紫彩血蛤育苗過程中單胞藻培育技術

田璐　李媛媛　陳曉玲　朱文博　李達　孫遠遠　郭建軍

摘要：單胞藻作為貝類育苗過程中的重要生物餌料，其培育技術是貝類繁育的重要環節。因此為探索研究紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）苗種繁育中所需單胞藻培育及投喂技術，結合日照地區水文條件開展紫彩血蛤苗種單胞藻培育實驗。實驗結果表明利用多種藻類分階段混合投喂有助于紫彩血蛤幼蟲發育?？偨Y實驗結果得到一套繁育速度快、密度高的單胞藻培育技術，及其適宜紫彩血蛤幼蟲發育的投喂方式，以期為紫彩血蛤苗種繁育提供理論支撐。

關鍵詞：單胞藻培育技術；紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）；餌料

單胞藻一般為幾微米到幾十微米的單細胞藻類或者單細胞藻群體。單胞藻含有豐富營養，不僅可以作為貝類及其他水生生物的直接或間接餌料，還是水中溶解氧的重要來源。作為海珍品苗種培育的重要基礎生物餌料，目前生產條件下單胞藻培育仍然受到諸多條件的制約，如氣候、設備、操作方法等，因此為解決單胞藻餌料供應對育苗生產的不利影響，單胞藻的培育技術及其應用成為了貝類及其他水生生物工廠化生產的重要課題。筆者通過多年來單胞藻培育的經驗，總結出一套單胞藻培育技術并開展了其在紫彩血蛤育苗中的應用試驗，以期為單胞藻快速培育技術的推廣提供一定理論基礎。

1單胞藻培育技術

1.1培養設施

為了適應紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）生產季節所需并保持單胞藻的高純度，在育苗場所附近應建有專用的藻類保種室及擴種室或擴種棚，其面積按照育苗規模進行計算。一般1 000 m3水體的育苗廠，需配備20～30 m2的保種室一間。保種室需保證采光條件良好，可加裝人工光源，以防止連續陰雨天對藻類生長的影響。另外，在夏季高溫期應安裝遮光設施，同時進行通風或者降溫處理。

對純凈優質的藻類進行保種與擴種生產，保種需用容器常見為3 000 mL或5 000 mL的三角燒瓶及透明塑料桶（20 L）及煮沸過濾海水；擴種則需容器為細口瓶（20 L）、白塑料桶（50 L或者500 L）及消毒過濾海水。本實驗未使用常見尼龍袋（30 L蝦苗袋）進行擴種，原因為尼龍袋易破損導致擴種過程發生交叉污染現象。以上設施均需安置于通風良好的專用擴種室或四面采光良好的擴種棚內，并加裝可移動遮光簾調節光線。

藻類三級擴種池應單獨設置，培養室需采用透明玻璃鋼瓦，并及時更換透光不良的鋼瓦，保證采光率70%以上。培養室需通風良好，并安裝遮光設施，池深不超過1 m。

1.2培養用水

一級保種用水為潔凈砂濾海水經脫脂棉過濾沉淀后，煮沸冷卻后使用。二級擴種用水為潔凈砂濾海水煮沸冷卻使用，同時也可混合使用一級保種用水及NaCIO消毒后過濾海水。三級擴種用水為潔凈砂濾海水經蛋白分離器處理后利用NaCIO消毒處理曝氣2 h以上，靜止沉淀24 h以上，經Na2S2O3中和至無余氯為止后使用。

1.3一級培養（保種）

紫彩血蛤育苗階段開始于每年3至4月份，育苗階段開始前藻類提前進入保種及快速擴種階段，一般開始于每年1月份。保種常用藻類種類為球等鞭金藻（Isochrysis galbana）、叉鞭金藻（Dicrateria inornata）、角毛藻（Chaetoceros calcitrons）、扁藻（Platymonas spp.）、小球藻（Chlorella spp.）等，藻種適宜生長溫度如表1所示。

本試驗藻種購買于中國海洋大學及中國科學水產研究所黃海水產研究所的優質純種藻種。首次接種到1～2只三角燒瓶中，接種比例1：1，較高接種比例可保證藻種盡快適應培養用水。培育密度達到一定要求后添加消毒海水與營養液。藻液滿瓶后，利用瓶接瓶方式快速分瓶培養。接種過程中容器、工具均須經煮沸消毒后使用，接種后瓶口用雙層經消毒過的濾紙包扎，放在保種室內光照合適的位置培養，每天搖動2～4次。

1.4二級培養

二級擴種過程選用部分細口瓶及白色塑料桶進行封閉式擴種，塑料桶體積分為50 L和500 L兩種規格。細口瓶具有透光度高、密封條件好、不易污染等特點，但由于接種及搬運過程中易碎僅少量應用于光照照度要求較高的藻種。白色塑料桶具有消毒方便、接種及搬運易操作，且可重復使用的優點，但透光性較差。

利用50 L塑料桶接種時，需先清洗干凈，后加滿過濾海水及適宜濃度的NaCIO進行浸泡消毒，浸泡時間不得少于12 h。待浸泡時間到，中和余氯后倒出部分海水，按照比例加入營養鹽后進行接種，連接充氣管，加蓋尼龍薄膜進行通氣培養。接種好的塑料桶需放置于適宜光照條件下的擴種棚或擴種室內，高溫期適當進行遮光通風，以免由于溫度過高影響藻類生長。500 L塑料桶與50 L塑料桶相比較，雖然在接種過程中操作較困難，但接種后藻類生長速度快、抗污染能力高、可實現快速擴種，因此在溫度達到藻種適宜生長溫度時可選用。

二級擴種過程一般分為（1）瓶接桶擴種，接種密度為：金藻、角毛藻50×10⁴ind·mL^-1以上；扁藻10×10⁴ind·mL^-1以上。先接種至桶的1/4～1/3體積，隨著單胞藻生長逐漸加滿培養液。（2）桶接桶擴種，待達到較高生長密度后，利用分桶的方式繼續進行接種培養，利用這種方式可實現藻類快速擴種，但易發生污染，建議接種次數不超過3次。接種比例不低于1：20。

1.5三級培養（生產性培養）

利用NaCIO消毒培養池并中和后使用。接種盡量選擇在晴朗天氣的早上，適宜的環境條件有助于確保接種成功。接種密度為：金藻40×10⁴～50×10⁴ind·mL^-1，扁藻8×10⁴～10×10⁴ind·mL^-1。接種時加入消毒海水15～30 cm，按照藻種類型加入相應比例營養鹽，并充氣。接種后視天氣情況，根據藻液密度加水及施肥。投喂前需停止施肥1～2 d。當藻液達到一定密度且鏡檢無污染情況下可進行分池培養，抽取1/3～1/2左右藻液進行接種，留下藻液加入消毒海水繼續培養。

三級培養過程中，即使在通氣培養條件下，還需要適當進行攪池，一般每日2～4次。同時應注意隨著藻液水位的變化適當調節光線，保證藻類采光。

1.6營養鹽

藻類生長需要適當的營養鹽，本試驗藻類培養采用的營養鹽主要參照竺俊全等及孫成渤等所采用的的單胞藻培養所需營養鹽配方。

2紫彩血蛤幼蟲不同發育階段投喂情況

貝類人工育苗過程中適宜的幼蟲餌料是決定育苗成功的關鍵，孫虎山等實驗證明紫彩血蛤幼蟲發育至面盤幼蟲后添加適宜餌料，可縮短幼蟲培養周期，并保證幼蟲變態發育整齊。本實驗通過總結孫虎山等實驗結果結合日照地區紫彩血蛤生長狀況，探索出適宜日照地區紫彩血蛤幼蟲發育的餌料投喂方法，具體情況如表2所示。試驗數據顯示，根據紫彩血蛤幼蟲發育的不同時期，混合投喂多種餌料，可以有效促進幼蟲發育并且變態整齊，有利于后期培育。

3總結

本試驗總結的單胞藻培育技術可操作性強，培養速度快，不易污染，但仍需要注意消毒，尤其是接種過程中各個環節均需多次消毒。另外，利用蛋白分離器處理過濾海水后可以有效減少橈足類等對單胞藻的造成的生物污染。通過該方法培養的單胞藻投喂紫彩血蛤后，紫彩血蛤幼蟲發育良好，變態整齊。