美花圓葉筋骨草化學成分研究

楊 凡，王利霞，唐 飛，閆洪玲，沈曉飛，張 梅，趙文吉，譚玉柱*

1成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗 四川省中藥資源系統研究與開發利用重點實驗室—省部共建國家實驗室培育基地，成都 611137；2四川大學華西第二醫院 西部婦幼醫學研究院，成都 610041；3四川省草原科學研究院，成都 610097

美花圓葉筋骨草AjugaovalifoliaBur.et Franch.var.calantha(Diels ex Limpricht) C.Y.Wu et C.Chen為唇形科(Labiate)筋骨草屬(AjugaLinn.)植物,產于四川西部及西北部、甘肅西南部，是藏藥達巴巴的來源之一[1-3]。其性味苦寒，功效清熱解毒、涼血消腫，全草藥用可治療浮腫后流黃水、關節積黃水、骨松質發炎、筋骨疼痛等癥[3]。其療效顯著，民間應用廣泛。但關于其化學成分和藥理活性的現代研究鮮有報道。課題組前期研究表明，筋骨草屬主要含有二萜、甾體、黃酮等成分[4]。本文在前期研究基礎上，進一步對其化學成分進行研究，為筋骨草屬藥用資源開發奠定基礎。本實驗采用70%丙酮水對美花圓葉筋骨草進行冷浸提取，減壓濃縮后采用系統溶劑法得到各個萃取部位，通過多種色譜分離技術從乙酸乙酯部位中分離得到12個化合物，分別鑒定為2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-β-D-glucopyranoside(1)、oct-1-en-3-yl-β-glucopyranoside(2)、異地黃苷(3)、20-羥基蛻皮素-20,22-單丙酮化合物(4)、n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、(2S)-3-O-octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoylglyceryl-O-β-D-galactopyranoside(6)、地黃苷(7)、乙酰哈巴苷(8)、水龍骨素 B(9)、香草乙酮(10)、筋骨草內酯(11)、α-(9Z,12′Z,15′Z)-octadecatrienoic acid monoglyceride(12)?；衔?～6、8、12為首次從該屬植物中分離得到，化合物1～9，11～12為首次從該種植物中分離得到。本研究對分離得到的化合物3、4、7、9、11進行了抗炎活性和PHGDH抑制活性的測定，旨在為該種藏藥資源的綜合開發利用提供參考。

1 儀器與材料

Avance 400 MHz 超導核磁共振儀(德國Bruker公司)；LC50型中高壓制備一體機(賽譜銳思北京科技有限公司)；酶標儀(美國Fisher公司)；Sephadex LH-20色譜填料(瑞士Pharmacia公司)；MCI樹脂(日本三菱化學公司)；硅膠GF254薄層預制板(青島海洋化工廠)；200 ～ 300目柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；色譜純甲醇(美國TEDIA 公司)；氘代試劑(美國CIL公司)；優普UPT系列超純水(成都優普電子產品有限公司)；其他試劑為分析純(成都市科隆化學品有限公司)；LPS(中國上海Sigma公司， L-2880)；RAW264.7細胞株(中國科學院細胞庫，上海)；DMEM + 10% FBS + 1% 雙抗(青霉素，鏈霉素)(美國Hyclone公司)；CCK8，BAY 11-7085，Griess試劑(中國Beyotime公司)。

美花圓葉筋骨草于2017年12月采收于四川阿壩紅原縣邛溪鎮，經中國科學院植物研究所系統與進化植物學國家重點實驗室王強副研究員鑒定為唇形科筋骨草屬植物美花圓葉筋骨草AjugaovalifoliaBur.et Franch.var.calantha(Diels ex Limpricht) C.Y.Wu et C.Chen，樣品標本(JGC-1712)現存于成都中醫藥大學中藥化學1001研究室。

2 提取與分離

美花圓葉筋骨草干燥全草6 kg，粉碎后用70%丙酮水溶液室溫冷浸提取5次，濃縮提取液，依次用石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯部位(210 g)經 MCI脫色素，再經硅膠柱色譜(氯仿-甲醇，10∶1 ～ 1∶1)梯度洗脫，薄層檢識，合并相同流分，減壓回收溶劑，得到6個組分 Fr.1 ～ Fr.6 。Fr.3 經中壓制備色譜(甲醇-水，30∶70 ～ 100∶0 )梯度洗脫，薄層檢識，合并相同流分，得到流分Fr.3.1 ～ Fr.3.8 ；Fr.3.3 經半制備 HPLC(甲醇-水，60∶40)分離得到化合物1(7 mg)和化合物2(5 mg)；Fr.3.4 經半制備 HPLC(甲醇-水，75∶25)分離得到化合物11(7 mg)和化合物4(8 mg)；Fr.3.6 經半制備 HPLC(甲醇-水，70∶30)分離得到化合物8(5 mg)。Fr.4 經 Sephadex LH-20 凝膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇，4∶6)洗脫，薄層檢識，合并相同流分，得到流分Fr.4.1 ～ Fr.4.5 ；Fr.4.2 經半制備 HPLC(甲醇-水，70∶30)分離得到化合物12(12 mg)；Fr.4.3 經半制備 HPLC(甲醇-水，70∶30)分離得到化合物5(5 mg)； Fr.4.4 經半制備 HPLC(甲醇-水，60∶40)分離得到化合物3(4 mg)和化合物6(3 mg)和化合物9(5 mg)。Fr.5 經半制備 HPLC(甲醇-水，60∶40)分離得到化合物7(7 mg)和化合物10(5 mg)。

3 生物活性測定

3.1 抗炎活性篩選

取指數生長期的小鼠巨噬細胞 RAW264.7鋪于24孔板(2.5 × 105細胞/孔)，在37 °C、5% CO2的培養箱中常規培養于DMEM培養液中，過夜，用50 μM濃度的單體化合物預處理2小時后，再加入LPS(0.5 μg/mL)反應24小時。以BAY 11-7085為陽性對照，通過Griess反應評估細胞培養基中的NO水平。

3.2 PHGDH抑制活性測定

將人源PHGDH基因(1-310)克隆至pET16載體，其N端攜帶有6×His標簽。隨后將載體轉化至E.coliBL21，28 °C培養，異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)誘導蛋白表達。待菌液吸光度達到0.6～1.0(600 nm)，超聲破碎細菌，Ni柱純化，測定濃度后-80 °C凍存備用。配制所需試劑：

Mix1:0.1 mM 3-PG;0.1 mM resazurin;4 mM NAD+;0.001 U/μL diaphorase(30 μL)

Mix2:單體化合物(50 μL，25 μM)+ 0.5 μM PHGDH(20 μL)

首先將Mix2加入到96孔板中，于室溫下孵育20 min。隨后加入Mix1，使得總體系達到100 μL，室溫繼續孵育45 min。以CBR-5884為陽性對照，以550 nm激發，590 nm檢測各孔吸光度值。

4 結構鑒定

化合物1 黃色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z349.125 9[M+Na]+(計算值為349.126 3)，相對分子量326，分子式C16H22O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.09(1H,d,J=8.3 Hz,H-6),6.83(1H,d,J=2.0 Hz,H-3),6.73(1H,dd,J=8.3,2.0 Hz,H-5),6.01～5.90(1H,m,H-8),5.09～5.00(2H,m,H-9),4.85(1H,d,J=7.4 Hz,H-1′),3.87(1H,dd,J=12.0,1.6 Hz,H-6′b),3.84(3H,s,2-OCH3),3.72-3.67(1H,m,H-6′a),3.52～3.33(6H,m,H-7,2′,3′,4′,5′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:151.0(C-2),146.5(C-1),139.1(C-8),136.7(C-4),122.3(C-5),118.5(C-6),116.0(C-9),114.4(C-3),103.3(C-1′),78.3(C-5′),78.0(C-3′),75.1(C-2′),71.5(C-4′),62.7(C-6′),56.9(2-OCH3),40.9(C-7)。以上數據與文獻[5]報道一致，故鑒定化合物1為2-methoxy-4-(2-propenyl)-phenyl-β-D-glucopyranoside。

化合物2 白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z313.162 4[M+Na]+(計算值為313.162 7)，相對分子量290，分子式C14H26O6；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.88(1H,ddd,J=17.3,10.4,7.1 Hz,H-2),5.20(1H,dt,J= 17.3,1.4 Hz,H-1a),5.09(1H,dt,J=10.4,1.4 Hz,H-1b),4.32(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),4.12(1H,td,J=7.1,5.8 Hz,H-3),3.81(1H,dd,J=11.9,2.5 Hz,H-6′a),3.64(1H,dd,J=11.9,5.5 Hz,H-6′b),3.39～3.14(4H,m,H-2′,3′,4′,5′),0.90(3H,t,J=6.8 Hz,H-8 );13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:141.2(C-2),116.1(C-1),103.3(C-1′),83.0(C-3),78.4(C-5′),77.9(C-3′),75.5(C-2′),71.8(C-4′),62.9(C-6′),35.8(C-4),33.1(C-6),25.8(C-5),23.8(C-7),14.5(C-8)。以上數據與文獻[6]報道一致，故鑒定化合物2為 oct-1-en-3-yl-β-gluco-pyranoside。

化合物3 黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z675.226 3[M+Na]+(計算值為675.223 0)，相對分子量652，分子式C31H40O15；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.63(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′′′),7.16(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′′′),7.02(1H,dd,J=8.2,2.0 Hz,H-6′′′),6.80(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′′′),6.76(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.69(1H,d,J=2.0 Hz,H-2),6.61(1H,dd,J=8.2,2.0 Hz,H-6),6.39(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′′′),5.17(1H,d,J=1.9 Hz,H-1′′),4.51(1H,dd,J=11.9,2.3 Hz,H-6′),4.38(1H,dd,J=11.9,6.2 Hz,H-6′),4.33(1H,d,J=7.9 Hz,H-1′),3.99(1H,dd,J=9.1,2.8 Hz,H-5′′),3.95(1H,dd,J=3.5,1.8 Hz,H-2′′),3.86(3H,s,3′′′-OCH3),3.85(1H,m,H-7),3.79(1H,m,H-7),3.75(3H,s,4-OCH3),3.72(1H,d,J=3.3 Hz,H-3′′),3.69(1H,d,J=3.2 Hz,H-5′)2.80(2H,t,J=7.5 Hz,H-8),1.25(3H,d,J=6.2 Hz,H-6′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:169.2(C-9′′′),150.9(C-4′′′),149.6(C-3′′′),147.7(C-3),147.5(C-7′′′),147.3(C-4),132.9(C-1),127.9(C-1′′′),124.4(C-6′′′),121.3(C-6),117.2(C-5),116.7(C-5′′′),115.5(C-8′′′),113.0(C-2),111.9(C-2′′′),104.6(C-1′),102.9(C-1′′),84.3(C-3′),75.8(C-2′),75.6(C-5′),74.2(C-4′′),72.5(C-2′′),72.5(C-3′′),72.4(C-7),70.7(C-4′),70.2(C-5′′),64.8(C-6′),56.6(3′′′,4-OCH3),36.9(C-8),18.0(C-6′′)。以上數據與文獻[7]報道一致，故鑒定化合物3 異地黃苷。

化合物4 白色粉末(甲醇)；ESI-MS：m/z543.328 8[M+Na]+(計算值為543.3298)，相對分子量520，分子式C30H48O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.81(1H,d,J=2.3 Hz,H-7),3.95(1H,d,J=3.2 Hz,H-3),3.83(1H,dt,J=12.1,4.0 Hz,H-2),3.15(1H,dd,J=10.6,7.3 Hz,H-9),1.39(3H,s,H-29),1.32(3H,s,H-30),1.21(3H,s,H-21),1.20(3H,s,H-26),1.18(3H,s,H-27),0.96(3H,s,H-19),0.83(3H,s,H-18);13C NMR(CD3OD,100 MHz )δ:206.6(C-6),167.8(C-8),122.3(C-7),108.2(C-28),86.0(C-22),85.5(C-14),83.5(C-20),71.3(C-25),68.9(C-2),68.7(C-3),52.0(C-5),50.7(C-17),49.2(C-13),42.4(C-24),39.4(C-10),37.5(C-1),35.3(C-9),32.8(C-4),32.5(C-12),31.9(C-15),29.6(C-26),29.5(C-27),29.1(C-29),27.3(C-30),24.9(C-23),24.6(C-19),22.7(C-21),22.6(C-16),21.7(C-11),17.8(C-18)。以上數據與文獻[8]報道的數據一致，故鑒定化合物4 為20-羥基蛻皮素-20,22-單丙酮化合物。

化合物5 黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z315.178 1[M+Na]+(計算值為315.178 4)，相對分子量292，分子式C14H28O6；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:4.24(1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.89 -3.86(1H,m,H-8),3.85 -3.82(1H,m,H-6′a),3.69 -3.67(1H,m,H-6′b),3.55 -3.51(1H,m,H-8),3.37 -3.33(1H,m,H-3′),3.28 -3.26(2H,m,H-4′,5′),3.17 -3.13(1H,m,H-2′),1.61(2H,d,J=7.4 Hz,H-7),1.32 -1.28(10H,m,H-2,3,4,5,6),0.90(3H,t,J=6.9 Hz,H-1);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:104.6(C-1′),78.3(C-3′),78.1(C-5′),75.3(C-2′),71.9(C-4′),71.1(C-8),63.0(C-6′),33.2(C-7),31.0(C-6),30.7(C-5),30.6(C-4),27.3(C-3),23.9(C-2),14.5(C-1)。以上數據與文獻[9]報道的數據一致，故鑒定化合物5為n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物6 黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z537.153 3[M+Na]+(計算值為537.152 5)，相對分子量514，分子式C27H46O9；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.44～5.25(6H,m,H-9′′),4.23(1H,d,J=7.5 Hz,H-1′),4.19 -4.10(2H,m,H-3),4.02～3.94(1H,m,H-1),3.91(1H,dd,J=10.5,5.2 Hz,H-1),3.83(1H,dd,J=3.3,1.1 Hz,H-4′),3.74(1H,m,H-6′a),3.66(1H,dd,J=10.5,4.6 Hz,H-6′b),3.57 -3.53(1H,m,H-2′),3.52 -3.49(1H,m,H-5′),3.47(1H,dd,J=9.7,3.3 Hz,H-3′),2.81(4H,t,J=6.0 Hz,H-11′′,14′′),2.35(2H,t,J=7.5 Hz,H-2′′),2.08(4H,m,H-17′′,8′′),1.62(2H,m,H-3′′),1.43 -1.27(8H,m,H-4′′,5′′,6′′,7′′),0.97(3H,t,J=7.5 Hz,H-18′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:175.6(C-1′′),132.9(C-16′′),131.2(C-15′′),129.4(C-12′′),129.3(C-13′′),129.0(C-10′′),128.4(C-9′′),105.5(C-1′),76.9(C-5′),75.0(C-3′),72.7(C-2′),72.0(C-1),70.4(C-4′),69.8(C-2),66.7(C-3),62.6(C-6′),35.1(C-2′′),30.8(C-4′′),30.4(C-5′′),30.3(C-6′′),30.3(C-7′′),28.3(C-8′′),26.7(C-14′′),26.6(C-11′′),26.1(C-3′′),21.6(C-17′′),14.8(C-18′′)。以上數據與文獻[10]報道一致，故鑒定化合物6為(2S)-3-O-octadeca-9Z,12Z,15Z-trienoyl-glyceryl-O-β-D-galactopyranoside。

化合物7 棕黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z675.223 7[M+Na]+(計算值為675.223 0)，相對分子量652，分子式C31H40O15；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.65(1H,d,J=15.9 Hz,H-7′′′),7.18(1H,d,J=1.4 Hz,H-2′′′),7.07(1H,dd,J=8.2,1.4 Hz,H-6′′′),6.81(2H,d,J=8.2 Hz,H-5,5′′′),6.73(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.67(1H,dd,J=8.2,1.8 Hz,H-6),6.36(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′′′)，5.20(1H,brs,H-1′′),4.92(1H,t,J=9.1 Hz,H-4′),4.37(1H,d,J=8.0 Hz,H-1′),3.87(3H,s,4-OCH3),3.80(3H,s,4′′′-OCH3),3.3～4.2(7H,m,H-2′,3′,5′,6′,4′′,5′′,7),2.81(2H,m,H-8),1.16(1H,d,J=6.2 Hz,H-6′′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:168.4(C-9′′′),150.9(C-4′′′),149.5(C-3′′′),148.0(C-7′′′),147.7(C-3),147.5(C-4),133.0(C-1),127.8(C-1′′′),124.5(C-6′′′),121.3(C-6),117.2(C-5),116.7(C-5′′′),115.3(C-8′′′),113.0(C-2),112.0(C-2′′′),104.3(C-1′),103.1(C-1′′),81.6(C-3′),76.3(C-2′),76.2(C-5′),73.9(C-4′′),72.5(C-2′′),72.3(C-7),72.2(C-3′′),70.8(C-4′),70.5(C-5′′),62.5(C-6′),56.7(4-OCH3),56.6(4′′′-OCH3),36.7(C-8),18.6(C-6′′)。以上數據與文獻[11]報道一致，故鑒定化合物7為地黃苷。

化合物8 棕黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z429.317 8[M+Na]+(計算值為429.319 2)，相對分子量406，分子式C17H26O11；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:6.38(1H,d,J=6.4 Hz,H-3),6.07(1H,d,J=1.3 Hz,H-1),4.91(1H,dd,J=6.4,1.4 Hz,H-4),4.59(1H,d,J=7.9 Hz,H-1′),4.29(1H,t,J=6.6 Hz,H-6′),3.89(1H,dd,J=12.0,1.7 Hz H-6′),3.71(1H,d,J=5.4 Hz,H-6),2.86(1H,s,H-9),2.18(1H,d,J=15.1 Hz,H-7),2.01(3H,s,H-12),1.95(1H,dd,J=15.1,4.5 Hz,H-7),1.46(3H,s,H-10);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:173.4(C-11),144.0(C-3),107.1(C-4),100.1(C-1′),94.7(C-1),88.8(C-8),78.3(C-6),77.8(C-3′),77.7(C-5′),74.7(C-2′),73.5(C-5),71.9(C-4′),63.0(C-6′),55.7(C-9),46.2(C-7),22.6(C-10),22.3(C-12)。以上數據與文獻[12]報道一致，故鑒定化合物8為乙酰哈巴苷。

化合物9 無色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z519.294 4[M+Na]+(計算值為519.293 4)，相對分子量496，分子式C27H44O8；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.86(1H,d,J=2.6 Hz,H-7 ),4.02～3.92(2H,m,H-2,3),3.20(1H,m,H-22),1.21(3H,s,H-27),1.20(3H,s,H-26),1.19(3H,s,H-21),0.92(3H,s,H-19)，0.90(3H,s,H-18);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:202.5(C-6),167.5(C-8),120.7(C-7),85.2(C-14),80.5(C-5),78.6(C-22),78.0(C-20),71.4(C-25),70.4(C-3),68.6(C-2),50.6(C-17),48.1(C-13),45.6(C-10),42.5(C-24),39.2(C-9),36.3(C-4),34.4(C-1),32.7(C-12),31.9(C-15),29.9(C-27),29.1(C-26),27.5(C-23),22.7(C-11),21.6(C-16),21.2(C-21),18.2(C-19),17.1(C-18)。以上數據與文獻[13]報道一致，故鑒定化合物9為水龍骨素 B。

化合物10 無色晶體(甲醇)；ESI-MS：m/z167.071 0[M+H]+(計算值為167.070 8)，相對分子量166，分子式C9H10O3；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:7.52～7.49(2H,m,H-6,2),6.92(1H,d,J=8.7 Hz,H-5),3.92(3H,s,3-OCH3),2.53(3H,s,H-8);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:197.0(C-7),150.6(C-4),146.8(C-3),130.3(C-1),124.2(C-6),113.9(C-2),109.9(C-5),56.2(3-OCH3),26.3(C-8)。以上數據與文獻[14]報道一致，故鑒定化合物10為香草乙酮。

化合物11 黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z525.402 8[M+ Na]+(計算值為525.404 4)，相對分子量502，分子式C29H42O7；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.98(1H,d,J=2.4 Hz,H-7),4.20(1H,dd,J=12.6,4.1 Hz,H-22),3.98(1H,d,J=2.9 Hz,H-3),3.85～3.78(1H,m,H-2),3.55(1H,t,J=10.6 Hz,H-9),2.93(1H,t,J=9.1 Hz,H-17),2.77(1H,q,H-11),2.53～2.43(4H,m,H-23,28),2.40 -2.32(1H,m,H-16),2.26～2.19(1H,m,H-15),1.87(3H,s,H-27),1.82～1.72(2H,m,H-16,15),1.71～1.65(2H,m,H-1),1.29(3H,s,H-21),1.28(3H,s,H-18),1.24(3H,t,H-29),1.10(3H,s,H-19);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:212.5(C-12),205.4(C-6),169.3(C-26),163.2(C-8),157.5(C-24),124.0(C-7),121.8(C-25),90.1(C-14),84.1(C-22),76.1(C-20),68.6(C-2),68.4(C-3),62.2(C-13),51.5(C-5),44.4(C-17),40.5(C-10),37.7(C-1),37.4(C-9),37.2(C-11),32.5(C-4),32.1(C-15),30.9(C-23),28.2(C-28),23.9(C-19),22.0(C-21),21.3(C-16),17.7(C-18),12.2(C-27),11.9(C-29)。以上數據與文獻[15,16]報道一致，故鑒定化合物11為筋骨草內酯。

化合物12 黃色油狀物(甲醇)；ESI-MS：m/z352.071 3[M+ Na]+(計算值為352.072 8)，相對分子量352，分子式C21H36O4；1H NMR(CD3OD,400 MHz)δ:5.38～5.31(6H,m,H-9′,10′,12′,13′,15′,16′),4.15(1H,dd,J=11.4,4.4 Hz,H-1),4.06(1H,dd,J=11.4,6.3 Hz,H-1),3.82(1H,q,J=5.5 Hz,H-2),3.55(2H,dd,J=5.6,1.8 Hz,H-3),2.81(4H,t,J=5.9 Hz,H-11′,14′),2.35(2H,t,J=7.4 Hz,H-2′),2.09(4H,q,J=7.4,6.9 Hz,H-3′,8′),1.41～1.27(10H,m,H-4′,5′,6′,7′,17′),0.97(3H,t,J=7.5 Hz,H-18′);13C NMR(CD3OD,100 MHz)δ:175.7(C-1′),132.9(C-16′),131.2(C-9′),129.4(C-12′),129.4(C-13′),129.0(C-15′),128.4(C-10′),71.3(C-2),66.7(C-1),64.3(C-3),35.1(C-2′),30.8(C-5′),30.4(C-7′),30.3(C-4′,6′),28.30(C-8′),26.7(C-11′),26.6(C-14′),26.1(C-3′),21.6(C-17′),14.8(C-18′ )。以上數據與文獻[17]報道一致，故鑒定化合物12為α-(9′Z,12′Z,15′Z)-octadecatrienoic acid monoglyceride。

5 生物活性測定結果

本實驗運用脂多糖(LPS)誘導的小鼠巨噬細胞RAW264.7生成的NO細胞模型對化合物3、4、7、9、11進行了抗炎活性測定，以Bay 11-7085為陽性對照，測試濃度為50 μM，通過測定化合物對NO的抑制作用評價其抗炎活性。3-磷酸甘油酸脫氫酶(PHGDH)是絲氨酸合成途徑的關鍵酶，與多種腫瘤的發生發展密切相關。抑制PHGDH活性可以表現出一定的抗腫瘤作用。本實驗對上述化合物進行了PHGDH抑制活性測定，以CBR5884為陽性對照，測試濃度為25 μM。結果顯示化合物3、4、7、9、11對NO抑制率不顯著，沒有明顯的抗炎活性；化合物7對PHGDH具有一定的抑制作用，其抑制率為23.3%。

6 討論

唇形科筋骨草屬植物在全世界范圍內有超過300多種，其藥用歷史悠久，廣泛應用于治療發熱，風濕，痛風，哮喘，糖尿病等癥。目前，對于筋骨草屬植物的研究主要集中于金瘡小草，紫背金盤，苞葉筋骨草等品種，關于美花圓葉筋骨草的化學成分研究報道很少。本課題組前期從美花圓葉筋骨草中主要獲得脂溶性成分，如二萜、甾體、黃酮、香豆素等成分，但其極性成分如糖苷類則報道較少。因此本研究通過優化提取分離流程，重點對其極性成分進行研究，從乙酸乙酯部位中共分離鑒定了12個化合物，化合物1～3、5～7為糖苷類，化合物4、9、11為甾體類，化合物8為環烯醚萜類，化合物10為酚類，12為長鏈脂肪醇類，其中化合物1～6、8、12為首次從該屬植物中分離得到，化合物1～9、11～12為首次從該種植物中分離得到，進一步豐富了本種藥用植物的化學成分?；衔?、4、7、9、11的抗炎與PHGDH抑制活性研究表明，所篩化合物3、4、7、9、11均無抗炎活性，化合物7對PHGDH具有抑制作用，其抗腫瘤作用有待進一步研究。

本論文在前期研究基礎上，進一步豐富了美花圓葉筋骨草的化學成分類型，為該種藏藥資源的綜合開發和利用奠定了基礎；針對其抗炎活性和PHGDH抑制活性進行了初步篩選，盡管活性結果不盡如人意，但是對于此類分子生物活性的后期研究具有一定的參考價值和指導意義。結合美花圓葉筋骨草的民間應用經驗和臨床療效，其抗炎活性值得挖掘研究，然而關于其抗炎的藥效物質基礎尚不明確，本研究結果提示其甾體類成分、糖苷類成分非其抗炎的有效成分，其它成分如二萜等將是我們后期的研究重點。