瘦素及瘦素受體與子宮內膜異位癥關系分析

楊麗玲 陳俊 張翔珍

瘦素是一種脂肪細胞衍生蛋白，其主要生理功能是調節食物的攝取和能量的消耗［1］。有研究表明瘦素在炎癥、血管再生以及生殖功能等生理進程中起到了重要的內分泌調節作用［2］。子宮內膜異位癥是指在子宮肌層或者子宮腔被覆內膜以外部位生長的子宮內膜組織，經過生長浸潤后可出現出血、結節以及腹腔包塊等，常導致患者不孕不育，從而造成常人難以忍受的疼痛［3］。本資料選取子宮內膜異位癥患者作為內異組以及同期行輸卵管結扎術的婦女作為對照組，通過比較兩組間相關組織內瘦素及瘦素受體的表達情況，探討瘦素在子宮內膜異位癥中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014年8月至2016年12月在本院診治的32例子宮內膜異位癥患者作為內異組，并選取同期因子宮肌瘤行子宮切除術的32例患者作為對照組。內異組年齡23～51歲，平均年齡（30.6±1.5）歲。身體質量指數（BMI）20～30kg/m2，平均（21.6±1.5）kg/m2。對照組年齡 21～49歲，平均年齡（30.2±1.8）歲。BMI 20～30kg/m2，平均（20.9±1.3）kg/m2。兩組年齡、BMI等一般資料比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。內異組納入標準：（1）正在準備開腹手術或腹腔鏡手術患者。（2）卵巢單側或者雙側子宮內膜異位囊腫。對照組納入標準：（1）正在準備小型開腹或者腹腔鏡輸卵管結扎術。（2）無任何子宮內膜異位癥并且無卵巢病變。本項目獲得醫院倫理委員會批準和患者知情同意。

1.2 樣本的準備 兩組患者在麻醉前經靜脈抽取5ml血液于抗凝管中，靜置30min后，離心，分離血清保存。并在手術開始時吸取盆腔子宮直腸陷凹處的腹腔液（PF）。對照組患者切取正常子宮組織。內異組患者需吸取子宮內膜異位囊腫液（EF）、切除子宮內膜異位囊腫以及腹膜活檢組織（PI）。所有樣品在取用后立即-70℃保存，以備后用。

1.3 Western blot測定組織瘦素及瘦素受體 將大約400mg卵巢或PI樣本加入至400μl 1% NP-40裂解液中（上海江萊生物科技有限公司）混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4℃，10000r/min離心5min，測定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20μg的上清液，加入至8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進行垂直電泳測定，然后轉移至硝化纖維素膜上進行轉印。硝化纖維素膜分別與一抗為鼠抗人瘦素多克隆抗體（BS-0109R）和兔抗人Ob-R單克隆抗體（BS-0108M）（武漢博奧森公司）于4℃下過夜孵育（1∶200）。蛋白表達采用β-actin作為標準對照，所有條帶經化學發光分析儀可視化后記錄。

1.4 瘦素水平的測定 采用人瘦素酶聯免疫吸附測定試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）測定血清、PF以及子宮內膜異位EF中的瘦素水平。

1.5 統計學方法 采用SPSS 18.0統計學軟件。計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料組間比較采用χ2檢驗；兩變量間相關關系的分析采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢組織與PI瘦素與瘦素受體的表達 見表1和圖1。典型電泳條帶見圖2。

表1 卵巢與PI瘦素及瘦素受體表達水平的比較（Western blot灰度值）

2.2 各樣本之間瘦素水平的比較 見圖3。

2.3 內異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體的相關性分析 內異組瘦素與瘦素表達水平的相關性：分別對內異組患者的OE與EF、PI與PF、OE與PF瘦素間的表達水平進行相關性分析，顯示子宮內膜異位癥患者的OE與EF、PI與PF的瘦素表達水平呈現強相關性（P＜0.05），而OE與PF間無明顯相關性（P＞0.05）。內異組瘦素與瘦素受體表達水平的相關性：分別對內異組患者OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體以及PF瘦素與OE瘦素受體的表達水平進行相關性分析，顯示OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體及PF瘦素與PI瘦素受體的表達水平均呈強相關性（P＜0.05）。

圖 1 卵巢組織與PI瘦素及瘦素受體表達水平（★P＜0．05）

圖 2 卵巢組織與PI瘦素及瘦素免疫印跡結果

圖3 兩組患者血清與PF中瘦素水平比較（A）。內異組患者血清、PF以及子宮內膜異位EF中瘦素水平的比較（B）

3 討論

近年來子宮內膜異位癥患者有明顯的上升趨勢，約10%～15%的育齡婦女患有此?。?］。有研究表明，瘦素受體引導瘦素通過JAK2/STAT3和ERK信號通路刺激子宮內膜異位上皮細胞的生長，從而誘發子宮內膜異位癥［5］。瘦素與炎癥、血管再生之間的關系，加上其有可能在中樞和性腺水平上影響生殖功能，因此其與子宮內膜異位癥之間的關系得到廣泛的研究。近期有研究發現，在子宮內膜異位癥患者子宮內膜中瘦素與瘦素受體的表達水平顯著高于正常的子宮內膜，同時該項研究發現用瘦素治療子宮內膜異位癥時，能夠促進瘦素受體轉錄RNA的表達，表明在子宮內膜異位癥患者瘦素系統中涉及到自分泌和旁分泌兩種模式［6］。說明子宮內膜異位癥所屬組織可能既是瘦素的來源，又是瘦素潛在的靶點。結合實驗結果作者推測，子宮內膜異位癥患者卵巢組織較正常卵巢組織更為敏感，而且其生產瘦素的能力可能遠強于正常的卵巢組織。本資料結果發現，子宮內膜異位癥患者卵巢組織中瘦素的表達水平略低于對照組（P=0.16）。但是瘦素受體在正常卵巢組織中與子宮內膜異位癥患者卵巢組織中的表達差異明顯（P=0.003）。

很多研究人員報道了子宮內膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平，但是結果卻存在著一定的矛盾性，有些學者認為與健康人員對照子宮內膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平并無顯著變化［7-8］，但有些結果卻認為比健康人員的瘦素水平要高［9-10］。此外，關于PF瘦素水平與子宮內膜異位癥嚴重程度之間關聯性也存有爭議，一些研究結果為正相關，但另一些結果卻表明呈負相關性。本資料中，酶聯免疫吸附劑測定結果顯示兩組人員血清以及PF中的瘦素水平無明顯差異，但是子宮內膜異位EF中的瘦素水平明顯高于血清以及PF中的水平，且差異有統計學意義（P＜0.001）。表明子宮內膜異位癥患者嚴重程度是有關聯的，可能與瘦素水平是呈正相關的。

內異組患者子宮內膜異位OE和PI中瘦素與瘦素受體表達水平具有較強的相關性。PF中瘦素水平與PI中瘦素以及瘦素受體表達之間具有強烈的相關性。子宮內膜異位EF中瘦素水平與子宮內膜異位OE中瘦素以及瘦素受體表達之間具有強烈的相關性。這些顯著性相關的結果表明，瘦素受體在子宮內膜異位OE或者PI中的表達可能是子宮內膜異位EF和PF中瘦素水平所引導的。

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