蕪湖產地牡丹皮的質量分析

余慧冬，秦亞東*，周娟娟

(1.安徽中醫藥高等?？茖W校藥學系，安徽 蕪湖 241000；2.蕪湖市中醫醫院制劑室，安徽 蕪湖 241002)

牡丹皮為毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr．)的干燥根皮，苦、辛，微寒。歸心、肝、腎經，具清熱涼血，活血化瘀之功效[1]?，F代藥理研究證實牡丹皮在抗腫瘤、抗菌、抗心律失常、抗動脈粥樣硬化及增強免疫力等方面具有確切的作用[2-3]，其主要有效成分丹皮酚是研究的熱點化合物[4-5]。

牡丹皮作為常用大宗藥材，具有極高的藥用價值和悠久的用藥歷史。安徽是牡丹皮的主產區之一，尤其是安徽銅陵產的牡丹皮具有較高盛譽，稱為“鳳丹”，為安徽著名道地藥材[6]。近些年來，隨著牡丹皮臨床使用量的增加，野生牡丹日益減少，現皖南許多地區大面積栽培牡丹。由于中藥材質量受地理環境狀況的影響，因而不同產地牡丹皮質量可能存在質量差異。通過查閱文獻發現對安徽蕪湖產地牡丹皮質量研究報道較少，為牡丹皮藥材資源合理應用及客觀評價，根據2015版《中國藥典》第一部[1]及相關文獻[7-8]，對牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚進行含量測定，以期對安徽蕪湖產地牡丹皮的質量控制、合理利用牡丹皮藥材資源提供參考和借鑒。

1 材料與方法

1.1 供試材料

Agilent Technologies 1100(美國安捷倫公司，二元泵，自動進樣器，DAD二極管陣列檢測器)；色譜柱(ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm，5μm)；DV215CD型 Discovery電子天平(美國OHAUS公司)；U-16K型臺式離心機(德國SIGMA公司)；KQ-250B型超聲波清潔器(昆山市超聲儀器有限公司)。

丹皮酚對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號: 110708-201506，純度99.20%，峰面積歸一化法)。甲醇(色譜純，美國TEDIA，15075021)；乙腈(色譜純，美國TEDIA，15055017)；水(娃哈哈純凈水，杭州哇哈哈集團有限公司)；磷酸(色譜純，上海展云化工有限公司)。牡丹皮采集于安徽蕪湖南陵縣、丫山、弋江區等地，共9個批次，經安徽中藥資源研究汪榮斌副教授鑒定為毛茛科植物牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr．)的干燥根皮，樣品信息見表1。

表1 牡丹皮樣品信息

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18，250mm×4.6mm，5μm；流動相為溶劑A：0.1%磷酸乙腈，溶劑B：0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫：梯度洗脫，0→10min，溶劑A由10%→25%，10→25min，溶劑A由25%→38%；；流速1.0mL/min，柱溫30℃，檢測波長274nm，進樣量10μL。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 對照品溶液的制備：精密稱取丹皮酚對照品5.2mg,用甲醇定容于10mL棕色容量瓶中, 搖勻，配制成濃度為0.52mg/mL的丹皮酚對照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液的制備：取經干燥至恒重的牡丹皮藥材粉末(過四號篩)約0.5g，精密稱定后置于具塞錐形瓶中，精密加入50mL甲醇，精密稱定質量，超聲處理30 min，靜置，放冷，再次稱定質量，用甲醇補足損失重量，離心處理(5000r/min，10min)，上清液經0.22μm微孔濾膜過濾后，備用。

2 結果與分析

2.1 系統適用性及專屬性試驗

按“1.2.1”色譜條件及“1.2.2”溶液制備條件，分別對丹皮酚對照品溶液、供試品溶液進行進樣，記錄色譜圖[3,7]。從圖2中可見，丹皮酚在25min以內完成分離，分離度大于1.5，理論塔板數大于5000。對照品及供試品溶液代表性色譜圖見圖1、圖2所示。

圖1 丹皮酚對照品在274nm下HPLC圖(1：丹皮酚)

圖2 牡丹皮樣品在274nm下HPLC圖(1：丹皮酚)

2.2 線性關系考察

精密吸取“1.2.2.1”項下制備的對照品適量，以甲醇為溶劑進行梯度稀釋2、4、8、16、32倍，搖勻，過0.22μm微孔濾膜過濾后按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖及丹皮酚色譜峰峰面積。以峰面積值 (Y)為縱坐標，進樣濃度 (X，mg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，并繪制標準曲線。線性回歸曲線見圖3，回歸方程Y=3870.52X+17.5，線性系數R=0.9996，丹皮酚在0.0325～0.52μg之間線性關系良好。

圖3 丹皮酚對照品標準曲線

2.3 精密度試驗

取“1.2.2.1”項下制備的對照品溶液，按“1.2.1”色譜條件，連續進樣6次, 記錄丹皮酚色譜峰峰面積， RSD為0.57%。結果表明儀器精密度符合要求。

2.4 穩定性試驗

取“1.2.2.2”項下制備的供試品溶液，按“1.2.1”色譜條件，分別于0、3、6、9、12 h 進樣,記錄丹皮酚色譜峰峰面積，RSD為0.64%。結果表明丹皮酚供試品溶液至少在12 h內穩定。

2.5 重復性試驗

取牡丹皮藥材粉末約0.5g,共6份， 按“1.2.2.2”項下方法進行樣品處理, 按“1.2.1”項下色譜條件進行進樣，記錄丹皮酚色譜峰峰面積，RSD為1.62%。結果表明重復性良好。

2.6 加樣回收率試驗

精密稱取牡丹皮粉末5份[3,7],每份約0.5g，按“1.2.2.2”供試品溶液制備項下方法進行制備，然后加入“1.2.2.1”項下制備的丹皮酚對照品溶液適量，置50mL棕色具塞錐形瓶中 ,加甲醇45 mL，超聲處理30min,靜置，放冷后以甲醇定容至刻度，搖勻,過0.22μm濾膜，按“1.2.1”項下色譜條件進行測定，并計算含量,結果丹皮酚平均回收率為102.51%，RSD為1.26%，結果表明對照品回收率良好。

2.7 樣品含量測定

按照上述HPLC法測定方法測定安徽蕪湖不同產地牡丹皮樣品[3,7]，結果見表2。

表2 牡丹皮中有效成分丹皮酚含量測定結果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇：參考2015版《中國藥典》(一部)及文獻報道，分別嘗試對水、甲醇、乙醇、50%甲醇、50乙醇為溶劑，以丹皮酚含量為指標，經過試驗，以甲醇為溶劑對牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚進行提取，含量最高，故選擇以甲醇為溶劑。

3.2 提取方式的選擇：分別采用超聲提取法、回流提取法、滲漉法、浸漬法進行對比研究，以丹皮酚含量為指標，發現常規提取方式對丹皮酚含量并無顯著影響，考慮到提取的便捷性及降低能源損耗，選用了超聲提取方式。

3.3 本次試驗對安徽蕪湖不同產地野生牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚的含量進行測定，且丹皮酚也是2015版《中國藥典》(一部)所要求進行含量測定的成分。從測定結果看，安徽蕪湖不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量均大于《中國藥典》的規定含量(不少于1.2%)，且丹皮酚的含量存在一定的差異，這可能與不同自然環境及生態環境等因素存在一定的關系。從丹皮酚含量分析，安徽蕪湖地區適合牡丹皮藥材的栽培。