十味鵝黃顆粒的醇沉及干燥工藝研究

朱智德 羅宇東 肖明

[摘要]目的 優化十味鵝黃顆粒的醇沉及干燥工藝。方法 以十味鵝黃顆粒沉醇液中的黃芪甲苷含量為指標，采用正交設計，考查清膏的相對密度、加入乙醇濃度、醇沉液含醇量及醇沉后靜置時間4個因素對產品醇沉工藝的影響，確定十味鵝黃顆粒最佳醇沉工藝。研究不同干燥方式及溫度對干膏中黃芪甲苷含量的影響，確定產品的最佳干燥工藝。結果 十味鵝黃顆粒的最佳醇沉工藝為濃縮液相對密度1.10～1.15（80℃），加入95%乙醇使含醇量達70%，醇沉時間12 h；十味鵝黃顆粒的最優干燥工藝為減壓干燥，干燥溫度85℃。按優化的醇沉及干燥工藝生產3批產品，干膏中黃芪甲苷平均含量為5.48 mg/g，RSD為1.74%（n=3）。結論 按優化的醇沉及干燥工藝生產十味鵝黃顆粒，產品含有與處方藥味相應的有效成分，質量穩定，適合大生產，因此該工藝是合理可行的。

[關鍵詞]十味鵝黃顆粒；醇沉；干燥；黃芪甲苷

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）9（a）-0011-05

[Abstract] Objective To optimize the alcohol precipitation and drying process of Shiwei Ehuang Granules. Methods Taken the content of Astragaloside A in Shiwei Ehuang Granules as the indexes， the orthogonal design was used to examine the effect of four factors （relative density of the ointment， added alcohol concentration， alcohol precipitation content and standing time after alcohol precipitation） on the alcohol precipitation process of the product， so as to determine the best process of alcohol precipitation for Shiwei Ehuang Granules. The effect of different drying methods and temperature on the content of Astragaloside A in dry ointment was studied to determine the best drying process for the product. Results The optimal alcohol precipitation process of Shiwei Ehuang Granules was as follows： 1.10-1.15 （80°C） relative density of ointment， adding 95% alcohol to make alcohol content 70%， and 12 h alcohol precipitation time. The optimal drying process of Shiwei Ehuang Granules was decompression drying， and the drying temperature was 85℃. The average content of Astragaloside A in three batches of products according to above optimized alcohol precipitation and drying process was 5.48 mg/g， and RSD was 1.74% （n=3）. Conclusion Shiwei Ehuang Granules produced according to the optimized alcohol precipitation and drying process contain the effective components corresponding to the prescription， whose quality is stable and suitable for mass production. Therefore， the process is reasonable and feasible.

[Key words] Shiwei Ehuang Granules； Alcohol precipitation； Drying； Astragaloside A

過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）為鼻黏膜慢性炎癥反應性疾病，隨著工業化水平的提高、居住生存環境的污染惡化，AR的發病率逐年升高，嚴重危害人類的健康。AR屬于祖國傳統醫學“鼻鼽”的范疇，壯瑤醫藥作為我國傳統中醫藥的重要組成部分，在治療AR方面具有方簡效明、功效顯著的特點，因此研發治療AR的中藥或民族藥產品，市場前景廣闊[1-9]。十味鵝黃顆粒為廣西中醫藥大學制藥廠擬開發治療AR的復方壯藥制劑，該產品在篩選廣西壯瑤族民間治療AR驗方的基礎上，根據中醫對該病病因、病機的認識和組方原則，由鵝不食草、黃芪、白術等藥材組方而成，臨床治療AR療效確切。

課題組前期開展了十味鵝黃顆粒水提工藝的研究，產品水提后干膏得率約22%，得膏率偏高，單劑藥量偏大，患者服用不方便，因此有必要水提后采用醇沉工藝，進一步除去雜質，降低干膏得率，減少單劑藥量。十味鵝黃顆粒方中的黃芪為君藥，現代研究表明，黃芪對機體免疫系統、心腦血管系統具有明顯的療效，黃芪甲苷為黃芪的主要功效成分[10-13]。本研究采用正交設計法，以十味鵝黃顆粒水提沉醇液中黃芪甲苷含量作為工藝考察指標，優化產品的水提沉醇工藝；采用單因素試驗法，比較不同干燥方式（常溫干燥、減壓干燥、噴霧干燥）及干燥溫度對干膏中黃芪甲苷含量的影響，從而確定產品的最佳干燥工藝，以期為產品的注冊申報及規?；a提供依據，現報道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器

1260型高效液相色譜儀（Agilent公司）；3300-ELSD型蒸發光散色檢測器（Alltech公司）；SQP型十萬分之一電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；KQ5200型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；L600型和TGL-16G型離心機（上海安亭科學儀器廠）；25 ml附溫比重瓶（上海信誼儀器廠有限公司）；DT系列微型多能提取濃縮機組（武漢制藥機構設備公司設備制造廠）；GDS-1型多功能干燥實驗機（杭州錢江干燥設備有限公司）；RE-52A旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；ZK-82型真空干燥機（上海市實驗儀器總廠）；202-2-5型電熱恒溫干燥箱（上海躍進醫療器械廠）。

1.2試藥

黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究所，110781-200613）；鵝不食草為菊科植物鵝不食草Centipeda minima（L.）A.Br.et Aschers.的干燥全草；白術為菊科植物白術Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖；白芷為傘形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch. Ex Hoffm.）Benth. et Hook. f.的干燥根；防風為傘形科植物防風Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.的干燥根；廣藿香為唇形科植物廣藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分；丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮；烏梅為薔薇科植物梅Prunus mume（Sieb.）Sieb. Et Zucc.的干燥近成熟果實。各藥材均購自南寧市友和古城大藥房，經廣西中醫藥大學制藥廠質量保證部檢驗合格。乙腈（Fisher公司，色譜純）；超純水由密思博超純水機制備；氨水、正丁醇、甲醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）。

2方法與結果

2.1醇沉工藝的研究

2.1.1 L9（34）正交試驗因素水平的確定 十味鵝黃顆粒處方藥材按水提工藝濃縮成清膏后，加入乙醇沉淀進一步除去雜質，影響醇沉效果的主要因素為：①醇沉前清膏相對密度A；②加入乙醇的濃度B；③醇沉液的含醇量C；④靜置時間D。以上因素在三個水平上，進行正交試驗優化，采用L9（34）正交表進行正交試驗（表1）。

2.1.2考察指標的確定及評價方法 醇沉工藝正交試驗的評價：本品方中君藥黃芪中黃芪甲苷的含量高低，與本品的有效性密切相關。因此，確定用十味鵝黃顆粒醇沉液中的黃芪甲苷含量作為代表性指標，評價醇沉工藝的優劣。

2.1.3醇沉液樣品的制備 依據處方藥材量，按水提優化的工藝煎煮，煎煮液過濾濃縮后定容至9000 ml，分成9份，每份取1000 ml，按正交設計試驗表安排試驗，醇沉液過濾后，濃縮至500 ml，作為供試品溶液。

2.1.4醇沉液中黃芪甲苷含量的測定 根據課題組前期采用HPLC-ELSD法測定十味鵝黃顆粒中黃芪甲苷的含量測定方法進行測定。

2.1.4.1色譜條件 按2015年版《中國藥典》高效液相色譜法，色譜柱：美國安捷倫公司ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水，梯度洗脫（表2）；流速：1 ml/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μl；Alltech3300-ELSD型蒸發光散射檢測器參數（漂移管溫度：80℃，氣體流量：2.50 L/min，增益值：4.0）。

2.1.4.2對照品溶液的制備 取黃芪甲苷適量，精密稱定，用甲醇溶解配制成質量濃度為2.20 mg/ml的對照品溶液。分別吸取上述溶液適量定容至同一容量瓶中，加甲醇稀釋制備成含黃芪甲苷為0.816 mg/ml的對照品溶液。對照品溶液按“2.1.4.1方法”測定，色譜圖見圖1（A）。

2.1.4.3供試品溶液的制備及測定 稱取“2.1.3方法”制備的十味鵝黃顆粒醇沉液25 ml，揮去乙醇，干燥，取1 g干膏，精密稱定，精密加入25 ml 10%氨水，回流30 min，以6000 r/min離心10 min，取上清液，回流提取2次。殘渣加入5 ml 10%氨水洗滌2次，離心。合并上清液，用水飽和正丁醇萃取2次，第1次加100 ml，第2次加50 ml，合并正丁醇液，于水浴鍋上蒸干，殘渣用甲醇溶解，移至5 ml容量瓶，定容，搖勻，以13 000 r/min離心10 min，上清液即為供試品溶液。供試品溶液按“2.1.4.1方法”測定黃芪甲苷的含量，色譜圖見圖1（B）。

2.1.4.4陰性供試品溶液的制備 原方去黃芪，按“2.1.4.3方法”制備陰性供試品溶液，按“2.1.4.1方法”測定，色譜圖見圖1（C）。

2.1.5試驗結果 分析正交試驗結果表明，各因素對醇沉效果的影響依次為：濃縮液相對密度A>含醇量C>乙醇濃度B>靜置時間D，醇沉工藝的最佳水平組合為：A3B2C3D3，即濃縮液相對密度1.15～1.19，含醇量70%，加入90%乙醇，靜置48 h（表3）。方差分析結果可知，乙醇濃度及靜置時間為最小影響因素（表4）。因此，為提高效率，醇沉工藝定為濃縮液濃縮至相對密度1.15～1.19，加入95%乙醇調節醇沉液含醇量至70%，靜置12 h。

2.2干燥工藝的研究

2.2.1干燥方式的選擇 目前中藥浸膏常用的干燥方法有常溫干燥、減壓干燥、噴霧干燥、微波干燥、冷凍干燥等，不同干燥方法對中藥浸膏中有效成分的含量均產生不同的影響[14-21]。課題組前期進行預試驗，發現噴霧干燥浸膏“粘壁”現象嚴重，干燥損耗率較高（損耗達≥30%）；常溫干燥使用設備簡單，但干燥時間較長（≥48 h），效率低下；減壓干燥時間短，損耗率低，因此，選擇減壓干燥作為產品的干燥方式。

2.2.2干燥溫度的選擇 本產品按優化的水提及醇沉工藝制備得稠膏后，分別稱取稠膏5 g，于75℃、85℃、95℃下減壓干燥至恒重，取干膏1 g，精密稱定，按“2.1.4.3的方法”測定干膏中黃芪甲苷的含量。實驗結果提示，干燥溫度對本品黃芪甲苷含量有影響，以85℃減壓干燥最佳，能提高工效且不降低黃芪甲苷含量（表5）。因此，確定稠膏的干燥溫度條件為85℃減壓干燥。

2.3醇沉及干燥優化工藝驗證實驗

為驗證醇沉及優化工藝的可行性及穩定性，按優化的水提醇沉及干燥工藝重復3次，測定所得干膏中的黃芪甲苷含量，計算干膏得率。結果提示，按優化的水提醇沉及干燥工藝生產的產品含有與處方藥味相應的有效成分，且重復性好，質量穩定，具有可操作性（表6）。

3討論

影響中藥醇沉工藝的因素主要有初膏濃度及溫度、乙醇用量及乙醇濃度、醇沉溫度及時間、加醇方式、攪拌速度及原材料影響等。國內研究者多以中藥制劑中的某一成分含量作為優化指標，考察初膏濃度、乙醇用量及醇沉時間3個因素對醇沉工藝的影響。目前相關研究指出，由于中藥成份較為復雜，往往多指標、多成份、多靶點發揮作用，單純用一種活性成分含量高低作為優化工藝的指標是欠妥的。美國FDA的作法是，其不求工藝為最優的，但是追求一定要是穩定的，具有生產可重復性的。借鑒此種觀點，本研究的醇沉工藝優選，除以黃芪甲苷含量作為優化指標，考查清膏的相對密度、加入乙醇濃度、醇沉液含醇量、醇沉后靜置時間4個因素對產品醇沉工藝的影響之外，還對優化工藝的穩定性及可重復性進行了考察。按優化的醇沉及干燥工藝生產了3批中試產品，測定干膏中黃芪甲苷平均含量為5.48 mg/g（RSD為1.74%，n=3），干膏平均得率為12.09%（RDS為2.28%，n=3）。

不同干燥方式及溫度對中藥浸膏中黃芪甲苷含量均產生影響。目前常用的干燥方式有常溫干燥、真空干燥、噴霧干燥、微波干燥、遠紅外干燥、真空帶式干燥等。本研究考察了常溫、減壓、噴霧干燥工藝對產品浸膏干燥時間、損耗率及主要成分黃芪甲苷含量的影響，其他干燥方式對產品質量穩定性及黃芪甲苷含量的影響，還有待進一步的研究。

本研究采用正交設計，以制劑處方中君藥黃芪中的黃芪甲苷含量作為優化指標，考察產品的醇沉工藝，確定十味鵝黃顆粒最佳醇沉工藝為濃縮液相對密度1.10～1.15（80℃），加入95%乙醇使含醇量達70%，醇沉時間12 h。此外，本研究確定了產品的最佳干燥工藝為減壓干燥，干燥溫度85℃。按優化工藝生產的產品含有與處方藥味相應的有效成分，且質量穩定，重復性好，適合工業大生產。另外，本產品經水提工藝處理后，干膏得率約22%，經過醇沉及干燥工藝后，干膏得率降至約12%，既減少了患者的服用劑量，也為后續制粒工藝提供了便利。

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（收稿日期：2018-04-21 本文編輯：孟慶卿）