VEGF-C、Bcl-xl蛋白在前列腺癌患者癌組織內表達水平變化及意義研究

劉慧娟，杜斌，劉瑞強

(濮陽市人民醫院泌尿外科，河南 濮陽 457000)

近年來前列腺癌的發生率明顯的上升，流行病學研究證實，前列腺癌的發病率可達272～382/10萬人左右[1]。臨床上前列腺癌的發生能夠導致患者病死率或者致殘率的上升，影響到患者遠期生存預后[2]。在揭示前列腺癌的發病機制的過程中，可以發現腫瘤相關生物學蛋白的波動，能夠影響癌細胞的生物學特性，導致前列腺移行上皮細胞的異常病變。血管內皮生長因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）的表達，能夠促進新生血管的形成，為腫瘤細胞的持續性增殖提供前 提[3，4]；抗凋亡蛋白（anti apoptotic protei，Bclxl）的表達濃度的上升，能夠抑制癌細胞的凋亡，促進癌細胞DNA的持續性擴增過程[5]。部分研究者報道了VEGF-C、Bcl-xl在乳腺癌或者甲狀腺癌等惡性腫瘤患者病灶組織中的表達情況，發現VEGF-C等的表達陽性率明顯上升，同時認為VEGF-C、Bcl-xl等的表達與惡性腫瘤患者的臨床分期或者遠期生存預后密切相關[6]，但對于VEGFC、Bcl-xl的表達與前列腺癌的關系研究不足。為了揭示相關腫瘤生物學因子的表達與前列腺癌的關系，本次研究選取我院2016年1月-2017年6月收集的80例前列腺癌組織，探討了VEGF-C、Bcl-xl的表達及其與患者臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年1月-2017年6月收集的80例前列腺癌組織（癌組織）、40例前列腺增生組織（BPH組）。癌組織，年齡60～83歲，平均為 70.5±9.0 歲，TNM 分期：T1期 14 例、T2期 27例、T3期26例、T4期13例；發生淋巴結轉移 38例。癌組織，年齡60～80歲，平均為69.8±8.4歲。兩組患者的年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。納入標準：⑴前列腺癌、前列腺增生的診斷標準均以手術后病理學結果為準；⑵患者年齡≥60歲；⑶前列腺癌患者術前未接受放化療、免疫治療；⑷本研究獲得醫學倫理委員會的批準。排除標準：⑴既往具有泌尿系統手術病史；⑵伴有膀胱及其他部位惡性腫瘤；⑶未經病理學證實。

1.2 免疫組化染色方法 所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC 法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。 VEGF-C 蛋白、Bcl-xl蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 判斷標準 免疫組化結果判定：VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白的陽性著色表達于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例＞75%為4分，兩種積分相乘總分＜3分為陰性、≥3分為陽性。

2 結果

2.1 兩組標本中的VEGF-C、Bcl-xl蛋白陽性表達率比較 癌組織中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白陽性率分別為 76.25%、72.50%，BPH組織中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白陽性率分別為12.50%、20.00%，兩組比較差異具有統計學意義（P＜0.05）；見表 1、圖 1。

表1 兩組標本中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白陽性表達率比較[n（%）]

2.2 前列腺癌組織中的VEGF-C蛋白、Bcl-xl蛋白陽性表達與病理特征的關系 癌組織中的VEGFC蛋白在TNM分期（T3～T4期）、發生淋巴結轉移的組織中陽性表達率高于TNM分期（T1～T2期）、未發生淋巴結轉移的組織（P＜0.05）；見表 2。

癌組織中的Bcl-xl蛋白在TNM分期 （T3～T4期）、發生淋巴結轉移的組織中陽性表達率高于TNM分期 （T1～T2期）、未發生淋巴結轉移的組織（P＜0.05）；見表 3。

3 討論

前列腺癌的病情進展相對較為隱匿，臨床上多數患者無特異性的癥狀，病情的早期診斷水平較低[7]。同時前列腺癌的手術治療或者放化療治療后，患者的病死率或者生存時間等指標均無明顯改善[8]。一項包含了334例樣本量的多中心的前列腺癌臨床診療分析研究顯示，前列腺癌的早期診斷水平不足55%，治療后的病情緩解率不足50%，無瘤生存時間不足36個月[9]。本次研究通過對于相關分子生物學水平的相關研究，不僅能夠為前列腺癌的發病機制研究提供參考，同時可以為疾病的診斷提供潛在的臨床指標。

圖1兩組標本中的VEGF-C、Bcl-xl蛋白陽性表達

表3 前列腺癌組織中的Bcl-xl蛋白陽性表達與病理特征的關系

VEGF-C蛋白水平的改變對于腫瘤信號通路的激活，能夠交錯式激活患者體內的癌細胞轉錄調控因子，提高癌細胞DNA的擴增速度[4]。VEGFC的表達上升不僅可以影響新生血管的形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注，同時還能夠促進癌細胞細胞周期調控依賴性蛋白激活的轉錄及翻譯，增加G1/S期比例[3]；Bcl-xl LT4是重要的抗凋亡因子，其能夠通過抑制癌細胞程序性凋亡，促進癌細胞的持續性增殖，進而參與到惡性腫瘤的病情進展過程[10]。相關基礎方面的研究還認為，Bcl-xl表達濃度的上升還能夠促進癌細胞內的轉錄基因的結合，提高腫瘤干細胞對于癌細胞增殖活性的維持[11]。部分研究者報道了VEGF-C的表達與前列腺癌的關系，認為VEGF-C的表達陽性率的上升與前列腺癌的臨床病理特征密切相關，但對于Bcl-xl的分析研究不足。

在本次研究中，免疫組化的分析研究發現，VEGF-C、Bcl-xl蛋白的表達陽性率明顯的上升，高于前列腺良性增生組，差異較為明顯，提示了VEGF-C、Bcl-xl二者均可能影響了前列腺癌的發生過程，通過薈萃國內外相關文獻，筆者認為VEGF-C、Bcl-xl的高表達與前列腺癌的發生關系可能與下列幾個方面的因素有關[12，13]：⑴VEGF-C的表達濃度的上升能夠促進腫瘤微血管的形成，通過腫瘤病灶組織的灌注水平，為腫瘤細胞的增殖和轉移提供了基礎；⑵Bcl-xl不僅能夠影響腫瘤細胞的凋亡過程，同時還能夠促進癌細胞的過度增殖效應，降低癌細胞的壞死吸收速度。史玉爽等[14]研究者也通過免疫組化分析研究發現，在前列腺癌病灶組織中，VEGF-C的表達陽性率可平均上升40%以上，同時在治療敏感性較差或者遠期病死率較高的前列腺癌患者中，VEGF-C的表達陽性率上升更為明顯。在探討VEGF-C、Bcl-xl的表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關系過程中發現，在發生了淋巴結轉移或者臨床分期較晚的前列腺癌患者中，VEGF-C、Bcl-xl的表達陽性率均明顯的上升，提示了VEGF-C、Bcl-xl均能夠促進前列腺癌患者臨床病理特征的進展，這主要考慮與VEGF-C的表達濃度的上升，能夠提高前列腺移行上皮細胞對于淋巴結的粘附能力，提高了癌細胞對于臨近正常組織的浸潤能力，導致了前列腺癌淋巴結轉移或者臨床分期的進展。特別是Bcl-xl的表達濃度的上升，還能夠抑制癌細胞的凋亡，持續性提高癌細胞對于淋巴結內皮細胞的粘附過程。但部分研究者還認為VEGF-C或者Bcl-xl的表達與前列腺癌患者的Gleason評分具有一定的關系，本次研究并未相關結論，不同的研究存在不同的結論，考慮可能與VEGF-C或者Bcl-xl的檢測靈敏程度的差別等有關[15]。