肺癌組織中細胞角蛋白7和細胞角蛋白20的表達及其與預后的關系

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(1.南方醫科大學附屬南海醫院、佛山市南海區人民醫院腫瘤科二區， 廣東 佛山 528200；2.南方醫科大學附屬南海醫院、佛山市南海區人民醫院呼吸內科，廣東 佛山 528200)

肺癌是一種臨床常見的惡性腫瘤，發病率呈逐年上升趨勢，已成為惡性腫瘤死亡的主要原因之一。肺癌組織存在細胞角蛋白(cytokeratin，CK)不同程度的表達，CK主要分布于上皮細胞，是角質細胞中的主要骨架蛋白，這種結構蛋白的主要功能是維持上皮組織的完整性及連續性。目前，有超過20種亞型已經確認分布在不同器官的上皮細胞上。其中，CK7產生于器官的腺癌成分，包括肺部組織，主要表達部位是細胞的細胞質[1-2]。CK20是一種Ⅰ型低相對分子質量CK，具有嚴格的上皮組織特異性，只有在上皮組織和上皮來源的腫瘤組織中表達[3]。多數研究[2，4]表明CK7、CK20已用于原發性肺腺癌的鑒別診斷和轉移癌原發部位起源的檢測，以及起源于上皮組織惡性腫瘤的研究。我們分析探討CK7和CK20的表達與肺癌預后臨床指標的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2014年1月在南方醫科大學附屬南海醫院住院的肺癌患者80例，其中男55例，女25例；年齡25～85(46.15±5.6)歲。入選標準：1)年齡18～70 歲；2)PS評分0～1分；3)經組織病理和免疫組化明確診斷；4)至少有1個可測量的病灶；5)無主要器官的功能障礙，血常規、肝功能、腎功能及心臟功能基本正常。白細胞計數≥4.0×109·L-1、中性粒細胞計數≥1.5×109·L-1、血小板計數≥80×109·L-1、血紅蛋白≥90 g·L-1，血清膽紅素≤1.5倍正常值的上限、谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶≤2.5倍正常值的上限、血肌酐≤133μmol·L-1；6)預計生存時間超過3個月；7)能理解本治療情況并已簽署知情同意書者；8)進行血清及尿妊娠實驗檢查，排除懷孕可能。所有患者行規范的手術、化療、放療、靶向等綜合性治療。

1.2吸煙情況按吸煙指數0、<400和≥400年支分為3個級別[5]。

1.3隨訪所有患者組織病理學診斷明確為觀察起點，按照2013年美國NCCN指南進行規范性治療，采用微信群、QQ群等新時代自媒體方式進行追蹤觀察，觀察期暫為2 a。

1.4檢測方法所有組織標本在手術過程或進行肺部腫物穿刺活檢中獲得，固定于質量分數10%中性多聚甲醛溶液中，并進行常規脫水、石蠟包埋、備用于免疫組化。免疫組化染色：所有組織標本均做HE染色及免疫組化染色。嚴格采用免疫組化EliVision兩步法對組織標本進行染色。標本24 h固定于質量分數10%中性多聚甲醛溶液中，然后嵌入在常規石蠟用于歸檔。標本常規石蠟包埋，連續切取4～5 片厚度為5 μm 的切片，與磷酸鹽緩沖液作為陰性對照。免疫組化染色方法按照試劑盒說明書操作，在染色過程中，用已知CK7、CK20陽性組織芯片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.5判定標準用病理圖像分析儀進行檢測。由經驗豐富且不知情的同一病理科醫生在光學顯微鏡下進行觀察判定。陽性表達標準是CK7和CK20均位于細胞質內，并發現細胞質或細胞核呈棕黃色或黃色。隨機選擇10個用400倍率顯微鏡下觀察切片。每個視野觀察50～100個細胞，計算所有觀察細胞中陽性細胞百分數，評分系統參考陽性細胞百分率：<1%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。0分定義為陰性(-)，1～2分為陽性(+)，>2分為強陽性(++)，后兩者均計為陽性。評分后在雙盲模式下對結果進行計算。

1.6統計學處理采用SPSS18.0進行數據分析，計數資料比較用χ2檢驗，生存分析用Kaplan-Meier 法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1肺癌組織中CK7和CK20的表達與患者臨床病理特征的關系肺癌組織中CK7和CK20表達陽性率分別為70.00%、18.75%。肺癌組織中CK7表達陽性率與患者病理類型和遠處轉移與否有關(P均<0.05)。見表1。

表1 肺癌組織中CK7和CK20的表達與患者臨床病理特征的關系

2.2CK7和CK20的表達與肺癌患者預后情況的關系CK7陽性肺癌患者2 a生存率與遠處轉移、TNM分期有關(P均<0.05)。CK20陽性肺癌患者2 a生存率與分化程度、遠處轉移、TNM分期有關(P均<0.05)。見表2。

表2 肺癌患者2 a生存率影響因素的單因素Kaplan-Meier分析結果

3 討論

CK具有極高的保守性和組織分化特異性，與上皮細胞的類型、增殖、分化密切相關，因而被用作腫瘤標志[6]。我們的免疫組化檢查結果顯示，CK20和CK7均位于細胞質，肺癌組織中CK7和CK20的表達具有一定的陽性率，CK7和CK20高表達于異常增生的上皮組織，這些異常增生的上皮組織細胞其功能有所增強，提示CK7和CK20陽性表達可能與肺癌的發生、發展等密切相關。我們還觀察到在肺癌組織中CK7表達陽性率高于CK20，且主要表達于腺癌，兩者在Ⅲ～Ⅳ期的表達明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，與文獻[7]統計基本相同。本研究結果也顯示，肺癌組織中CK7表達陽性率與患者病理類型和遠處轉移與否有關(P均<0.05)；CK7陽性肺癌患者2 a生存率與遠處轉移、TNM分期有關(P均<0.05)。CK20陽性肺癌患者2 a生存率與分化程度、遠處轉移、TNM分期有關(P均<0.05)。這些結果證實，CK7和CK20不但可以作為輔助診斷的標志物，同時還可以成為了解病情預后情況、復查評估的標志物。我們的跟蹤研究表明，CK7和CK20表達陽性患者其生存時間明顯短于表達陰性的患者。

經過研究發現，CK20的表達也可以預測腫瘤早期轉移和亞臨床轉移情況，在肺癌中的過度表達作為微轉移的指標具有較高的敏感性[8-9]。我們探討CK20的表達在惡性腫瘤相關的臨床病理特征與預測臨床預后價值。CK20陽性表達可作為轉移性肺癌的一個重要標志，是肺癌預后不良的預測因素之一。Tsouma等[10]研究報道CK20在外周血的檢出率高達78.4%，目前在國內外對CK7和CK20的研究只見有對食管、胃、結直腸癌的研究報道，和只是針對黏液性肺癌單一病種的分析，以及單純CK7在肺癌、肺轉移癌中的臨床意義的研究[2]。國內尚未發現全面評價CK7和CK20兩者在肺癌組織中的表達關系及治療反應情況的報道。

總之，肺癌組織中CK7的表達陽性率高于CK20，且主要表達于腺癌，CK7和CK20兩者表達與患者的生存預后關系密切，表達陽性者預后較表達陰性者預后差。而且本研究有助于本地區臨床工作者更加全面了解治療情況，為患者制定更加優化的個體化治療方案。