IL-10基因多態性與中國北方人群糖尿病腎病易感性的關系*

馬東紅，劉 云，石 巖，許清玉，郭明好

(新鄉醫學院第一附屬醫院，河南衛輝 453100)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是導致終末期腎功能衰竭的主要原因之一，在美、日和歐洲等發達國家和地區，DN已成為終末期腎病的首位病因(約占35%)，在我國這一比例也逐漸上升[1]。但發病機制至今尚未完全闡明。環境和生活方式因素，如高血壓、肥胖、高尿酸血癥、高腎小球濾過率、血糖控制等都參與DN的發病[2]。另外，遺傳易感性在DN的發展和嚴重程度上也發揮了舉足輕重的作用。有研究發現，在DN的發病過程中，腎臟炎癥起了至關重要的作用。白細胞介素(IL)-10主要由輔助性T細胞(Th2細胞)產生，是一個眾所周知的免疫調節細胞因子，其主要調節T細胞和單核細胞/巨噬細胞[3]。IL-10基因位于染色體1q31-1q32，編碼一個相對分子質量為4.7×103的蛋白質，在其5′區域的轉錄起始點已證實存在3個常見的單核苷酸多態性，其對IL-10的產生是重要的決定因子。他們分別是-1082位點G/A(rs1800896)、-819位點T/C(rs1800871)、-592位點A/C(rs1800872)[4]。已有研究報告，IL-10水平與DN患者尿蛋白/肌酐比值呈明顯正相關，這表明炎癥細胞因子和趨化因子的異常產生是DN潛在的免疫病理機制[5]。另有研究發現，隨著DN的進展，外周血中炎癥細胞因子水平明顯增加[6]。已有研究報道，IL-10-592C/A、-819C/T和-1082G/A基因多態性與DN易感性的關系，但結果并不一致[7-11]。因此，本研究主要探討IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態性與中國DN易感性的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2012年6月到2015年12月確診為2型糖尿病(DM)及DN的患者224例(觀察組)。DM參照1999年世界衛生組織制定的標準，根據蛋白尿及腎小球濾過率的水平診斷為DN。伴有嚴重難以控制的高血壓(160/100 mm Hg)、急性或慢性感染、合并腫瘤等患者除外。DN患者的平均年齡為(56.85±11.44)歲，男性占54.91%。選取同期在本院進行常規健康檢查的健康人350名作為對照組。根據空腹血糖水平、蛋白尿和腎小球濾過率確定對照組均無DM和DN。對照組平均年齡為(53.43±10.73)歲，男性占54.57%。觀察組和對照組受試者均在入組時由專一護士登記、收集其人口學資料，根據就醫記錄收集臨床數據。所有研究對象在實驗前簽署知情同意書。該項研究通過本院臨床研究倫理委員會的批準。

1.2基因分型 研究對象晨起空腹采集靜脈血4 mL，-80 ℃保存。全基因組DNA通過血液DNA提取試劑盒(Qiagen公司，瓦倫西亞，CA，USA)從全血標本中分離出來。IL-10-1082G/A，-819T/C和-592A/C多態性通過聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性進行分型。IL-10-1082G/A，-819T/C和-592A/C的PCR引物和限制酶見表1。PCR反應條件如下：起始模板變性94 ℃，5 min；其后30個循環：94℃變性45 s，可變溫度退火30 s，72 ℃延伸45 s。所得片段經2%瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色，以確定2個多態位點。

2 結 果

2.1人口學資料 兩組對象在年齡、體質量指數(BMI)、高血壓、三酰甘油(TG)水平、總膽固醇(CHO)水平、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平、血肌酐(SCr)水平等指標差異均有統計學意義；而在性別、吸煙情況、飲酒情況等指標之間差異無統計學意義，見表2。

表1 PCR引物及限制性內切酶

表2 兩組對象的人口統計資料及臨床特征

續表2 兩組對象的人口統計資料及臨床特征

-：無數據

2.2IL-10-1082G/A、-819T/C，和-592A/C基因多態性的分布 觀察組患者中的IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C多態性的基因型分布并沒有偏離哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，P=0.82、0.33、0.59。對照組IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C多態性的基因型分布的P=0.33、0.25、0.31，也沒有偏離HWE。χ2比較顯示IL-10-1082G/A多態性上的GG、GA和AA基因頻率存在一個顯著的區別，在DN和對照組之間差異有統計學意義(χ2=7.729，P= 0.021)，而IL-10-819T/C和-592A/C多態性上的基因頻率，在觀察組和對照組之間差異無統計學意義，見表3。

表3 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態性的分布[n(%)]

表4 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態性和患DN風險的關聯[n(%)]

續表4 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態性和患DN風險的關聯[n(%)]

2.3IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態性和罹患DN風險的關聯 Logistic回歸分析顯示，和野生型基因相比，IL-10-1082G/A的AA基因型明顯增加了DN的易感性(OR=2.147，95%CI=1.225～3.762)。此外，與G等位基因相比，A等位基因增加了罹患DN的風險(OR=1.404，95%CI=1.095～1.800)。然而，IL-10-819T/C和-592A/C基因多態性的Logistic回歸分析顯示他們的基因型和等位基因與DN的易感性不相關，見表4。

3 討 論

DN的病程發展受很多環境因素的影響，例如腎小球高濾過、高壓力、嚴格的血糖控制以及種族差異[12]。然而，即使暴露于完全相同的危險因素下，并非所有的患者均發生DN，這說明DN的發生有遺傳因素參與，即不同種族間DN的發病率存在顯著差異。

長期以來，DN一直被認為是代謝性疾病。然而，最新研究發現，在DN的發病過程中，腎臟局部炎癥起了至關重要的作用。IL-10是抗炎細胞因子，可抑制巨噬細胞合成IL-6、IL-1β、IL-1α和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，抑制T細胞產生干擾素-γ(IFN-γ)。IL-10主要由Th2細胞、調節性T細胞、單核/巨噬細胞產生，在免疫系統調節中起重要作用。IL-10具有抗炎和免疫抑制雙重特性，且IL-10的活性和DN的臨床預后密切相關。有研究發現，DN患者中外周血IL-10水平明顯升高。另有研究發現，IL-10水平和DN腎臟損害程度密切相關。因此，本研究觀察IL-10-1082G/A、-819T/C、-592A/C的基因多態性與DN發生發展的關系。結果提示，IL-10-1082G/A多態性在中國人口中與野生型相比罹患DN的風險明顯增加。

越來越多的研究報道IL基因的改變和糖尿病之間的關系[13]。例如，有研究報道在自身免疫性糖尿病小鼠中IL-10表達的升高起到保護作用[14]。也有報道IL-10基因轉移可使促炎癥細胞因子表達下調，減弱胰腺的胰島炎癥，以及抑制胰腺β細胞凋亡，從而降低雌性非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的發病率[15]。這些研究表明，IL-10的高表達可提高糖尿病的易感性。

DN是糖尿病的常見并發癥之一，有研究探討了IL-10基因多態性在DN發展中的作用。然而，這些研究的結果并不一致。有研究報道了在德國人中，IL-10-1082G/A的GG基因型多態性可增加罹患罹患終末期腎臟病的風險[16]。同樣，在突尼斯人口中IL-10-819T/C上的T等位基因和DM之間存在關聯[11]。

而在中國人中，IL-10基因多態性與DN的易感性關系如何，目前此方面研究較少。因此，本研究發現IL-10-1082G/A基因多態性與罹患DN的風險有顯著的相關性，即AA基因型明顯增加了DN的易感性。

這項研究有一定的局限性。(1)研究受試者是從單一的區域(豫北地區)招募的，而中國南北地區季節、生活習慣等差異較大，不能準確地代表整個中國人群；(2)本研究的樣本量相對較小，這可能影響到群體之間的統計學存在顯著差異。需要進一步的擴大樣本量以驗證本研究結果?？傊?，本研究結果顯示IL-10-1082 G/A多態性與DN的發生、發展密切相關。