單核/巨噬細胞上調表達S100A8/A9在膿毒癥中的作用研究

張月丹 朱力

(蘇州大學附屬第三醫院常州市第一人民醫院急診科，江蘇 常州 213003)

膿毒癥(sepsis)是以感染導致全身炎癥反應和器官功能損傷為特征的復雜疾病，在臨床上十分常見，并有逐年增多的趨勢。據統計，美國平均每年有750，000人患膿毒癥，至少210，000人因此而死亡，死亡率高達28.6%[1]在歐洲，膿毒癥患者死亡率約為27%[2]。盡管我國目前尚缺乏膿毒癥詳細的流行病學資料，但最近一項多中心流行病學調查表明，我國膿毒癥的發病率和死亡率也接近發達國家水平[3]。近年的臨床研究證實，單核/巨噬細胞異?；罨悄摱景Y早期的典型特征[4]，在病原體介導的膿毒癥中發揮重要作用，深入研究膿毒癥中單核/巨噬細胞的活化機制具有重要意義。本研究擬通過流式細胞術檢測膿毒癥患者單核細胞上S100A8/A9的表達，初步探討S100A8/A9在膿毒癥中的作用，為后續深入研究提供實驗基礎，為膿毒癥治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2012年12月在本院重癥醫學科治療的21例膿毒癥患者外周血標本，其中男12例，女9例。選擇16名健康體檢者外周血作為對照。采用流式細胞術檢測各組外周血單核細胞上S100A8/A9的表達水平。膿毒癥診斷均符合2001年國際膿毒癥定義會議制定的診斷標準[5]。收集體檢者外周靜脈血5 mL，肝素鈉抗凝；3 000r/5 min離心后取血漿保存于-80 ℃冰箱；剩余細胞用于流式細胞學檢測。

1.2 流式細胞學檢測方法 取外周血50 μL，加入5 μL抗人FITC-CD14單克隆抗體和5 μL抗人PE- S100A8/A9單克隆抗體，避光孵育30 min；加入1 mL紅細胞裂解液，37 ℃孵育5 min；加入PBS，1 200 r/5 min 離心，棄上清，加入500 μL PBS重懸，進行流式細胞術分析。

2 結 果

流式細胞術分別檢測兩組外周血中S100A8/A9的水平，結果顯示，膿毒癥組患者外周血S100A8/A9+單核細胞的比例明顯高于對照組(見圖1)，膿毒癥組患者單核細胞上S100A8/A9陽性率達到(92.88±5.34)%，對照組為(3.920±1.76)%，差異有統計學意義(P<0.001)(見表1和圖2)。

表1 外周血單核細胞表面S100A8/A9陽性率

圖1 流式細胞術檢測外周血單核細胞表面S100A8/A9的表達水平

注：膿毒癥組與對照組比較***P<0.001。

圖2 外周血單核細胞表面S100A8/A9的表達陽性率

3 討 論

炎癥反應是生物體在長期進化過程中對內外源刺激因素建立的一套精密的監視、防御及修復機制，也是膿毒癥重要的病理基礎。傳統觀點認為，來自入侵微生物的病原體相關模式分子(pathogen associated molecular patterns，PAMPs)是引起膿毒癥患者體內過度炎癥的罪魁禍首。PAMPs形式多樣并廣泛存在于病原體細胞表面，如酵母細胞壁上的甘露糖、脂多糖、多肽糖、胞壁酸等各種細菌的細胞壁成分等，單核/巨噬細胞等固有免疫細胞通過識別PAMPs啟動免疫應答[6]。然而，大量的臨床及臨床前研究發現，針對PAMPs進行干預并不能有效改善膿毒癥患者體內免疫失衡狀態[7-8]，提示膿毒癥中的大范圍、高強度的炎癥反應可能依賴其它介質的參與。

1994年，Matzinger首次提出“損傷相關分子模式(damage-associated molecular patterns，DAMPs)”的概念[9]，指出除PAMPs外，還存在一類由活化或損傷細胞釋放的內源性蛋白可以與單核/巨噬細胞膜上的模式識別受體結合，誘導炎癥產生。至今，DAMPs成員不斷擴充，已經發展成為包括高遷移率族蛋白1(high-mobility group protein B1，HMGB1)、熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)、S100蛋白、防御素等十幾類分子的大家族，并被廣泛證實在多種疾病的炎癥紊亂中扮演著重要角色[10]。因此，DAMPs正成為研究膿毒癥發病機制的新熱點。S100A8和S100A9是DAMPs家族在單核細胞、巨噬細胞和中性粒細胞中表達最豐富的蛋白[11]。

在生理狀態下，S100A8和S100A9主要以S100A8/A9復合體的形式發揮功能，并且S100A8/A9主要表達于細胞內。然而，更多的研究發現，S100A8/A9與類風濕性關節炎，銀屑病，炎癥性腸病，系統性紅斑狼瘡等多種炎癥性疾病密切相關[12-14]。本課題證實膿毒癥患者外周血單核細胞上S100A8/A9表達明顯增加；膿毒癥患者外周血中S100A8/A9+單核細胞的比例明顯升高，單核細胞上S100A8/A9陽性率達到(92.88±5.34)%，顯著高于正常人；結果提示膿毒癥發生過程中，S100A8/A9由胞內轉移至胞外，這可能是引發膿毒癥患者炎癥反應過度的關鍵步驟。S100A8/A9對膿毒癥的具體作用，及其可能的作用機制，仍有待進一步研究。