番茄紅素茶多酚組合物抗輻射作用研究

鄭俠　袁根良　楊曉惠　殷光玲

[摘要]研究番茄紅素茶多酚組合物對小鼠輻射危害的輔助保護作用。方法：按照《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）“對輻射危害有輔助保護功能試驗”的相關規定，選用昆明種雄性小鼠，設低、中、高三個劑量組，分別為樣品人體推薦劑量5倍、10倍、30倍，另設輻射模型對照組。結果：外周血白細胞計數實驗結果陰性，小鼠骨髓細胞微核實驗結果陽性，血清溶血素含量實驗結果陽性。結論：根據判定原則，認為樣品番茄紅素茶多酚組合物對小鼠的輻射危害有輔助保護功能。

[關鍵詞]番茄紅素；茶多酚；小鼠；輻射

中圖分類號：TS201.3 文獻標識碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20180406

輻射損傷是由電離輻射引起的急性、慢性或遲發性的機體損傷…。隨著電子產品的迅速普及，人們日常生活中接觸輻射的機會越來越多，遭受輻射損傷的可能性也隨之增加。目前有多種輻射防護藥物，但大多存在毒副作用大，防護效價低等缺點[2-5]。因而尋找安全、有效的抗輻射損傷食品原料日漸緊迫。已有研究表明番茄紅素和茶多酚都具有一定的抗輻射作用，本實驗將兩者按一定比例混合使用，以考察番茄紅素茶多酚組合物的抗輻射作用。

1實驗材料

1.1藥品及試劑

番茄紅素（樂康瑞德食品添加劑（常州）有限公司，20120331）、茶多酚（安徽紅星藥業有限責任公司，20140217-2）、預膠化淀粉（戴緯林國際貿易（上海）有限公司，130401A）、二氧化硅（廣州榮啟貿易有限公司，130701）。

1.2儀器

電子天平BS223S（北京賽多利斯公司，50961567）、電子秤ACS--3A型（上海太和衡器廠，10400365）、臺式離心機Mikr022（HETrlCH公司，105）、血液分析儀XT-2000i（希森美康，66541）。輻照裝置：¹³⁷Csγ輻射源，Gaminacell-40（加拿大Nurdion公司），放射源出廠活度為1.27×10¹⁴Bq，現吸收劑量率為0.75Gy/min。

1.3實驗動物

昆明種小鼠，雄性，18～22g，120只，由上海杰思捷實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2013-0006。實驗動物飼養室溫度20℃～25℃，相對濕度40%～70%，實驗動物使用許可證號：SYXK（滬）2013-0008。

2實驗方法

2.1番茄紅素茶多酚組合物的制備

取番茄紅素380g、茶多酚112g、預膠化淀粉400g、二氧化硅8g混合均勻得900g番茄紅素茶多酚組合物。小鼠灌胃前用蒸餾水按比例稀釋至所需濃度。

2.2分組與給藥

取昆明種小鼠120只，逐只稱重，按體重分層隨機分為12組，每組10只。以每四組為一個實驗組，隨機分為1個輻射模型對照組和3個受試樣品劑量組。連續灌胃30d，3個劑量組灌胃給予不同濃度受試樣品，輻射模型對照組灌胃給予溶劑（蒸餾水）。30d灌胃結束后進行白細胞計數實驗、骨髓細胞微核實驗、血清溶血素實驗。

本品成人（體重按60kg計算）每天推薦量900mg，折合劑量為15mg/kg。將番茄紅素茶多酚組合物設計為75mg/kg、150mg/kg.450mg/kg三個劑量組，分別相當于人體推薦用量的5倍、10倍、30倍。

2.3測定指標

（1）白細胞計數實驗。動物連續給樣30d后，取樣品三個劑量組及輻射模型對照組動物均以同一劑量γ射線¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy。分別于照射前、照射后第3d、照射后第14d三次采末梢血，進行白細胞計數。實驗結果如表1所示。

（2）小鼠骨髓細胞微核實驗。動物連續給樣30d后，取樣品三個劑量組及輻射模型對照組動物均以同一劑量γ射線¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy，另取一組動物作為環磷酰胺致突變物對照組。各劑量組及輻射模型對照組于照射后（繼續給予樣品）第3d，頸椎脫臼處死小鼠，剝離出胸骨或股骨，用止血鉗擠出骨髓液，加滅活的小牛血清，常規制片，Giemsa染色，鏡檢，每鼠計數1000個嗜多染紅細胞中的微核細胞數，以千分率表示。結果如表2所示。

（3）血清溶血素實驗。動物連續給樣30d后，取樣品三劑量組及輻射模型對照組動物均以同一劑量γ射線¹³⁷Csγ全身照射一次，照射劑量為3Gy。于照射后（繼續給予樣品）第6d用2%（v/v）sRBC免疫動物，5d后眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在微量血凝板上加25μL血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋，再加入等量0.5%（v/v）sRBC懸液，混勻后，裝入濕潤的平盤內加蓋，37℃放置3h，當血球對照出現沉落時觀察結果。結果如表3所示。

3統計學分析

采用SPSS 11.0軟件對試驗數據進行方差分析。

4實驗結果

4.1白細胞計數實驗結果

如表1所示，照射前各劑量組與輻射模型對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）；照射后第3d，輻射模型對照組和各劑量組的白細胞數分別與照射前進行自身比較，均明顯下降，且差異均有顯著性（P<0.01），可判定輻射損傷模型成立；動物照射后第14d白細胞明顯回升，但各劑量組的白細胞數與輻射模型對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）。

4.2鼠骨髓細胞微核實驗結果

如表2所示，樣品各劑量組與輻射模型對照組相比，高劑量（450mg/kg）組的骨髓細胞微核率明顯下降，有顯著性差異（P<0.05）。

4.3血清溶血素實驗結果

如表3所示，樣品各劑量組與輻射模型對照組相比，高劑量（450mg/kg）組的血清溶血素明顯增加，有顯著性差異（P<0.05）。

5結論

番茄紅素（1vcopene）是一種黃/紅色類胡蘿卜素，廣泛存在于自然界中。1875年MiHardet從番茄中萃取出含有番茄紅素的粗提物，稱之為Solanorbin。1903年Schunck通過對番茄紅素吸收光譜的研究，發現其不同于從胡蘿卜中提取的胡蘿卜素，于是將這種色素命名為lycopene，從而確立了番茄紅素的名稱。其分子式為C40H56，是由11個共軛雙鍵以及2個非共軛的碳一碳雙鍵構成的高度不飽和直鏈型烴類化合物。研究發現，番茄紅素具有抗氧化、抗輻射、延緩衰老、抑制腫瘤、減少心血管疾病、提高人體免疫力等作用。

劉勇等選用健康志愿者進行番茄紅素軟復合膠囊抗氧化人體試驗研究，采用雙盲隨機分組、組問和自身兩種對照設計，表明人體食用番茄紅素具有抗氧化功效。李輝等采用動物試驗方法研究表明小鼠灌胃給予番茄紅素具有顯著抗氧化功效。彭曉莉等采用動物試驗方法研究表明番茄紅素具有一定的抗輻射保護作用。綜上，番茄紅素具有一定的抗氧化防輻射功能。

茶多酚是以兒茶素類為主體，由多種酚類物質組成的羥基酚類化合物。大量研究表明，茶多酚具有抗氧化、抗動脈粥樣硬化、防癌、抗輻射、抑菌、抗病毒、解毒、降血糖和血脂、抗衰老等方面的保健和藥理作用。

李繼媛等采用動物試驗方法，連續90d，每天對實驗小鼠注射低、中、高劑量組的茶多酚樣品。測定小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量，測定結果顯示，不同劑量茶多酚對小鼠血清SOD、MDA水平有影響。實驗結果說明茶多酚可提高小鼠血液抗氧化能力，以血清SOD活性增強為主要表現。劉明哲等通過茶多酚（TP）對青、老年NIH小鼠血清中MDA、紅細胞SOD和過氧化氫酶（CAT）活性的作用，研究了它對機體自由基的清除功效，并以人體淋巴細胞DNA單鏈斷裂為指標研究了TP對輻射誘發的DNA損傷的保護作用。結果顯示茶多酚具有清除體內自由基抗氧化和抗輻射的作用。

計融等為評價茶多酚對小鼠的抗輻射作用，將60只小鼠作為抗輻射Ⅰ組，動態觀察白細胞數。另60只小鼠為抗輻射Ⅱ組，進行存活試驗。結果顯示茶多酚能顯著提高輻照小鼠存活率。郭紹來等采用⁶⁰Csγ射線照射小鼠造成亞急性損傷模型，給予不同劑量TP及表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）后1d、3d、7d、14d、21d、28d檢測對小鼠外周血指標和臟器系數的影響。同時檢測血清中SOD和MDA水平，結果表明含50%EGCG的茶多酚（TP50）具有明顯緩解輻射所造成的造血功能損傷和抗氧化作用。

本實驗以番茄紅素和茶多酚混合物為主要原料，現代藥理研究及實踐結果表明，番茄紅素和茶多酚均具有抗氧化和抗輻射作用。本研究結果表明番茄紅素和茶多酚混合物具有較好的抗輻射作用。