒童哮喘的重要細胞因子，對哮喘氣道炎癥具有一定的調控作用，氣道局部IL-10分泌不足，可能是一些過敏性疾病及哮喘的一個易加重因素或易感性因素[9]。IL-10是單肽鏈糖蛋白，含有178個氨基酸殘基，其基因為單拷貝基因，主要定位在第1號染色體上，臨床試驗表明，IL-10與其他細胞因子基因的核苷酸序列不存在同源性[10]。陽愛梅等[11]在臨床研究中發現，IL-10的分泌受到遺傳的影響，遺傳決定了其3/4的分泌，此外，IL-10的產生受轉錄水平的調控，尤其是基因多態性的調控，因而可致使哮喘患兒mRNA表達水平及IL-10水平低于健康兒童。廖興娟等[12]指出，IL-10基因中的SNP位點與兒童哮喘的易感性相關，究其原因，可能是影響IL-10的表達水平，因此，目前的研究主要集中在IL-10基因啟動子區的SNP位點。為了解IL-10基因的SNP與兒童哮喘的相關性，本研究以廣西壯族自治區哮喘患兒84例及116例健康兒童作為研究對象，采用MALDI-TOF檢測了 IL-10基因 SNP（SNP位點包括 rs1800871、rs1800872、rs1800896、rs3024492 和 rs3024496）的分型變化，采用免疫發光法測定哮喘患兒的血清總IgE水平，結果顯示，所檢測得到的SNP基因頻率均達到Hardy-Weinberg遺傳平衡（P＞0.05），提示所取樣本具有一定的人群代表性。本研究發現，這5個位點的基因型構成比在哮喘組和對照組間無顯著性差異（P＞0.05）；rs1800871位點的TT基因型攜帶者和rs1800872的AA基因型攜帶者，血清IgE水平較高，與其他基因型的血清IgE水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。分析還發現，rs1800871位點的TT基因型攜帶者和rs1800872的AA基因型攜帶者更容易表現為高IgE水平（OR=5.000、4.599，95%CI1.926～24.709、1.012～22.452，P=0.033、0.046）。

綜上所述，IL-10基因的SNP與兒童哮喘的發病不相關，但與哮喘兒童的血清高IgE水平相關。rs1800871位點的TT基因型和rs1800872位點的AA基因型可能是哮喘兒童高IgE水平的易感基因型。

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[5]朱瑮，魯衍強，薛琰，等.云南省個舊市哮喘兒童IL-13基因多態性與血清總IgE水平的相關性研究[J].中國婦幼保健，2017，32（2）：322-323.

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