凡納濱對蝦對飼料中鈣、磷的營養需求

安文強，黎文偉，譚北平，楊奇慧，遲淑艷，董曉慧，劉泓宇，章 雙，楊原志，張海濤

( 1.廣東海洋大學 水產學院，水產動物營養與飼料實驗室，廣東 湛江 524088； 2.農業部華南水產與畜禽飼料重點實驗室，廣東 湛江 524000 )

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)又稱南美白對蝦，是世界三大主要養殖蝦類之一，生長迅速，肉質鮮美，對環境變化耐受力強，在世界各地廣泛養殖[1]。鈣是甲殼動物的重要組成成分，除了構成體殼，還參與肌肉收縮、血液凝固、神經傳遞、調節滲透壓、激活酚氧化酶原系統以及維持細胞膜的完整性和通透性[2-3]。磷是動物細胞核酸及細胞膜的重要成分，同時又直接影響所有細胞的能量反應，對動物的生長、骨骼的礦化有極大的作用，缺乏磷會抑制對蝦的生長[4]。而飼料中鈣、磷的水平過高會導致對蝦向周圍水環境的礦物排泄量增加，污染水體。有研究建議，將飼料中鈣、磷比值當成一個獨立的礦物質水平的指標[5]，在滿足對蝦的生長需求時應注意嚴格控制鈣、磷的添加量。

目前有關對蝦鈣、磷需求量已有研究。Deshimaru等[6]發現，在飼料中無需添加鈣，僅需添加2%的磷即可滿足日本囊對蝦(Marsupenaeusjaponicus)的生長需求；而Kanazawa等[7]卻發現，滿足日本囊對蝦生長的飼料磷添加量應為1%。中國明對蝦(Fenneropenaeuschinensis)攝食含磷0.91%、鈣2.2%的飼料時生長最佳[8]。海水養殖的凡納濱對蝦的基礎飼料中不添加鈣只添加0.35%磷即可維持生長和存活；若添加1%和2%的鈣，則需分別添加0.5%～1%和1%～2%的磷才能維持對蝦的正常生長[9]。低鹽水體養殖的凡納濱對蝦攝食添加2%鈣的飼料時，生長受抑制[10]。斑節對蝦(Penaeusmonodon)飼料中鈣含量為1.25%時，添加1%～1.5%的磷生長最佳[11]。飼料中鈣含量為1.25%、磷含量為1.32%時印度明對蝦(F.indicus)生長最佳[12]。但同時探查凡納濱對蝦商品飼料中鈣、磷適宜添加量的研究尚未見報道。筆者研究在商品飼料中添加不同水平鈣、磷對凡納濱對蝦生長性能、體成分、組織鈣及磷的含量、血清生化指標及免疫酶活性等指標的影響，以確定凡納濱對蝦飼料中適宜的鈣、磷含量，為生產凡納濱對蝦高效配合飼料提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

養殖試驗在廣東省湛江市東海島廣東海洋大學海洋生物研究基地室內海水養殖系統中進行。凡納濱對蝦購于湛江市東海島中聯蝦苗廠。

試驗飼料以紅魚粉、蝦殼粉、豆粕、花生粕和玉米蛋白粉為蛋白源，魚油、豆油和大豆卵磷脂為脂肪源，面粉為糖源，基礎飼料配方見表1。

分別以乳酸鈣、磷酸二氫鈉(國藥集團化學試劑有限公司)為鈣源和磷源，在鈣添加水平為0、0.5%、1.0%條件下，分別添加0、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%的磷，配制15種試驗飼料。飼料原料粉碎過80目篩，按配方準確稱取，逐級擴大法混合，第一次混合15 min后，加油和卵磷脂，然后混勻，過80目篩，加入蒸餾水(30%，V/m)，再混合均勻，壓制成直徑分別為1.0 mm和1.5 mm的顆粒飼料，60 ℃熟化30 min，風干后編號分裝，-20 ℃冰箱中保存備用。

表1 基礎飼料組成及營養水平(風干基礎) %Tab.1 Ingredients and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

注：1.每千克維生素預混料含有Vitamin premix contains the following per kg：維生素A醋酸酯retinyl acetate 10.00 g，維生素D3VD350.00 g，維生素E VE 99.00 g，維生素K VK 5.00 g，維生素B1VB125.50 g，維生素B2VB225.00 g，維生素B6VB650.00 g，維生素B12VB120.10 g，泛酸鈣 calcium pantothenate 61.00 g，煙酸nicotinic acid 101.00 g，生物素biotin 25.00 g，肌醇inositol 153.06 g，葉酸folic acid 6.25 g，纖維素cellulose 389.09 g； 2.每千克礦物質預混料含有Mineral premix contains the following per kg：碘酸鉀 KIO340.03 g，氯化鈷 CoCl24.07 g，硫酸銅 CuSO419.84 g，檸檬酸鐵 FeC6H5O713.71 g，硫酸鋅 ZnSO428.28 g，硫酸鎂 MgSO40.12 g，硫酸錳 MnSO412.43 g，氯化鉀 KCl 15.33 g，亞硒酸鈉 Na2SeO32.00 g，沸石粉 zeolite power 864.19 g； 3.鈣磷添加組用乳酸鈣和磷酸二氫鈉替代基礎飼料組中的微晶纖維素. In the calcium and phosphorus addition group, microcrystalline cellulose in basic diet group is replaced with calcium lactate and sodium dihydrogen phosphate.

1.2 方法

試驗開始前，給試驗蝦投喂基礎飼料一周，使對蝦適應飼料。試驗共設15個處理，每個處理3個平行，每平行為1個0.30 m3的玻璃鋼桶。對蝦禁食24 h后，挑選規格均勻、健壯、活力強、初體質量(4.2±0.15) g的對蝦，隨機分配于玻璃鋼桶中，每桶40尾，養殖8周。日投喂4次(7:00、11:00、17:00、21:00)，飽食投喂，投喂1 h后查料，根據對蝦攝食及天氣情況調整投喂量。養殖期間24 h連續充氣。對蝦養殖前兩周每2 d換水1次，后期日換水1次。試驗期間水溫28～31 ℃，鹽度21～24，pH 7.8～8.2，溶解氧≥5 mg/L，氨氮<0.2 mg/L，亞硝酸鹽<0.05 mg/L。

試驗結束時禁食24 h后稱量質量，計數，計算生長指標。然后每桶隨機取15尾蝦，逐尾用1 mL注射器自第5步足基部血竇取血，合并置于Eppendor管中，4 ℃冰箱保存過夜，以3000 r/min離心10 min后收集血清，-80 ℃冰箱保存備測血清指標。另每桶取10尾蝦，瀝干水后裝于封口袋中，剩余的對蝦剝離蝦殼和肌肉，-20 ℃冰箱保存，用于測定常規成分和鈣、磷含量。

飼料、全蝦及肌肉樣品的水分測定采用105 ℃烘干恒定質量法，粗蛋白采用凱氏定氮法(KjeltecTM8400，瑞典)；粗脂肪采用索式抽提法(抽提劑為石油醚)；粗灰分采用馬福爐550 ℃灼燒法測定。

飼料、全蝦、肌肉和蝦殼的鈣、磷含量的測定方法：樣品烘干粉碎后，置于具塞試管中，加入5 mL默克硝酸，70 ℃水浴消化2 h，然后在消化爐上趕酸5 h，加入1 mL雙氧水，趕酸至余下1 mL稀釋。最后用電感耦合等離子體發射光譜儀(ICP)測定鈣、磷含量。

血清指標測定方法：堿性磷酸酶活性采用南京建成試劑盒方法測定；酚氧化酶活性參照文獻[13]的方法測定；總膽固醇、甘油三酯、鈣離子和無機磷含量用全自動生化分析儀(日立7020HITACHI，日本)檢測。

各項生長指標按下式計算：

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過4號篩）約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定質量，放置過夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，過微孔濾膜，得到供試品溶液。

質量增加率/%=(mt-m0)/m0×100%

特定生長率/%·d-1= (lnmt-lnm0)/t×100%

飼料系數=mf/(mt-m0)

蛋白質效率=(mt-m0)/(mf×P)

存活率/%=nt/n0×100%

式中，mt、m0分別為終末均質量、初始均質量，mf為飼料攝入量，P為飼料蛋白質含量，nt、n0分別為終末尾數、初始尾數。

1.3 數據處理

試驗結果用平均值±標準差表示，用SPSS 17.0進行雙因素方差分析，若存在顯著性差異，再進行Duncan′s多重比較，以檢驗組間的差異顯著性；P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結 果

2.1 飼料鈣、磷添加水平對凡納濱對蝦生長性能的影響

本試驗中，飼料鈣水平、磷水平及鈣和磷水平的交互作用均極顯著影響對蝦的質量增加率、特定生長率、蛋白質效率、飼料效率和存活率(P<0.01)(表2)。0.5%鈣水平和0.8%磷水平與不添加鈣水平、磷水平組相比，極顯著提高了對蝦的質量增加率、特定生長率、蛋白質效率，并降低了飼料效率(P<0.01)，鈣水平、磷水平極顯著提高了對蝦的質量增加率、特定生長率和蛋白質效率，降低了飼料效率(P<0.01)，0.5%鈣水平與不添加鈣水平組相比顯著提高了存活率(P<0.05)。質量增加率和特定生長率隨著磷水平的提高均呈先升后降的趨勢，0.8%磷水平和1.2%磷水平的質量增加率和特定生長率差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他水平組(P<0.05)。0.8%～1.6%組的飼料效率差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)。1.6%磷水平與不添加磷水平組相比顯著降低了存活率(P<0.05)。

以特定生長率為判斷依據，通過二次回歸曲線分析得出：飼料中不添加鈣時，飼料中可添加1.12%的磷；添加0.5%的鈣時，飼料中可添加0.88%的磷；添加1%的鈣時，飼料中可添加0.78%的磷。對蝦在添加0.5%的鈣和0.88%的磷時有最大特定生長率(圖1)。

2.2 飼料中鈣、磷添加水平對凡納濱對蝦全蝦及肌肉常規成分含量的影響

飼料鈣水平極顯著影響對蝦的肌肉粗蛋白、粗脂肪、粗灰分含量，全蝦粗蛋白、粗脂肪的含量(P<0.01)(表3)。飼料磷水平極顯著影響對蝦的肌肉粗蛋白、粗脂肪和全蝦粗蛋白的含量(P<0.01)。飼料鈣、磷水平的交互作用極顯著影響對蝦的全蝦粗蛋白和肌肉粗蛋白、粗脂肪的含量(P<0.01)，顯著影響對蝦的全蝦粗脂肪的含量，對全蝦和肌肉粗灰分差異不顯著(P<0.05)。鈣水平極顯著提高了全蝦和肌肉粗蛋白的含量，降低了肌肉粗脂肪、粗灰分及全蝦粗脂肪的含量，0.5%～1.0%鈣水平極顯著降低了肌肉粗脂肪、粗灰分的含量(P<0.01)。隨磷水平的升高，全蝦粗蛋白的含量呈先升后降的趨勢，1.2%組全蝦粗蛋白含量極顯著高于其他處理(P<0.01)。1.6%磷水平提高了全蝦粗灰分的含量，但與1.2%磷水平之間無顯著性差異(P>0.05)。對蝦肌肉粗灰分含量隨磷水平的升高呈上升趨勢，但各組之間差異不顯著(P>0.05)。

2.3 飼料中鈣、磷水平對凡納濱對蝦組織鈣、磷含量的影響

飼料鈣水平極顯著地影響全蝦和蝦殼的鈣、磷含量和肌肉的磷含量(P<0.01)，顯著影響肌肉的鈣含量(P<0.05)(表4)。磷水平及鈣磷水平的交互作用均極顯著地影響全蝦、肌肉和蝦殼的鈣、磷含量(P<0.01)。鈣水平極顯著提高了全蝦的鈣、磷含量、蝦殼的磷含量(P<0.01)。隨著鈣水平的提高肌肉磷含量呈先升后降的趨勢，0.5%鈣水平組肌肉磷含量顯著高于其他水平(P<0.05)。全蝦、肌肉和蝦殼的鈣、磷含量隨著飼料磷水平的提高均呈先增后減的趨勢，1.2%磷水平全蝦的鈣、磷含量及蝦殼的鈣含量顯著高于其他水平(P<0.05)。

表2 飼料鈣、磷添加水平對凡納濱對蝦生長性能的影響Tab.2 Effects of dietary Ca and P supplemental levels on growth performance of Pacific white shrimp L.vannamei

注： 同一列中上標不同字母的平均值間差異顯著(P<0.05)，各組上標中有相同字母表示組間差異不顯著(P>0.05),下同.

Note: the means with different superscripts in the same column are significantly different (P<0.05); the means with same superscripts indicate no significant difference among groups (P>0.05); et sequentia.

圖1 3個不同鈣添加水平下凡納濱對蝦飼料中磷的最適添加量Fig.1 The optimum supplemental level of P in diet for Pacific white shrimp L. vannamei under three Ca supplemental levels

表3飼料鈣磷添加水平對凡納濱對蝦全蝦及肌肉常規成分的影響(干物質基礎) %

Tab.3 Effects of dietary Ca and P supplemental levels on approximate composition of whole body andmuscle of Pacific white shrimp L.vannamei(DM basis)

表4 飼料鈣磷添加水平對凡納濱對蝦機體鈣磷含量的影響Tab.4 Effects of dietary Ca and P supplemental levels on Ca and P levels in tissues of Pacific white shrimp L.vannamei

(續表4)

添加量 Supplemental amount全蝦 Whole body肌肉 Muscle蝦殼 Exoskeleton鈣(總鈣)Ca (TCa)磷(總磷)P (TP)鈣含量Ca content磷含量P content鈣含量Ca content磷含量P content鈣含量Ca content磷含量P content0.5(2.17)1.2(2.74)40.90±0.86h20.20±0.43fg6.13±0.18abc14.73±0.68cd156.85±1.96i16.30±0.07gh0.5(2.18)1.6(3.11)37.69±1.72efg19.38±0.62ef5.81±0.10a14.44±0.11cd150.82±0.59gh14.82±0.27f1.0(2.69)0(1.38)33.08±0.82c15.03±0.72bc5.86±0.21a11.61±0.12b138.08±1.15a8.95±0.09b1.0(2.68)0.4(1.83)35.92±0.40de16.68±0.32d6.78±0.15de14.21±0.45c144.89±0.47cd13.70±0.37de1.0(2.68)0.8(2.31)38.96±1.05gh18.76±0.29e6.53±0.04cde15.71±0.22ef148.88±0.49fg16.50±0.40h1.0(2.63)1.2(2.70)44.10±0.78i21.21±0.83g6.47±0.01bcde14.46±0.24cd157.06±1.17i16.69±0.19h1.0(2.70)1.6(3.16)39.15±0.81gh20.20±0.46fg6.07±0.07ab14.05±0.10c152.82±0.55h15.66±0.33g鈣水平/% Ca level033.89±4.10a15.51±2.25a6.49±0.53b13.79±2.60a144.74±5.45a13.29±2.97a0.536.54±3.71b17.59±2.37b6.29±0.42a14.37±1.39b147.47±6.74b13.83±3.13b1.038.24±3.92c18.37±2.42c6.34±0.36ab14.01±1.42a148.34±6.92b14.30±3.04c磷水平/% P level030.68±2.24a14.12±1.03a6.10±0.28a10.92±1.46a137.79±1.19a8.42±0.47a0.434.04±2.45b15.39±1.51b6.97±0.23c14.32±0.41b143.16±1.69b13.40±0.45b0.837.35±2.08c17.42±1.70c6.55±0.20b15.94±0.25c147.80±1.28c16.11±0.50d1.241.36±2.35d20.06±1.17e6.37±0.21b14.78±0.51b155.20±2.98e16.19±0.59d1.637.67±1.63c18.80±1.62d5.88±0.17a14.33±0.33b150.31±2.59d14.92±0.65c雙因素方差分析P值 P-value of two-factor ANOVA鈣水平 Ca level0.0000.0000.0410.0090.0000.000磷水平 P level0.0000.0000.0000.0000.0000.000鈣水平×磷水平 Ca level×P level0.0000.0000.0010.0000.0000.000

2.4 飼料中鈣、磷的添加水平對凡納濱對蝦血清指標的影響

飼料中鈣、磷的水平均極顯著影響血清堿性磷酸酶、酚氧化酶的活性和總膽固醇、甘油三酯的含量(P<0.01)(表5)。鈣、磷水平的交互作用極顯著影響血清堿性磷酸酶的活性和鈣離子、無機磷的含量(P<0.01)。飼料鈣、磷水平及鈣、磷水平的交互作用對蝦血清鈣離子的含量影響不顯著(P>0.05)。鈣水平顯著提高了血清堿性磷酸酶、酚氧化酶的活性及總膽固醇的含量(P<0.05)。1%鈣水平組對蝦血清酚氧化酶的活性極顯著高于其他水平組(P<0.01)。隨著鈣水平的提高對蝦血清甘油三酯的含量呈先升后降的趨勢，0.5%鈣水平組顯著高于其他水平組(P<0.05)。磷水平顯著降低了血清堿性磷酸酶的活性和甘油三酯的含量，1.2%～1.6%磷水平也顯著降低了總膽固醇的含量(P<0.05)。酚氧化酶的活性和無機磷的含量均隨著磷水平的提高呈先升后降的趨勢，0.8%磷水平組的酚氧化酶活性顯著高于其他水平組(P<0.05)。

表5 飼料中鈣、磷添加水平對凡納濱對蝦血清指標的影響Tab.5 Effects of dietary Ca and P supplemental levels on serum indices of Pacific white shrimp L.vannamei

(續表5)

添加量Supplemental amount鈣(總鈣)/%Ca(TCa)磷(總磷)/%P(TP)堿性磷酸酶U/LALP酚氧化酶U/mLPO總膽固醇mmol/LCHOL甘油三酯mmol/LTG鈣離子mmol/LCa2+無機磷mmol/LIP0.5(2.15)24.35±0.18f24.35±0.18f1141.67±33.33d0.29±0.01cd0.35±0.02fgh13.97±0.29bc5.50±0.87def0.5(2.13)15.14±0.38d15.14±0.38d955.56±76.98f0.36±0.01fg0.32±0.02efgh13.83±0.40abc6.17±0.29efg0.5(2.17)14.42±0.04cd14.42±0.04cd1402.78±29.27e0.32±0.02de0.25±0.01bcde13.03±0.46ab4.00±0.87abc0.5(2.18)13.07±0.23bcd13.07±0.23bcd2102.78±50.92c0.27±0.02c0.23±0.04bc13.83±0.60abc3.83±0.29ab1.0(2.69)30.35±0.23g30.35±0.23g777.78±60.28b0.37±0.02g0.36±0.08fgh13.40±0.10abc4.33±0.58bcd1.0(2.68)32.20±0.20g32.20±0.20g958.33±65.09c0.34±0.01efg0.33±0.01fgh14.43±0.55c6.67±0.29fg1.0(2.68)15.71±0.24d15.71±0.24d2225.00±58.33g0.33±0.04def0.24±0.03bcd13.63±0.29abc4.33±0.76bcd1.0(2.63)15.35±0.27d15.35±0.27d2133.33±38.19f0.32±0.03de0.23±0.06bc13.67±0.50abc4.00±0.50abc1.0(2.70)9.71±0.09ab9.71±0.09ab1463.89±48.83e0.21±0.02ab0.14±0.03a13.30±0.10abc3.00±0.50a鈣水平/% Ca level18.56±1.75a18.56±1.75a1013.89±302.22a0.27±0.06a0.27±0.09a13.37±1.005.00±1.40b21.92±1.62b21.92±1.62b1318.89±438.92b0.31±0.03b0.31±0.06b13.63±0.524.93±1.07ab20.63±1.31b20.63±1.31b1511.67±612.80c0.32±0.05b0.26±0.09a13.69±0.514.47±1.33a磷水平/% P level37.91±0.90d37.91±0.90d780.56±184.23a0.32±0.04c0.38±0.04e13.50±0.505.00±0.79b25.63±0.77c25.63±0.77c1081.48±101.96b0.33±0.03c0.33±0.03d13.66±1.135.75±0.96c15.07±0.25b15.07±0.25b1929.63±357.56e0.32±0.05c0.28±0.05c13.89±0.765.75±1.34c12.21±0.58a12.21±0.58a1485.19±530.06d0.29±0.05b0.22±0.04b13.29±0.494.06±0.68a11.14±0.25a11.14±0.25a1130.56±254.99c0.22±0.04a0.17±0.05a13.48±0.473.50±0.61a雙因素方差分析P值 P-value of two-factor ANOVA鈣水平 Ca level0.0010.0000.0000.0090.3710.045磷水平 P level0.0000.0000.0000.0000.3980.000鈣水平×磷水平Ca level×P level0.0000.0000.0000.3580.0960.001

3 討 論

3.1 飼料鈣、磷水平對凡納濱對蝦生長性能的影響

Ambasankar等[11]研究發現，0～2.5%磷水平顯著提高了斑節對蝦的質量增加率。0.71%～1.59%磷水平顯著提高了黑鯛(Acanthopagrusschiegelii)幼魚的質量增加率、特定生長率和蛋白質效率[14]。本試驗結果與上述研究結果一致，也與凡納濱對蝦[15]、中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)[16]的研究結果一致。斑節對蝦的質量增加率在1.5%磷水平達到最大值，而2%磷水平組的質量增加率顯著降低[11]。本試驗結果也表明，隨著磷水平的升高，凡納濱對蝦的質量增加率、特定生長率和蛋白質效率呈先升后降的趨勢，在1.6%磷水平時質量增加率、特定生長率顯著下降。印度明對蝦的飼料效率隨飼料磷水平的升高呈先降后升的趨勢(飼料鈣水平為1.25%)[12]。黑線鱈(Melanogrammusaeglefinus)[17]、黑鯛幼魚[18]、軍曹魚(Rachycentroncanadum)[19]、草魚(Ctenopharyngodonidella)[20]的研究中也有類似結論。這說明飼料中高水平的磷會抑制對蝦對其他礦物元素的吸收，從而抑制其生長，磷的添加量必須控制在適宜的范圍內。飼料中磷含量過高會導致草魚生長緩慢，甚至死亡[20-21]。Pan等[15]發現，0.91%～1.63%的磷水平不影響體質量0.16 g的凡納濱對蝦的生長，這可能與幼蝦階段生長速度快，蛻殼次數多，需要較多的磷有關。Niu等[22]也發現，早期對蝦對磷的需要量更高。

Davis等[9]研究發現，若未添加鈣，基礎飼料中含0.35%的磷就可以維持對蝦的生長和存活；若添加1%鈣，則添加2%的磷時對蝦質量增加率和存活率最大。Cheng等[10]報道，鹽度為2的水體中養殖的對蝦在投喂無鈣飼料時，添加0.77%的有效磷(0.93%總磷)就能滿足其生長；當添加1%的鈣時，飼料中需添加1.22%的有效磷(2%的總磷)，對蝦才具有較好的生長性能。黃凱等[23]以磷酸二氫鈣作為凡納濱對蝦飼料的鈣源和磷源，在鹽度為2的水體中，發現磷酸二氫鈣添加量為1%時，對蝦的生長速度最快；當添加量為3%時，對蝦的生長性能最佳。而Pan等[15]同樣也是用磷酸二氫鈣作為飼料的鈣源和磷源，在鹽度17～20的海水中養殖，發現當磷酸二氫鈣添加量為1.7%(總鈣為1.83%，總磷為1.33%)時，凡納濱對蝦生長和飼料轉化率最佳。本試驗中二次回歸曲線擬合得出，隨飼料鈣水平的升高，獲得最佳生長性能的磷需要量卻是逐漸下降的，不同于已有的研究結果；主因素分析表明，適量的鈣水平(0.5%)可顯著提高對蝦的生長性能指標和成活率，顯著降低飼料系數。本試驗中對蝦的初始質量為(4.2±0.15) g，遠遠高于上述研究中的幼蝦體質量，同時養殖水體鹽度為21～24。由此可見，即使同種蝦鈣、磷需求量也不盡相同，這可能與養殖對象的生長階段、養殖水體鹽度、飼料配方、磷源與鈣源等因素有關。鈣、磷間有顯著的交互作用，但二者的相互作用還有待進一步研究。

3.2 飼料中鈣、磷水平對凡納濱對蝦全蝦及肌肉常規成分的影響

Niu等[22]研究發現，凡納濱對蝦全蝦粗蛋白含量隨飼料磷水平的上升而顯著升高。隨飼料磷水平(0.72%～1.74%)的升高，紅螯螯蝦(Cheraxquadricarinatus)[3]肌肉粗蛋白含量上升。本試驗結果表明，磷水平提高了凡納濱對蝦的全蝦和肌肉中粗蛋白的含量。類似的還有黑線鱈[17]、日本花鱸(Lateolabraxjaponicus)[24]、斑點叉尾(Ietaluruspunetaus)[25]和黑鯛幼魚[14]。本試驗中，隨著磷水平的升高，凡納濱對蝦全蝦粗脂肪的含量呈下降趨勢，肌肉粗脂肪的含量在1.6%磷水平顯著下降。這與紅螯螯蝦[3]、凡納濱對蝦[22]、草魚[21]和虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[26]等研究結果一致。Roy等[17]認為，這可能是因為磷缺乏抑制了動物體內脂肪酸的β-氧化，脂肪的利用率降低，轉而利用蛋白質供能，導致機體脂肪累積和蛋白含量減少；而隨著飼料中磷含量的逐漸升高，增強了動物體內脂肪酸的β-氧化，從而增強機體利用脂肪供能的能力，增加糖原的生成，促使蛋白質沉積，所以機體的蛋白含量會增加而脂肪含量減少?；曳趾土缀渴撬a動物磷營養研究中的常用指標[26]，本試驗中，隨著飼料磷水平的升高，對蝦的全蝦和肌肉粗灰分的含量呈上升趨勢。中華絨螯蟹[27]、紅螯螯蝦[3]、克原氏螯蝦(Procambarusclarkii)[28]和中國明對蝦[29]的研究也得到了類似的結果。羅文佳等[5]認為，這可能是磷含量的增加和離子之間的協同作用增加了礦物質在機體中的沉積。

3.3 飼料中鈣、磷水平對凡納濱對蝦組織鈣、磷含量的影響

魚蝦機體的鈣、磷含量，常常作為研究魚蝦飼料鈣、磷適宜添加量的參考指標[30-31]。Pan等[15]研究發現，隨著飼料磷水平(0.91%～1.63%)的升高，凡納濱對蝦全蝦和蝦殼的鈣、磷含量呈上升趨勢。同一鈣水平下，對蝦的肌肉鈣、磷含量隨飼料磷水平的升高而增加[10]。本試驗中，對蝦的全蝦、肌肉、蝦殼的鈣和磷含量隨飼料磷水平的升高而升高，與上述結果，也與紅螯螯蝦[3]、克原氏螯蝦[28]、中華絨螯蟹[27]等報道相一致。任澤林等[29]發現，中國明對蝦飼料鈣水平與蝦殼鈣含量之間，飼料磷水平與蝦殼磷含量及肌肉磷含量之間呈線性關系。凡納濱對蝦全蝦及蝦殼的鈣、磷含量與飼料中鈣、磷的水平呈正相關聯系[5]。大麻哈魚(Oncorhynchusketa)[32-33]、虹鱒[34-36]的研究也證實了魚體鈣、磷含量與飼料磷水平之間存在正相關的關系。但有研究表明，印度明對蝦體內磷含量與飼料磷添加量無關[37]；Davis等[38]的研究也表明，飼料中鈣、磷含量與對蝦組織礦物元素含量沒有直接相關性；其他凡納濱對蝦[39]研究及美洲龍蝦(Homarusamericanus)[40]等研究中也有類似的研究結論。這可能與蝦在不同生長階段的蛻皮循環有關，因為甲殼動物蛻皮前后甲殼和肌肉中鈣、磷含量會變化，在蛻殼過程中礦物元素會反復損失[23,40]。

3.4 飼料中鈣、磷水平對凡納濱對蝦血清指標的影響

堿性磷酸酶是一種磷酸單酯酶，可催化磷酸的水解反應及基團的轉移反應，為二磷酸腺苷磷酸化形成三磷酸腺苷提供無機磷酸[41]。堿性磷酸酶是一種水解磷酸酯及焦磷酸酯的水解同工酶，其活性受到飼料磷水平的影響，可作為動物體內磷酸狀態的評價指標之一[42]。本試驗中，飼料磷水平顯著降低了對蝦血清堿性磷酸酶的活性。飼料磷水平0.5%～2.0%使凡納濱對蝦血清堿性磷酸酶活性顯著降低[10]。這與本試驗研究結果一致，也與真鯛(Pagrosomusmajor)[31]、日本沼蝦(M.nipponensis)[43]等結果相一致。但隨飼料磷水平的升高，紅螯螯蝦血清堿性磷酸酶活性也顯著升高[3]，在日本花鱸[24]、虹鱒[26]中也有相似結果。但斑點叉尾血清堿性磷酸酶活性與飼料磷水平間無顯著相關性[25]。這可能是堿性磷酸酶的活性受到水化學[44]、采食量[45]和生長階段[46]等的影響。

酚氧化酶原激活系統是一種酶級聯系統，甲殼動物的酚氧化酶原系統存在于血淋巴中的顆粒細胞中[47]。系統中的酚氧化酶原可以被細菌脂多糖、鈣離子及胰蛋白酶等激活后轉變成具有活性的酚氧化酶[48]。Sung等[49]研究發現，鎂離子、鈣離子能增強斑節對蝦和羅氏沼蝦(M.rosenbergii)酚氧化酶的活性。本試驗飼料鈣水平提高了凡納濱對蝦的血清酚氧化酶的活性，與上述研究一致；而隨著磷水平的提高，凡納濱對蝦血清酚氧化酶活性均呈先升后降的趨勢。這可能是飼料中的磷主要以磷酸根的形式存在，過多的磷酸根與鐵、鎂等金屬離子反應生成不溶性磷酸鹽，從而影響鐵、鎂等離子的消化吸收和血清酚氧化酶的活性[50]。

本試驗中，飼料磷水平對血清鈣離子無顯著性差異。在黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)[51]中也有類似報道。唐琴等[51]認為，飼養試驗結束后，饑餓24 h后取樣，血清的鈣、磷含量已不能反映魚體的攝食情況。本試驗中，飼料磷水平顯著降低了對蝦的血清總膽固醇和甘油三酯含量。0.61%～1.51%磷水平降低了軍曹魚血清總膽固醇和甘油三酯含量[19]。黑鯛血清總膽固醇和甘油三酯含量隨飼料磷水平的升高而降低[18]。本試驗結果與上述研究結果一致，也與大黃魚(Pseudosciaenacrocea)[52]、日本花鱸[24]、雙棘黃姑魚(Protonibeadiacanthus)[53]報道相同。黃曉聰等[53]認為，這與脂肪代謝有關，磷缺乏導致脂肪生成增多，當磷足夠時脂肪生成減少，總膽固醇和甘油三酯的含量下降。

4 結 論

初體質量(4.2±0.15) g的凡納濱對蝦，在水溫28～31 ℃、鹽度21～24條件下，飼料中添加0%、0.5%、1%的鈣時，飼料中磷的適宜添加水平為1.12%、0.88%、0.78%。在添加0.5%鈣和0.88%的磷時凡納濱對蝦特定生長率最大。