脅腹寧顆粒對慢性非萎縮性胃炎大鼠NF-κB信號轉導通路的影響

李婷 張宇 張兆鵬 孫文靜 冷炎 劉鐵軍

(1長春中醫藥大學附屬醫院肝脾胃病科，吉林 長春 130021；2長春中醫藥大學)

脅腹寧顆粒是長春中醫藥大學附屬醫院的院內制劑，是國家級名老中醫、終身教授劉鐵軍老師的經驗方，臨床應用20余載，主要用于治療脅肋部疼痛、脹滿，相當于現代醫學的急慢性膽囊炎。在20多年的臨床實踐中，筆者發現一部分患者脅肋部疼痛脹滿伴隨胃脘部脹痛，給予脅腹寧顆粒治療后，脅肋部疼痛改善的同時，胃脘部脹痛也明顯改善，且文獻也證實膽囊炎與胃炎有一定的相關性〔1〕。本實驗擬探討脅腹寧顆粒對慢性非萎縮性胃炎大鼠胃黏膜病理組織學和白細胞介素(IL)-8、IL-10和核因子(NF)-κB的影響，擴大脅腹寧顆粒治療范圍。

1 材料與方法

1.1實驗動物 Wistar大鼠40只，雌雄均等，體重(210±10)g，購于遼寧長生生物技術股份有限公司。

1.2藥物和試劑 氨水，北京化工廠，批號：20171107；奧美拉唑，四川科倫藥業，批號：8171204151；脅腹寧顆粒，長春中醫藥大學附屬醫院制劑中心，長衛藥制字(96)1392號；酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒等。

1.3儀器 電子天平，高速離心機，病理切片機，光學顯微鏡，酶標儀，恒溫水浴箱等。

1.4造模和分組方法 將Wistar大鼠40只適應性飼養1 w后，隨機分為正常組，模型組，對照組和治療組，雌雄均等，分籠飼養。正常組每日給予標準鼠料喂養，其余給予0.02%的氨水(每日現配，保證濃度)自由飲用，同時配合饑飽失常法(1 d禁食，2 d飽食)，控制室內溫度24℃左右，連續造模90 d(預實驗已證實此方法造模成功)。造模90 d后正常組和模型組給予標準飼料喂養，每日給予生理鹽水灌胃；對照組給予奧美拉唑6.6 g/kg灌胃給藥，治療組給予脅腹寧顆粒5 g/kg灌胃給藥，連續治療14 d。治療過程中，模型組、對照組和治療組每日均給予0.02%的氨水自由飲用。

1.5檢測方法 連續給藥14 d后，所有大鼠禁食不禁水24 h，給予2%戊巴比妥鈉溶液(50 mg/kg)腹腔內注射麻醉，腹壁由下至上剪開，找到腹主動脈，用1 ml注射器抽取腹主動脈血液5 ml，離心3 000 r/min、15 min，取上清液備用。同時沿腸管找到胃組織，沿胃小彎剪開，生理鹽水沖凈，固定在泡沫浮板上，放入10%中性甲醛溶液(pH7.4)中備用。HE染色觀察胃黏膜病理變化，將胃組織酒精脫水，石蠟包埋，病理切片，蘇木精染色，伊紅染色，觀察胃黏膜組織損傷程度；ELISA法檢測血清IL-8和IL-10的含量，嚴格遵從試劑盒操作步驟，在450 nm波長用酶標儀測各孔樣品的光密度值。蛋白印跡法檢測大鼠胃組織NF-κB的蛋白含量。

1.6統計學方法 采用SPSS22.0軟件行t檢驗。

2 結 果

2.1大鼠一般狀態 模型組大鼠皮毛粗糙、無光澤，精神萎靡，眼睛無神，活動少且遲緩，進食差，體重低，形體瘦??；治療組大鼠皮毛較光亮，精神狀態佳，眼神靈活，好動，進食正常、體重中等。

2.1.1肉眼觀察 模型組胃黏膜表面粗糙，皺襞存在，呈暗紅色或淡紅色，可見散在糜爛、充血、出血點；空白組胃黏膜表面較光滑，皺襞存在，呈淡紅色，未見充血、水腫及出血點；治療組胃黏膜表面較光滑，皺襞存在，呈淡紅色，個別顏色暗紅，個別可見糜爛、充血和出血點，較模型組輕。

2.1.2鏡下觀察 模型組胃黏膜上皮細胞排列不規則，可見大量上皮細胞脫落壞死，黏膜層有出血和糜爛，黏膜下層充血明顯，大量淋巴細胞浸潤，腺體完整；正常組胃黏膜上皮細胞排列規則，結構完整，未見明顯出血、糜爛及充血水腫，未見大量淋巴細胞浸潤，腺體結構完整；治療組胃黏膜上皮排列較規則，上皮結構相對完整，黏膜層多數無出血和糜爛，黏膜下層無充血明顯，未見大量淋巴細胞浸潤，腺體完整。見圖1。

圖1 各組胃黏膜鏡下改變(HE染色，×100)

2.2各組IL-8和IL-10及NF-κB水平比較 模型組血清IL-8、IL-10明顯高于正常組(P<0.01)。對照組IL-8、IL-10較模型組有所下降(P<0.05)。經脅腹寧顆粒治療后，IL-8較模型組明顯下降(P<0.01)；IL-10較模型組有所下降(P<0.05)。NF-κB蛋白含量:模型組明顯高于正常組(P<0.05)；對照組較模型組有所下降(P<0.05)；給予脅腹寧顆粒治療后，治療組NF-κB含量明顯下降(P<0.05)。見表1，圖2。

表1 治療后各組IL-8、IL-10及NF-κB水平比較

與正常組相比:1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組相比:3)P<0.05，4)P<0.01

圖2 各組NF-κB蛋白表達

3 討 論

慢性淺表性胃炎屬于中醫的胃脘痛、胃痞、嘈雜、反酸等范疇，臨床癥狀反復，隨情緒、飲食、氣候等變化癥狀加重，故而尋求中醫治療的患者越來越多。脅腹寧顆粒由大黃、延胡索、川楝子、木香、郁金、白芍、白豆蔻、甘草等藥物組成，具有行氣導滯、通腑瀉下的作用。既往的研究證實脅腹寧顆粒具有治療膽囊炎的效果〔2～6〕。方中大黃苦寒，功能清熱瀉火，通腑瀉濁，用以導濕熱之邪由便而解，給邪以出路，故為君藥。延胡索、川楝子為佐藥，川楝子苦寒，功能清熱瀉火、行氣止痛，又能引濕熱下行；延胡索能活血行氣止痛，善治一身上下諸痛，二藥配伍應用共為臣藥，佐助君藥加強疏肝理氣、活血止痛之功。木香調暢氣機，芳香化濕，為行氣止痛常用之品；郁金為血中之氣藥，于活血化瘀之中，兼能行氣解郁，能理氣郁而散結氣，活血瘀而除血滯，助君藥通腑氣，瀉濁毒。白芍、甘草合用為芍藥甘草湯，芍藥性酸寒，甘草性甘溫，故能酸甘化陰，調和脾胃，緩急止痛。白豆蔻具有化濕行氣、開胃消食的作用，在治療疾病的同時去除濕邪，有化濕之功。

IL-8是趨化因子家族中的細胞因子，屬于促炎因子，可以由脂多糖、單核巨噬細胞等細胞因子刺激而產生，主要生物活性為吸引和激活中性粒細胞，使中性粒細胞在胃黏膜聚集而損傷胃黏膜〔7,8〕，能夠激活NF-κB信號轉導通路。本研究結果提示脅腹寧顆粒能夠使慢性淺表性胃炎大鼠IL-8水平下降。

IL-10參與炎癥反應和免疫反應，IL-6、IL-8及IL-10這些細胞因子和趨化因子可引起中性粒細胞的聚集和激活，在感染、腫瘤等疾病中起到重要作用，與消化系統、血液系統及心血管系統疾病關系密切〔9,10〕，能夠激活NF-κB信號轉導通路。本研究結果提示脅腹寧顆粒能夠使慢性淺表性胃炎大鼠IL-10水平下降，在防治胃炎組織損傷中起著重要作用。NF-κB信號轉導通路已經被證實與炎癥反應密切相關〔11〕，參與多種炎癥反應，在靜息狀態下以二聚體形式存在，其二聚體與其抑制因子IκB結合形成三聚體(p50/p65/IκB)存在于細胞質中，是無活性的，當受到外界刺激時，如腺病毒、腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、IL-10等或物理、化學因素刺激時〔12,13〕，與其特異性跨膜受體結合，激活誘導性激酶NIK，NIK再激活IKK，IKK為IκB激酶，IKK使三聚體p50/p65/IκB的IκB發生降解，NF-κB被激活，從三聚體中釋放出來，迅速進入到細胞核〔14〕，多在5 min內可以達到峰值〔15〕，進入細胞核與靶基因結合，進行轉錄和表達，促進炎癥反應的發生。本實驗結果提示慢性非萎縮性胃炎大鼠IL-8、IL-10和NF-κB水平均增高；脅腹寧顆粒治療后，IL-8、IL-10和NF-κB均下降，考慮脅腹寧顆粒治療慢性非萎縮性胃炎可能與抑制NF-κB信號轉導有關。