蕪湖產地金銀花的質量分析

張曉沖，戴勝，曹井相

(1.安徽中醫藥高等?？茖W校藥學系，安徽 蕪湖 241000；2.蕪湖張恒春醫藥有限公司銷售部，安徽 蕪湖 241006)

藥用金銀花又名雙花、忍冬花，為忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或帶初開的花。種植及應用歷史悠久，是傳統、常用中藥材。具有清熱解毒、宣散風熱等功效[1]。我國是金銀花的重要產地之一，多地都可種植，其中山東、河北、河南是較出名的三大產地。近年來金銀花的需求量不斷攀升，而安徽省蕪湖市的氣候也非常適合種植金銀花，因此選用蕪湖產的金銀花進行了含量測定?，F有文獻對安徽蕪湖產地金銀花質量研究分析較少，為了客觀評價、充分利用安徽蕪湖產地藥材資源，并有效控制藥材質量，根據2015版《中國藥典》第一部[2]，運用HPLC法測定了金銀花中有效成分綠原酸含量，對安徽蕪湖產金銀花藥材質量進行了初步研究，為蕪湖產金銀花質量控制提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

Agilent Technologies 1260 (美國安捷倫公司，二元泵，自動進樣器，DAD紫外檢測器)；色譜柱(Agllent HC-C18,5 μm,4.6×250 mm)；XL-130多功能粉碎機(永康市小寶電器有限公司，31000 r/min，650 W) ；FA1204N型電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；KH3200B型超聲波清洗器(昆山禾創超聲儀器有限公司)；Sigma 2-16KL高速離心機(德國Sigma公司)；AP-01P真空泵(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；基因型 1850A摩爾純水機(重慶摩爾水處理設備有限公司)。

綠原酸(質量分數99.39%，批號 17030620)，對照品由北京標準物質網和北京北納創聯生物技術研究院聯合研制。甲醇(色譜純，美國TEDIA,16085016);乙腈(色譜純，美國TEDIA, 16085016)；磷酸(色譜純，上海展云化工有限公司，批號160815)；超純水(實驗室制備)。金銀花采集自安徽蕪湖丫山、蕪湖安徽中醫藥高等?？茖W校藥園、蕪湖安徽中醫藥高等?？茖W校草場，購買的為山東平邑產金銀花，共8個批次。經安徽中醫藥高等?？茖W校李林華講師鑒定，為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為Agllent HC-C18,5μm,4.6×250mm，柱溫30℃[3]，波長為327nm[4]，流速為1mL/min，進樣量20μL，以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)為流動相洗脫[5]。理論塔板數不低于3000。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 標準品溶液的制備。取綠原酸標準品5.7mg，至于5mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成1.14mg/mL的對照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液的制備。取干燥、粉碎過的金銀花粉末(過60目篩)約0.5 g，精密稱定，放入碘量瓶中，精密加入50%甲醇25 mL稱定質量，超聲處理30 min[6]，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足損失，離心10 min，12000 r/min，取上清液濾過，取續濾液過0.22 μm一次性過濾器，濾液即為供試品溶液。采集及購買的金銀花來源詳見表1。

2 結果與分析

2.1 線性關系考察

將對照品溶液稀釋2、4、8、16、32、64倍，搖勻，按照上述色譜條件進樣，并記錄色譜峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并線性回歸?；貧w方程及線性范圍見圖1。Y=33784x+122,R2=0.9995,R=0.9997。線性范圍8.9～570 μg。結果表明，對照品線性關系良好。

2.2 精密度考察

精密吸取對照品溶液，按照2.1項下色譜條件下重復進樣6次，進樣20μL，以對照品峰面積進行計算，RSD為0.11 %[7]。結果表明，對照品精密度良好。

2.3 穩定性實驗

取待測金銀花LJT1號為供試品溶液，按照上述2.1項下的色譜條件，分別在2、4、6、8、12、24h進樣[8]，測定綠原酸的峰面積RSD為1.38 %，表明樣品液在24h內穩定。結果表明，對照品穩定性良好。

2.4 重復性實驗

取待測金銀花LJT1號粉末約0.1g，平行稱定3份，按照上述2.2.2項下方法操作，制備供試品溶液6份，每份精密吸取20μL，按照2.1項下色譜條件測定有效成分綠原酸的質量分數的RSD為1.92%。結果表明，對照品重復性良好。

2.5 加樣回收率

取金銀花LJT1號粉末6份，每份約0.5g，精密稱定，每份加入相同量的綠原酸對照品，按照2.1項下條件測定，平均回收率為103.15%，RSD為1.97%[9]。結果表明，對照品回收率良好。

2.6 樣品測定

取不同批號的金銀花藥材約1.0g，精密稱定，按2.2.2項下方法[10]、條件操作，制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算綠原酸的質量分數[11]，結果見圖2和表2。綠原酸標準品HPLC圖見圖3。

表1 金銀花的來源

表2 金銀花藥材中有效成分的測定結果

圖1 綠原酸標準品標準曲線

圖2 金銀花混合樣品在波長327nm下HPLC圖

圖3 綠原酸標準品在波長327nm下HPLC圖

3 結論與討論

3.1 提取溶劑的選擇：參照2015版《中國藥典》金銀花含量測定項下的樣品處理方法，對比了水、純甲醇、50%甲醇作為溶劑，經過篩選，表明以50%甲醇為溶劑效果最好。參考文獻后，采用了超聲提取法進行提取。

3.2 本實驗對流動相進行了篩選：通過對純甲醇，甲醇-水和乙腈-水的篩選，發現乙腈-水的洗脫效果更理想，為抑制峰的拖尾，加入冰醋酸和磷酸進行篩選，結果表明,以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)為流動相峰型較好。

3.3 本次實驗測定了購買的金銀花(山東平邑產)中金銀花中綠原酸的含量，和在蕪湖丫山和安徽中醫藥高等?？茖W校藥園采摘的金銀花2個產地不同批次的金銀花中綠原酸的含量，其中丫山產(野生)金銀花中綠原酸含量均高于藥典規定含量(1.5%)，平均含量為2.1%；安徽中醫藥高等?？茖W校藥園及藥園外采摘的金銀花有效成分含量較低，與該藥材為人工栽培的改良后的金銀花品種有關。

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