溫陽消飲法對早期慢性心力衰竭大鼠血清血管緊張素Ⅱ及腫瘤壞死因子-α水平的影響

楊嘉豪 徐建虎

(寧夏醫科大學中醫學院，寧夏 銀川 750004)

慢性心力衰竭(CHF)是各種心血管病及各系統疾病的嚴重或終末階段，具有發病率高、死亡率高、治療費用高的特點。近年全國各地住院患者調查顯示〔1〕：60歲以下人群心力衰竭患病率在6.7%～18.8%，60～69歲人群心力衰竭患病率達23.5%，70～79歲人群則高達30.8%。其早期的發病機制一般以瘀血阻滯為主，其治法也多以活血化瘀，益氣養心為主，而忽略了水飲之邪的潛伏。前期研究〔2，3〕發現，水飲在心力衰竭早期發揮著重要作用，且《金匱要略》中亦指出：“病痰飲者，當以溫藥和之?！被诖?，本實驗選用苓桂術甘湯與葶藶大棗瀉肺湯合方組成具有溫陽健脾、利水蠲飲之功的溫陽消飲方，觀察其對CHF大鼠血清血管緊張素(Ang)Ⅱ和腫瘤壞死因子(TNF)-α水平的影響。

1 材料和方法

1.1實驗動物 6～8周齡的SPF級SD大鼠50只，全為雄性，體重(200±20)g；由寧夏醫科大學動物實驗中心提供〔許可證號：SCXK(寧)2015-0001〕；大鼠均在SPF級動物房飼養，溫度(24±2)℃，濕度(52±8)%；常規環境適應性飼養2 w后開始實驗。

1.2實驗藥物 苓桂術甘湯制劑(按原方比例，茯苓、桂枝、白術、生甘草4∶3∶3∶2組成)，葶藶大棗瀉肺湯制劑(由葶藶子、大棗組成)購自寧夏醫科大學附屬回醫中醫院門診部；鹽酸阿霉素(ADR，100 mg，aladdin公司，批號：D107159)；血府逐瘀膠囊(0.4 g/粒，天津宏仁堂藥業有限公司生產，批號：G03038)；卡托普利片(25 mg/100片，上海旭東海普藥業有限公司，批號PA170416)；大鼠血清AngⅡ、TNF-α酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(上海貝基生物科技有限公司，批號：DZE30645、DZE30526)。

1.3儀器 紫外/可見分光光度計(上海天能公司，UV751GD)；正置生物顯微鏡(德國 Leica 儀器有限公司，DM4000B)；冷凍高速離心機(珠海黑馬儀器有限公司，TGL-16R)；恒溫水浴箱(天津市工興電器廠，DFD-700)；輪轉式石蠟切片機(Leica公司，RM2235)；石蠟包埋機(湖北泰維科技實業有限公司，TB-718D)；-86℃超低溫保存箱(中國Haier公司，DW-86L578S)。

1.4分組及造模方法 SD大鼠隨機分為空白組、模型組、溫陽消飲組、血府逐瘀組、卡托普利組各10只；除空白組外，其余各組參考文獻〔4〕腹腔注射ADR。將ADR以2 mg/kg劑量溶于1 ml生理鹽水，每周1次，共注射6次。每周稱重1次，作為后期干預用藥依據。

1.5藥液制備及給藥方法 藥物劑量按照成人日用量與大鼠體表面積折算為等效劑量，1次/d，連續4 w。溫陽消飲方由茯苓、桂枝、白術、生甘草、葶藶子、大棗6味藥物按照苓桂術甘湯、葶藶大棗瀉肺湯原方配比組成，臨用前用蒸餾水配制成含生藥2 g/ml的藥物濃縮液，按9 g/(kg·d)等效劑量灌胃；血府逐瘀膠囊，臨用前用蒸餾水配制成0.1 g/ml的藥液，以0.25 g/(kg·d)等效劑量灌胃；卡托普利片，臨用前用蒸餾水配制成4 mg/ml的藥液，按10 mg/(kg·d)等效劑量灌胃；空白組、模型組均給予和卡托普利組同體積的生理鹽水灌胃。

1.6心肌細胞形態學變化 SD大鼠取血后取其心室部分，置于生理鹽水中沖洗干凈，投于10%的多聚甲醛中固定1～2 d，常規石蠟包埋切片后，將切片小心貼附于載玻片上進行HE染色，光鏡下觀察心肌細胞形態差異。

1.7血清檢測 SD大鼠末次給藥后2 h，用1.5%戊巴比妥鈉0.025 ml/kg腹腔注射麻醉后將大鼠仰臥固定在手術架上，采用腹主動脈取血8～10 ml，注入抗凝管中防止溶血。冷凍高速離心機3 000 r/min，分離10 min，取上清液，-20℃保存待測。ELISA測定血清中AngⅡ及TNF-α水平，具體操作嚴格按照試劑盒說明。

1.8統計方法 采用SPSS23.0軟件，正態分布且方差齊性的計量資料采用單因素方差分析；多個樣本均數間的多重比較采用SNK-q檢驗；不符合正態分布且方差不齊的資料采用秩轉換的非參數檢驗；計數資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1心肌組織切片染色結果 空白組心肌細胞形態規則，肌纖維完整，排列規整。橫紋清晰，胞質均勻且間質間未見血管擴張；模型組心肌細胞受損嚴重，形態不規則，肌纖維排列紊亂，大范圍腫脹且出現斷裂缺損，胞質濃染，間質血管擴張并伴隨炎性細胞浸潤。溫陽消飲組與模型組相比，心肌纖維腫脹減輕且排列整齊無斷裂，胞質均勻；卡托普利組、血府逐瘀組與模型組相比，心肌纖維亦有腫脹，空隙略增寬，偶有浸潤的炎性細胞。見圖1。

圖1 光鏡下各組心肌病理形態學(HE，×200)

2.2血清中AngⅡ、TNF-α水平 與空白組比較，模型組、卡托普利組AngⅡ、TNF-α含量顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，溫陽消飲組與血府逐瘀組及卡托普利組AngⅡ、TNF-α含量均顯著降低(P<0.01)；與血府逐瘀組比較，溫陽消飲組AngⅡ含量差異無統計學意義(P>0.05)，卡托普利組AngⅡ含量較高(P<0.01)。溫陽消飲組、血府逐瘀組、卡托普利組TNF-α含量兩兩比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清AngⅡ、TNF-α水平比較

與空白組比較:1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.01；與血府逐瘀組比較：3)P<0.01

3 討 論

ADR具有嚴重的心臟毒性，能夠抑制心肌收縮功能，從而導致心力衰竭，是臨床理想的CHF大鼠模型〔5〕。本實驗CHF大鼠心肌病理變化符合早期CHF病理特征，提示造模成功。

現代醫家對CHF認識主要有兩方面〔6〕，其一是早期的水鈉過度潴留致使血流動力學改變，繼而引起神經內分泌失調，刺激腎素-Ang-醛固酮系統(RAAS)激活，導致外周阻力增加，促發水鈉潴留。其二是眾多細胞因子對CHF病理及發病機制的影響，認為細胞因子在CHF的發病進程中，通過介導左室重構，降低心肌收縮力，致使β-腎上腺受體失耦聯而引發或加重心力衰竭。而在影響心力衰竭的眾多內分泌因子及炎癥遞質中，AngⅡ及TNF-α是重要的影響因子。

研究發現〔7〕，RAAS與炎性細胞因子是CHF病理和發病機制的重要影響因素，RAAS是人體調節血壓，維持體液平衡的重要激素系統，在心力衰竭早期便激活。AngⅡ是RAAS中最為重要的效應分子，通過多種機制在心力衰竭進程中發揮重要作用，其升高穩定，能準確反映RAAS功能狀態且其增高幅度與CHF的嚴重程度相關〔8〕。本研究結果說明在CHF發展過程中，AngⅡ發揮著重要作用，這與上述研究結果相同，也驗證了實驗CHF模型造模成功。溫陽消飲方、血府逐瘀湯在降低AngⅡ水平上優于卡托普利，提示溫陽消飲法可以拮抗心力衰竭引起的RAAS激活，并改善大鼠水鈉潴留及心功能。

TNF-α是一種由激活的巨噬細胞產生的能抑制成骨細胞和刺激破骨細胞的細胞因子，其在調控細胞增殖、分化、生長及代謝等活動中發揮著十分重要的作用〔8〕。研究發現〔9〕，心肌細胞本身不能產生TNF-α，而CHF時，可表達TNF-α，提示TNF-α可能作為心力衰竭治療的靶點。本實驗研究結果驗證了TNF-α的升高可誘導心室重塑、促發心肌細胞凋亡、介導CHF發生。溫陽消飲法可能通過降低TNF-α濃度，抑制心室重構，起到治療CHF的作用。

綜上，早期采用溫陽消飲法治療可以降低CHF大鼠血清AngⅡ、TNF-α含量，說明了早期CHF“從飲論治”的科學性，亦說明心力衰竭早期可能是痰飲、瘀血共同作用的結果。