胃癌組織中IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白的表達特點及與Hp感染的相關性

李光艷 ，薛明輝 ，張蘭芳 ，張超賢 ，常廷民 ，李瑋

(新鄉醫學院第一附屬醫院，1.消化內科；2.胃腸外科；3.科研與繼續教育學科，河南 衛輝453100)

臨床上胃癌的發生率明顯的上升，在合并有幽門螺桿菌（Hp）感染的患者中，胃癌的發病率可進一步的上升[1]。胃癌的發生能夠導致患者高腫瘤負荷癥狀的出現，并顯著影響患者的總體生存時間[2]。

不同的腫瘤相關因子均能夠通過影響上皮細胞的異常分化及增殖過程，從而促進胃癌的發生。γ-干擾素（IFN-γ）是th1淋巴細胞分泌的效應因子，IFN-γ的上升能夠顯著促進機體的炎癥性損傷，加劇自身免疫功能紊亂程度[3]；白細胞介素-4（IL-4）是th2淋巴細胞分泌的效應因子，IL-4的濃度改變能夠影響到樹突狀T淋巴細胞的活性，導致免疫抑制和免疫逃逸的發生[4]；干細胞轉錄性別決定調控因子（S0X-2）的表達，能夠參與到多種生物學機制的進展過程中，調控上皮細胞的轉錄，抑制上皮細胞的增殖過程[5]。部分研究者探討了IFN-γ的表達與消化系統惡性腫瘤的關系，認為IFN-γ的表達上升能夠增加惡性腫瘤的發生風險[6]，但對于IFN-γ、IL-4與Hp感染的關系研究不足。為了進一步揭示IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達與胃癌的關系，從而為臨床上胃癌患者的診療提供理論基礎，本次研究選取我院2016年1月至2017年5月收集的相關胃黏膜病變組織，探討了IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達及其與Hp感染的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年1月至2017年5月收集的214例胃粘膜病理組織，其中胃潰瘍組織80例（胃潰瘍組）、胃炎組織80例（胃炎組）、胃癌組織54例（胃癌組）。

胃潰瘍組，年齡38～77歲，平均54.3±10.9歲，男45例、女35例。胃炎組，年齡35～75歲，平均56.0±12.4歲，男48例、女32例。胃癌組，年齡35～79歲，平均56.2±11.8，男33例、女21例。病理學類型：腺癌50例、印戎細胞癌4例；TNM分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期23例、Ⅲ期12例、Ⅳ期4例；發生淋巴結轉移22例。三組患者的年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：⑴胃癌、胃炎、胃潰瘍的診斷標準參考人民衛生出版社《外科學》第八版中的標準；⑵患者年齡范圍19～79歲；⑶胃癌、胃炎、胃潰瘍的診斷以病理學結果作為金標準；⑷胃癌患者在獲取標本前未接受放化療、免疫治療；⑸本研究獲得醫學倫理委員會的批準。排除標準：⑴轉移性胃癌；⑵資料不完整；⑶伴有免系統疾病。

1.2 免疫組化染色方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4μm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 IFN-γ、IL-4、SOX-2 蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察 IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

免疫組化結果判定：IFN-γ、IL-4蛋白的陽性著色表達于細胞漿，SOX-2蛋白的陽性著色表達于細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3 Hp感染檢測方法 采用C13呼氣實驗進行Hp的檢測，空腹5h后，檢查者進行呼氣，呼出的氣體大于500ml，口服C13尿酸，連續性呼出氣體100ml～150ml，采用紅外質譜檢測儀器進行檢測，測得的值-基線值大于2.5作為判斷陽性的標準。

標本經過甲醛固定后，常規脫水透明，石蠟進行包埋，4um連續性切片，Giemsa進行染色，乙醇脫水、二甲苯進行透明操作，樹膠封片。1000倍的油鏡下觀察，Giemsa染色下Hp感染呈現紅色，“S”形，主要分布于胃小凹和腺體細胞中。

2 結果

2.1 三組標本中的Hp陽性率比較 胃炎組的Hp陽性率顯著的高于胃癌組、胃潰瘍組，差異具有統計學意義（P＜0.05）；胃癌組和胃潰瘍組的Hp陽性率差異無統計學意義（P＞0.05）；見表 1。

表1 三組標本中的Hp陽性率比較[n（%）]

2.2 三組標本中的IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率比較 胃癌組的IFN-γ蛋白陽性率顯著的高于胃潰瘍組、胃炎組，差異具有統計學意義（P＜0.05），胃癌組的IL-4蛋白、SOX-2陽性表達率顯著的低于胃潰瘍組、胃炎組（P＜0.05）；見表 2。

2.3 胃癌組織中 Hp表達與 IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率的關系 胃癌組組織中的IFN-γ蛋白陽性率、IL-4蛋白陽性表達率與Hp感染無相關關系 （r=0.171、P=0.218，r=0.007、P=0.959）， 胃癌組SOX-2陽性表達率與Hp感染具有顯著的負相關關系（r=-0.682、P=0.000）；見表 3。

3 討論

Hp的感染能夠通過誘導胃黏膜上皮細胞的端粒酶的改變、誘導癌基因的突變，進而促進胃癌的發生。特別是在合并有相關家族史的患者中，胃癌的發生風險或者遠期病死率等指標可進一步的惡化[7]?，F階段臨床上主要通過手術及放化療等綜合性措施治療胃癌，但其治療后的胃癌患者的無瘤生存時間或者無進展生存期仍然無明顯的改善[8]；同時現階段臨床上缺乏對于胃癌早期診斷的血清學指標，雖然CEA或者CA19-9能夠在胃癌的血清學診斷過程中發揮作用，但其診斷的靈敏度較低。而本次研究對于胃癌患者體內IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達研究，不僅能夠為胃癌患者的生物學靶向治療提高治療靶點，同時還能夠為胃癌患者的血清學篩查提供依據。

表2 三組標本中的IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率比較[n（%）]

表3 胃癌組織中Hp表達與IFN-γ、IL-4、SOX-2蛋白陽性率的關系

IFN-γ作為th1淋巴細胞分泌的主要效應因子，其能夠誘導上皮組織的炎癥性損傷，增加上皮細胞的惡性病變的風險。過度上調的IFN-γ還能夠誘導氧化應激性障礙，提高趨化因子對于胃黏膜上皮細胞的浸潤程度，促進了癌細胞DNA的異常擴增的可能[9]；IL-4作為th2淋巴細胞分泌的主要效應因子，其能夠在穩定T淋巴細胞免疫過程中發揮重要作用，IL-4能夠維持樹突狀細胞的抗原提呈功能，提高T淋巴細胞對于惡性腫瘤的免疫監察功能[10]；SOX-2是轉錄調控相關性因子，SOX-2在胃竇上皮組織中存在少量的表達。SOX-2的表達能夠抑制癌細胞的轉錄活性，穩定癌細胞的周期，抑制癌細胞快速跨越G0期的風險[11]。

本次研究對于不同患者體內的Hp感染情況進行了分析，發現在胃炎組患者中，Hp感染的陽性率較高，這主要由于Hp感染能夠誘導較為顯著的胃黏膜上皮組織的炎癥性損傷，提高了上皮細胞的炎癥信號通路的激活程度。Hp雖然能夠參與到胃潰瘍或者胃癌的發生過程，但Hp在相關病變組織中表達陽性率較低，考慮可能與相關疾病并未處于疾病的進展或者活動期有關。本次研究重點探討了IFN-γ、IL-4、SOX-2的表達情況，發現在胃癌組織中，IFN-γ蛋白的表達陽性率明顯的上升，而IL-4、SOX-2表達陽性率明顯的下降，差異較為明顯，提示了 IFN-γ、IL-4、SOX-2的異常表達均能夠參與到胃癌的發生發展過程。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要由于 IFN-γ、IL-4、SOX-2 的下列幾個方面的作用有關[12，13]：⑴IFN-γ的上升能夠導致持續性胃黏膜上皮細胞的損傷，提高了上皮細胞癌基因的轉錄速度；⑵IL-4的表達下降失去了其對于腫瘤細胞的免疫監察作用，導致自然殺傷性T淋巴細胞吞噬腫瘤細胞的能力不足；⑶SOX-2的表達下降影響到了癌細胞的轉錄調控過程，導致癌細胞轉錄上游啟動子的明顯激活，提高了癌DNA的擴增速度。Xu Y等[14]研究者也認為，在胃癌患者中，IFN-γ的表達濃度可平均上升40%以上，特別是在合并有明顯的淋巴結轉移或者高腫瘤負荷表現的患者中，IFN-γ的表達上升更為明顯。相關關系分析研究可見，胃癌組SOX-2陽性表達率與Hp感染具有顯著的負相關關系，提示了Hp感染能夠影響SOX-2的表達，這主要由于Hp感染能夠誘導線粒體轉錄基因的調控紊亂，影響到胃黏膜上皮細胞的癌基因的轉錄平衡，導致SOX-2轉錄和翻譯活性的下降[15]。但本次研究并未發現Hp感染與IFN-γ、IL-4的關系，提示Hp感染并不能影響到體內的th1/th2淋巴細胞免疫平衡。

綜上所述，在胃癌患者中，IFN-γ的表達明顯的上升，而IL-4、SOX-2的表達明顯的下降，同時SOX-2表達與胃癌患者Hp感染具有一定的相關性。