外周血游離胎兒DNA檢測聯合唐氏篩查在妊娠中期唐氏綜合征胎兒篩查中的應用價值

呂 書 博

(鄭州大學第三附屬醫院新生兒疾病篩查中心 鄭州 450003)

唐氏綜合征即21-三體綜合征，是一種較為常見的染色體異常疾病，發病率為活嬰的1/600～1/800，居5000多種遺傳病發病率首位[1]。多伴有先天畸形，影響嬰幼兒智力發育，威脅其生命安全。目前該病尚無有效治療措施，早發現并及時終止妊娠為避免唐氏綜合征發生的主要手段。唐氏篩查為目前應用最廣泛且最成熟的一種篩查手段，具有一定檢出率，但該方法篩查準確度不高，在一定程度上增加了流產發生風險。有學者指出外周血游離胎兒DNA檢測可明確染色體疾病的發生情況，對染色體異常具有較高檢出率，且該檢查方法無創、安全，可減輕孕婦的心理負擔[2]?；诖吮狙芯繉⑼庵苎坞x胎兒DNA檢測與唐氏篩查聯合用于妊娠中期孕婦產前篩查中，探討其篩查結果及意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年9月～2017年4月在我院進行產前檢查的孕中期孕婦1430例，均為單胎妊娠且均無飲酒吸煙史，排除合并糖尿病、肝腎功能衰竭、心臟病等疾病者或接受干細胞治療、移植手術者，年齡21～44歲，平均年齡(27.80±5.30)歲；孕周15～20周，平均孕周(17.40±2.10)周；孕次1～3次，平均孕次(1.50±0.49)次。本研究經醫院倫理委員會審查批準。

1.2 方法

以采血管采集孕婦10ml外周血，于4℃溫度下以1600r/min轉速離心處理10min(4 h內務必分離血清)，離心后取上清液分裝至多個離心管中(1.5ml)，以時間分辨免疫熒光法測定血清游離β-人絨毛膜促性腺激素(F-βhCG)、甲胎蛋白(AFP)、血清相關蛋白-A(PAPP-A)、游離雌三醇(μE3)，檢查結果以中倍數(MOM)表示，結合孕婦體重、年齡、是否有過21-三體不良孕史等因素，計算唐氏風險率，1∶270為唐氏高危切割值。篩查出的高危孕婦進行遺傳咨詢，實施外周血游離胎兒DNA檢測，抽取10 ml外周血，置入專用采血管(Cell-Free DNA BCTTM)混勻，采用DNA提取試劑盒(德國Qiagen公司)進行DNA提取，采用緩沖劑(50 μL)洗脫DNA標本，進行羊膜腔穿刺羊水細胞染色體核型分析診斷，確診異常者終止妊娠。將泰萊時間分辨免疫熒光測定儀作為中期血清檢測儀，游離胎兒DNA血清采用美國Illumina公司大規模平行測序儀測定，試劑購自廣州豐華公司。

2 結果

2.1 唐氏篩查結果

1430例孕中期孕婦經唐氏篩查，共篩查出106例高危孕婦，篩查陽性率為7.41%(106/1430)。

2.2 外周血游離胎兒DNA檢測

以胎兒染色體核型分析結果為金標準，106例高危孕中期孕婦進行外周血游離胎兒DNA檢測發現染色體數目異常10例，4例結構異常，對14例異常孕婦進行羊水染色體核型分析，發現與染色體核型分析結果相符，染色體核型分析結果顯示21-三體綜合征2例、18-三體綜合征1例、13-三體綜合征1例，外周血游離胎兒DNA檢測結果顯示21-三體綜合征2例、18-三體綜合征1例、13-三體綜合征1例，與染色體核型分析結果符合率均為100.00%，見表1。

表1 外周血游離胎兒DNA檢測結果與染色體核型分析結果[n(%)]

類別染色體核型分析陽性外周血游離胎兒DNA檢測高風險符合率(%)21-三體綜合征22100.0018-三體綜合征11100.0013-三體綜合征11100.00合計44100.00

3 討論

唐氏篩查是指羊水穿刺診斷或血清學篩查，其主要是針對孕婦血液生化篩查及宮頸管脫落細胞檢查，并對高風險孕婦進行羊水、絨毛、臍血抽取，實施侵入性產前診斷、終止妊娠，為高齡孕婦必選產檢項目之一。本研究發現對妊娠中期孕婦進行唐氏篩查，篩查陽性率為7.41%，證實了其對大樣本篩查的有效性及可行性。但其亦是一種侵入性操作，易引發一系列并發癥，且有數據顯示該篩查方法所致流產率高達1%，存在一定局限性[3]。

有研究指出人體外周血中有微量游離核酸存在，而胎盤滋養層浸潤具備時間及空間特性，宮內胎兒DNA可以游離狀態進入母體外周血循環中，據統計母體血漿總游離DNA中高達10%以上為游離胎兒DNA，且孕5周即可檢出[4～5]。此外胎兒游離DNA分子長度多不足200 bp，比母體DNA短，易于發現，因此臨床可利用孕婦血中游離的胎兒DNA進行檢測。但外周血游離胎兒DNA檢測要求檢測人員具備較高水平的分析技術，且檢查費用相對高昂，短期內難以應用到大樣本篩查中，而唐氏篩查具有費用低廉、操作簡單等優勢，可彌補外周血游離胎兒DNA檢測的不足，二者結合不僅可降低檢查費用，且可提高診斷準確率。本研究對唐氏篩查出的106例高危孕婦進行外周血游離胎兒DNA檢測，結果發現其檢查結果與染色體核型分析結果符合率為100.00%，說明外周血游離胎兒DNA檢測輔助唐氏篩查，有助于發現唐氏綜合征胎兒，診斷準確率高。此外外周血游離胎兒DNA檢測通過孕婦血對胎兒進行無創診斷，比直接檢測胎兒細胞更為安全，且可重復性好，無需進行細胞培養，在短時間內即可獲得準確的測定結果，具有高通量、高準確率、無創等優勢。

綜上可知，外周血游離胎兒DNA檢測聯合唐氏篩查應用于妊娠中期唐氏綜合征胎兒篩查中，診斷符合率高，可作為臨床篩查唐氏綜合征胎兒、決定是否終止妊娠的依據。