黑果腺肋花楸組培快繁技術體系研究

王艷輝

(遼寧努魯兒虎山國家級自然保護區管理局，遼寧 朝陽 122000)

黑果腺肋花楸(AroniamelanocarpaMichx Ell.)，薔薇科腺肋花楸屬，多年生落葉灌木。原產于美國東北部，波羅的海沿岸至太平洋沿岸均有廣泛分布，我國無此樹種。該樹種果實中含有豐富的維生素P，還含有花青素、黃酮類化合物和多種礦質元素等，果實及其加工制品對高血壓及心腦血管疾病都具有特殊的療效。秋季該樹的枝葉變為紫紅色，極具觀賞價值，所以該樹種是集食用、藥用、觀賞于一身的經濟林樹種[1]。我國對黑果腺肋花楸的引進起源于遼寧省干旱地區造林研究所于2001年承擔的國家林業局“948”引種項目——“腺肋花楸優良種質資源及栽培與利用技術引進”。自引種以來，該所通過多年對該樹種組織培養技術的研究，成功建立了黑果腺肋花楸組培快繁技術體系，形成了年產50萬株組培苗的生產能力，目前已累計生產黑果腺肋花楸組培苗150萬株以上。

1 試驗材料

黑果腺肋花楸1年生嫩枝，采自遼寧省干旱地區造林研究所種質資源圃。

2 試驗方法

2.1 外植體消毒

將黑果腺肋花楸1年生枝條剪下，去除葉片后剪成8～10 cm左右的莖段，在洗滌靈水中刷洗后置于流動水下沖洗4 h左右，然后在無菌條件下用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%升汞加幾滴吐溫的溶液浸泡8 min，最后用無菌水沖洗3遍后備用[2-3]。

2.2 誘導培養基的篩選

以MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(6-BA、NAA)配制6種配方的誘導培養基(表1)。在無菌環境下切取消毒后的外植體腋芽，栽植于培養基上，每個配方接種50瓶，每瓶1個外植體，25 d后統計腋芽萌發率。

表1 誘導培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

2.3 增殖培養基的篩選

表2 增殖培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

以MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(6-BA、NAA)，配制9種配方的增殖培養基(表2)。 每個組合接種10瓶，每瓶10個嫩芽，40 d后統計其增殖率。

2.4 生根培養基的篩選

以1/2MS為基本培養基，添加不同質量濃度的激素(IBA 、NAA)，配制9種配方的生根培養基(表3)。選取生長健壯，高2.0 cm以上的組培苗，接種到上述培養基上。每個組合接種10瓶，每瓶10個嫩芽，接種40 d后統計其生根率及平均生根條數，其中長度大于1 cm的根即為有效根。

表3 生根培養基不同激素濃度配比表 mg·L-1

2.5 培養條件

基本培養基中均加入35.0 g/L蔗糖、8.0 g/L瓊脂，pH值5.6～5.8。培養室溫度(24±2)℃，光照強度2 000～2 500 lx，光照時間15 h/d。

3 結果與分析

3.1 黑果腺肋花楸的誘導培養

表4 不同激素濃度組合對黑果腺肋花楸腋芽誘導的影響

由表4可以看出，在對黑果腺肋花楸進行誘導培養時，不同激素配比對腋芽萌芽率和芽生長情況影響較大，其中1號和2號培養基萌芽率較高，但是萌芽后苗長勢較弱，苗不夠粗壯，不利于增殖培養。5號、6號培養基上萌發的腋芽產生較多愈傷組織，苗節間短，生長不良，萌芽率極低，我們認為是激素過量所致。3號、4號培養基芽生長較好，其中4號培養基萌芽率最高，達78%，顯著高于其他培養基。因此黑果腺肋花楸最佳誘導培養基為MS+6-BA 0.60 mg/L+NAA 0.20 mg/L+蔗糖35.0 g/L+瓊脂8.0 g/L。

3.2 黑果腺肋花楸的增殖培養

由表5可見，6-BA與NAA組合的9個配方增殖培養基均能產生增殖苗。其中1、2、3號培養基中6-BA濃度為0.50 mg/L，此時黑果腺肋花楸組培苗增殖倍數均較低，苗根部愈傷組織較少，但是苗較高。特別是3號培養基，當NAA濃度為0.12 mg/L時，組培苗有少量生根現象，表明該培養基配方中生長素濃度過大，分裂素濃度不足；4、5、6號培養基中6-BA濃度為1.00 mg/L，此時黑果腺肋花楸組培苗增殖倍數較高，其中5號培養基NAA濃度為0.08 mg/L，此時組培苗增殖倍數達到7.19倍，并且苗較粗壯，愈傷組織少，表明該培養基配方中生長素和分裂素濃度配比適當；7、8、9號培養基中6-BA濃度為1.50 mg/L，此時黑果腺肋花楸組培苗盡管增殖倍數較高，但根部產生了較多愈傷組織，組培苗生長勢弱，其中7號培養基NAA濃度為0.04 mg/L時，組培苗中有玻璃化現象，表明該培養基配方中分裂素濃度過高。綜上所述，黑果腺肋花楸組培苗增殖培養階段最佳培養基配方為：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.08 mg/L +蔗糖35 g/L +瓊脂8 g/L。

表5 不同激素濃度組合對黑果腺肋花楸組培苗增殖的影響

注：表中同列相同的字母代表差異不顯著(p>0.05)。

3.3 黑果腺肋花楸的生根培養

表6 不同激素濃度組合對黑果腺肋花楸組培苗生根的影響

由表6可以看出，當NAA和IBA混合使用時，組培苗生根率明顯高于單用一種生長素的情況，說明NAA和IBA混合使用更利于促進黑果腺肋花楸組培苗生根?？紤]到煉苗移栽過程中，太長的根系容易折斷，從而降低煉苗成活率，因此生根組培苗的根系長度適中最好。此外愈傷組織過多，容易在煉苗過程中腐爛，從而降低成活率，因此在生根培養階段不宜產生過多愈傷組織。綜上所述，黑果腺肋花楸最佳生根培養基配方為5號：1/2MS+ NAA 0.10 mg/L +IBA 0.20 mg/L +蔗糖35 g/L +瓊脂8 g/L。

4 結論

通過對黑果腺肋花楸組培快繁技術的研究，提出了該樹種組培苗誘導培養、增殖培養和生根培養等3個階段的最佳培養基配方，形成了較為成熟的黑果腺肋花楸組培工廠化育苗技術體系。在此技術體系下，黑果腺肋花楸組培苗外植體的誘導率達到了78%，有效芽增殖倍數可達到7.19倍，生根率達到95%以上。本研究為黑果腺肋花楸的大規模推廣奠定了技術基礎及苗木基礎[4]。