微小RNA-137 調控乳腺癌細胞生物學行為的作用及機制研究

楊悅，南丁阿比雅思，王萱，李曉梅

哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院病理科，哈爾濱1500000

乳腺癌是世界范圍內女性常見的惡性腫瘤，發病率逐年上升，且趨于年輕化。研究表明，腫瘤相關因子表達異常和功能改變直接影響乳腺癌的發生、發展，這也是目前研究的熱點[1-2]。磷酸酶和張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是許多腫瘤最易缺失或突變的基因之一，有研究發現，PTEN 水平下降與乳腺癌侵襲表型及預后不良密切相關[3-4]。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類于真核生物中廣泛存在的非編碼RNA，對靶基因的表達起著重要的調控作用，如對細胞的增殖、凋亡等多種生命活動進行調控。多種miRNA 異常表達于乳腺癌中，對miRNA 在乳腺癌中的功能及作用機制的深入研究有利于更好地認知乳腺癌的發生、發展過程[5]。近年來，miRNA-137與PTEN 關系的研究已相繼開展，Mohammad 等[6]在研究中探討了miRNA-137 通過抑制蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又稱AKT）相關信號通路調節PTEN 的過程，發現該調節過程影響了前列腺癌發生、發展過程中H3K4 的去甲基化過程，并對前列腺癌細胞的生物學行為產生了一定的影響。本實驗從組織和細胞水平探討了miRNA-137 通過抑制PTEN 調節磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/AKT 信號通路對乳腺癌生物學行為的調控作用，旨在為尋找乳腺癌診斷及治療的新靶點提供一定的實驗依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本采集

收集2014 年3 月至2018 年1 月哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院收治的乳腺癌患者的臨床資料。納入標準：術前未接受放療、化療、免疫治療等其他抗腫瘤治療；經手術病理確診；臨床資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤；行乳腺假體植入。根據納入和排除標準，本研究共納入92 例乳腺癌患者，年齡26～55 歲，平均（49.5±5.7）歲；按照2003年世界衛生組織（WHO）制定的乳腺組織學分級及分類標準[7]對乳腺癌病例HE 染色切片進行病理學分型和分級，其中，普通型浸潤性導管癌66 例，混合型癌20 例，浸潤性小葉癌6 例；組織學分級：Ⅰ級18 例，Ⅱ級44 例，Ⅲ級30 例。收集92 例乳腺癌患者的乳腺癌組織標本及其癌旁正常組織標本，所有樣本均以10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋，其中，包括遠端轉移腫瘤組織標本36 例。

1.2 細胞、試劑與儀器

DMEM 培養液、Trizol 試劑盒、實時定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）試劑盒、被動裂解液（passive lysis buffer，PLB）、蛋白質印跡法（Western blot）檢測試劑盒、Transwell 小室均購自美國Sigma 公司；熒光素酶檢測試劑盒購自GeneCopoeia 公司；質粒提取試劑盒購自OMEGA 公司。乳腺上皮細胞MCF-10A 及乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231 均購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心，由哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院病理科保存。RM2255 型組織切片機購自北京世貿遠東科學儀器有限公司；MK3 型酶標儀購自美國Thermo Lab systems 公司；DHP-9082 型電熱恒溫培養箱購自上海精宏實驗設備有限公司；UV1700 型紫外分光光度計購自日本島津公司；MiniAmp Plus PCR 儀購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；DYY-6C 型電泳儀購自北京六一儀器廠；JY92-Ⅱ超聲波細胞粉碎機購自寧波新芝生物科技公司；JY-SPFT 型核酸電泳成套設備購自大連競邁生物科技有限公司；JY-SCZ2 型蛋白電泳成套設備購自大連競邁生物科技有限公司；ELx800 型全自動酶標儀購自美國Bio-Tek 公司；FACS Vantage SE 型流式細胞儀購自美國BD 公司。ImageQuant LAS 500 生物分子成像儀購于美國Cytiva 公司。

1.3 細胞培養與轉染

將乳腺上皮細胞MCF-10A 及乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231（1×106/ml）分別置于12 孔培養板中，條件設置為37 ℃和5% CO2，置入DMEM培養液中常規培養24 h，經處理后孵育15 min，再于孔板中置入6 h，換液后繼續培養24 h，后以同樣條件再次轉染，繼續培養24 h。將3 種樣本細胞分別分為空白組（無轉染質粒）、miRNA-NC 組（轉染無義序列）、miRNA-137 mimics 轉染組（轉染miRNA-137 mimics）、miRNA-137 mimics+PTEN 轉染組（轉染miRNA-137 mimics+PTEN）。通過化學合成miRNA-137 特異性模擬物mimics 對乳腺癌細胞進行轉染。

1.4 質粒構建與轉染

質粒均由病理科保存。利用microRNA 靶基因數據庫及生物信息軟件對miRNA-137 與靶基因的相互作用進行預測，判斷PTEN mRNA 3'UTR 的堿基是否存在miRNA-137 可能互補結合的位點，預測miRNA-137 與PTEN 可能的作用位點位于PTEN 3'UTR 41-47 堿基（5'-ACUUGAA-3'）。構建PTEN 野生型3'-UTR 熒光素酶質粒pMIR-WT（WTPTEN）和PTEN 突 變 型 質 粒pMIR- Mut（Mut-PTEN）。

熒光素酶報告基因法檢測熒光素酶活性。將pMIR-WT、pMIR-Mut、PTEN 模擬物與miRNA-137 mimics 和對照mimics 共轉染MCF-7 細胞，24 h 后去除培養基，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗細胞3 次后將其棄凈，各孔添加PLB 100 μl，于室溫下放置培養板于平板搖床上，微微晃動15 min。細胞裂解后，轉移各組中20 μl樣本至發光用96 孔板中，同時放置超級酶標儀檢測板中，設置自動進樣器1、2 分別分裝LARⅡ和Stop&Glo 試劑各100 μl。通過1～2 s 延遲、5～10 s讀數進行測量。循環操作，直至檢測完所有樣本，之后將其結果通過酶標儀配套軟件進行分析。熒光素酶相對活性=螢火蟲熒光素酶活性/海腎熒光素酶活性。質粒構建及轉染后基因測序均由上海生工生物工程公司完成。

1.5 qRT-PCR 檢測miRNA-137 表達水平

采用qRT-PCR 檢測細胞、組織中miRNA-137的表達水平。按照Trizol 試劑盒說明書中步驟提取總RNA，按照反轉錄試劑盒說明書步驟逆轉錄總RNA，繼而合成cDNA，根據qRT-PCR 試劑盒說明書進行PCR 反應。以Ct 值形式得到qRT-PCR 結果，同時擴增所有樣本中靶基因miRNA 和內參U6，反應體系為20 μl。每個樣本重復3 次。

1.6 驗證蛋白水平

Western blot 檢測PTEN、p-AKT 308、p-AKT 473、AKT 蛋白的表達情況：將乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231 通過RIPA 細胞裂解液加以裂解，采用BAC 法測量其濃度，通過上樣緩沖液調齊細胞濃度，每孔上樣40 μg。先以120 V 電壓進行電泳，待Marker 到達濃縮膠與分離膠交界處時，將電壓轉換至150 V，持續至Marker 完全分開。按照Marker 指示，將對應目的蛋白位置的凝膠及GAPDH 相對應的凝膠切下。置蛋白于濕轉儀器中，于恒流300 mA 下轉至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上。然后置PVDF 膜于5%封閉液（5%脫脂牛奶）中在37℃下封閉2 h。PTEN 一抗稀釋比例為1∶500，p-AKT 308、p-AKT 473、AKT 一抗稀釋比例均為1∶1000，將PVDF 膜封閉好，于4 ℃下與一抗孵育過夜。為使蛋白與一抗充分混勻，1 天后，于37 ℃下將其置入搖床中振動2 h，TBST 洗膜4 次，每次8 分鐘，將膜與二抗（稀釋比例為1∶5000）浸泡，置入搖床于37 ℃下振動1.5 h。根據電化學發光（electrochemiluminescence，ECL）試劑說明書，于Image Quant LAS 500 儀器中檢測結果。實驗重復3 次。

1.7 驗證細胞水平

1.7.1 Transwell 實驗檢測細胞遷移和侵襲能力

檢測乳腺癌細胞MCF-7 和MDA-MB-231 的侵襲能力。將其制成單細胞混懸液，然后接種至Transwell小室上室中。將Transwell 小室底部膜的上室面于50 mg/L Matrigel 采用稀釋液（比例為1∶8，無血清培養基）加以包被，4 ℃下風干，將培養板中殘余液體吸出，于37 ℃下各孔加入300 μl 無血清培養基，培養30 min。將細胞無血清“饑餓”處理12～24 h 后制備細胞懸液，以去除血清的影響。待消化終止后離心棄去培養液，將其以PBS 清洗1～2 次，同時置于含1%牛血清蛋白（bovine serum albumin，BSA）的無血清培養基中重懸。將細胞密度調整為（1～5）×105/ml，將200 μl 的細胞懸液去除置入Transwell 小室，將500 μl 含胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的培養基加至24 孔板下室中，培養12～49 h，接種細胞后1 h 檢查確認無大氣泡產生后，用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞，采用0.1%蘇木素-伊紅染色。通過倒置顯微鏡對不同細胞系移至下室的細胞數目進行計數。實驗重復3 次。

1.7.2 CCK8 實驗檢測細胞增殖能力 將無義序列、miRNA-137 mimics、miRNA-137 mimics+PTEN分別轉染至低侵襲能力的乳腺癌細胞株MCF-7，將2×103個細胞鋪于96 孔板中，分別于0、24、48、72 h 加入CCK8 10 μl，置入37 ℃、5%CO2的培養箱中，4 h 后，通過酶標儀檢測450 nm 處的光密度（optical density，OD）值，并繪制生長曲線。實驗重復3 次。

1.7.3 劃痕實驗檢測細胞遷移能力 將4×105個細胞（MCF-7、MDA-MB-231）鋪置于12 孔板中，后置入37 ℃、5%CO2的培養箱，等細胞過夜貼壁且長滿后，用10 μl槍頭劃痕，除去培養基，PBS清洗數次后加入無血清培養基，分別于0、24 h于相同位置拍照，采用ipwin 32軟件分析實驗結果。實驗重復3次。

1.7.4 流式細胞術檢測細胞活力 將10 cm 培養皿的細胞收集，70%乙醇固定，40 ℃下過夜。染色前，重新收集細胞，PBS 重新靜置，PI 溶液染色細胞，37 ℃下孵育15 min。采用流式細胞儀獲取數據，采用BD FACSuite TM 軟件分析數據，檢測細胞周期，計算細胞（MCF-7、MDA-MB-231）活力的相對表達水平。實驗重復3 次。

1.8 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 法；計數資料以例數或率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織和細胞中miRNA-137表達水平的比較

qRT-PCR 檢測結果顯示，乳腺癌組織中miRNA-137 的表達水平為（2.91±0.36），明顯高于癌旁正常組織的（1.00±0.15），差異有統計學意義（t=41.224，P＜0.01）。發生遠端轉移乳腺癌組織中miRNA-137 的表達水平為（2.19±0.37），明顯高于未發生遠端轉移乳腺癌組織的（1.00±0.12），差異有統計學意義（t=22.365，P＜0.01）。乳腺上皮細胞MCF-10A 及乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231 中miRNA-137 的表達水平分別為（1.00±0.14）、（1.66±0.20）、（2.85±0.30），3 組比較，差異有統計學意義（F=12.331，P＜0.01）。MCF-7、MDA-MB-231 細胞中miRNA-137 的表達水平均明顯高于MCF-10A 細胞，差 異 均 有 統 計 學 意 義（t=4.683、9.679，P ＜0.01）。對于MCF-7 細胞，miRNA-137 mimics 轉染組miRNA-137 的表達水平為（6.56±0.10），明顯高于miRNA-NC 組的（1.01±0.01），差異有統計學意義（t=95.652，P＜0.01）。

2.2 乳腺癌細胞侵襲能力的比較

Transwell 細胞侵襲實驗檢測結果顯示，乳腺癌細胞MDA-MB-231 的侵襲數目為（438.77±14.77）個，明顯多于MCF-7 的（176.95±10.79）個，差異有統計學意義（t=24.792，P＜0.01）。（圖1）

圖1 Transwell細胞侵襲實驗檢測不同乳腺癌細胞的侵襲能力（蘇木素-伊紅染色，×200）

2.3 miRNA-137 靶向調控PTEN mRNA 的表達

生物信息學軟件預測發現，PTEN mRNA 3'UTR 的堿基存在與miRNA-137 可能互補結合的位點，提示PTEN 是miRNA-137 可能作用的靶基因。

2.4 miRNA-137 結合PTEN mRNA 3'UTR 堿基抑制PTEN 的表達

熒光素酶報告基因法檢測結果顯示，對于WTPTEN 野生型報告基因質粒，miRNA-137 mimics 轉染組的熒光素酶活性為（3.95±0.22），明顯低于miRNA-NC 組的（6.16±0.07），差異有統計學意義（t=16.580，P＜0.01）。對于Mut-PTEN 突變型報告基因質粒，miRNA-137 mimics 轉染組的熒光素酶活性為（7.13±0.10），與miRNA-NC 組的（7.01±0.17）比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

Western blot檢測結果顯示，miRNA-137 mimics轉染組PTEN 蛋白的相對表達量為（0.60±0.05），明顯低于miRNA-NC 對照組的（2.01±0.01），差異有統計學意義（t=47.895，P＜0.01）。（圖2）

圖2 Western blot檢測不同組別PTEN蛋白的相對表達量

qRT-PCR 檢測結果顯示，miRNA-137 mimics轉染組PTEN mRNA 的表達水平為（0.39±0.04），明顯低于miRNA-NC 組的（1.01±0.01），差異有統計學意義（t=26.045，P＜0.01）。

2.5 不同組織和細胞中PTEN mRNA 及蛋白的表達情況

乳腺上皮細胞MCF-10A及乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231 中PTEN mRNA 的表達水平分別為（1.00±0.11）、（0.79±0.12）、（0.79±0.12），3 組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。乳腺癌組織中PTEN mRNA 的表達水平為（0.47±0.05），明顯低于癌旁正常組織的（1.02±0.15），差異有統計學意義（t=23.816，P＜0.01）。Western blot 檢測結果顯示，乳腺癌組織中PTEN 蛋白的相對表達量為（0.47±0.05），明顯低于癌旁正常組織的（2.04±0.03），差異有統計學意義（t=102.781，P＜0.01）（圖3）。

圖3 Western blot檢測不同組織中PTEN蛋白的相對表達量

2.6 miRNA-137 與PTEN 調控不同侵襲能力乳腺癌細胞的生物學行為

不同組別MCF-7 細胞的OD 值、S 期細胞比值、侵襲細胞數目、遷移細胞數目、細胞遷移距離比較，差 異 均 有 統 計 學 意 義（F=49.345、46.678、221.615、502.389、21.367，P ＜0.01）。不 同 組 別MDA-MB-231 細胞的OD 值、S 期細胞比值、細胞侵襲數、轉移細胞數、細胞遷移距離比較，差異均有統計學意義（F=17.750、126.943、241.52、11.408、39.185，P＜0.01）。miRNA-137 mimics 轉染組的上述各指標均高于miRNA-NC 組，而miRNA-137 mimics+PTEN 轉染組的上述各指標均低于miRNA-137 mimics 轉染組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1、表2）

2.7 miRNA-137 與PTEN 通 過 調 節PI3K/AKT 信號通路調控乳腺癌的生物學行為

Western blot 檢測結果顯示，不同組別MCF-7細胞中PTEN、p-AKT 308、p-AKT 473 蛋白的表達水平比較，差異均有統計學意義（F=54.188、29.223、54.026，P＜0.01）；不同組別MCF-7 細胞中AKT 蛋白的表達水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。miRNA-137 mimics 轉染組中PTEN、p-AKT 308、p-AKT 473 蛋白的表達水平均高于miRNA-NC 組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；miRNA-137 mimics+PTEN轉染組PTEN、p-AKT 308、p-AKT 473 蛋白的表達水平均低于miRNA-137 mimics 轉染組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3、圖4）

3 討論

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，也是女性惡性腫瘤死因的前三位惡性腫瘤之一[8]。轉移是乳腺癌病死率高的主要危險因素。據統計，轉移后的病死率居乳腺癌死亡總人數的90%以上[9]。惡性程度、增長速度亦是乳腺癌預后差的危險因素。因此，探索與惡性腫瘤轉移及增殖相關的分子標志物對于提高乳腺癌的確診率以及為患者提供確切、有效的治療方案至關重要[10]。

圖4 不同組別PTEN、p-AKT308、p-AKT473、AKT蛋白的表達水平

miRNA 屬于非編碼小RNA 家族，其通過部分序列互補的方式與目標基因mRNA 的3'UTR 區域結合，調節基因的表達。由于其目標蛋白在某些信號通路中的重要功能，miRNA 已成為基因調節的重要目標。多項研究發現，miRNA 可作為抑癌或促癌因素參與腫瘤的發生、發展。研究表明，部分miRNA 的表達異常與乳腺癌的發生、發展有直接的關系[11-15]。Zhang 等[16]研究發現，miRNA-205 可以靶向調節ErbB3、血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA），發揮對乳腺癌細胞增長和遷移的抑制作用。Hu等[17]研究發現，miRNA-93 在三陰性乳腺癌中呈高表達。黃秀芳[18]應用miRNA微陣列技術研究了乳腺癌miRNA的差異表達譜，結果發現，miRNA-137、miRNA-497、miRNA-21、miRNA-155 等miRNA 的表達異?？赡芘c乳腺癌的發生、發展密切相關。近年來，miRNA-497、miRNA-21、miRNA-155 等miRNA 與乳腺癌的相關性研究已逐漸成熟，關于miRNA-137 與乳腺癌的研究還未見報道。本研究分別從組織水平和細胞水平探討了miRNA-137 與乳腺癌細胞之間的關系。

本研究結果顯示，乳腺癌組織中的miRNA-137的表達水平明顯高于癌旁正常組織，發生遠端轉移的乳腺癌組織中miRNA-137 的表達水平明顯高于未發生轉移的乳腺癌組織?？梢娙橄侔┡cmiRNA-137 表達異常之間的關系密切。

表1 不同組別MCF-7 細胞OD 值、S 期細胞比值、侵襲細胞數目、遷移細胞數目、細胞遷移距離的比較（±s）

表1 不同組別MCF-7 細胞OD 值、S 期細胞比值、侵襲細胞數目、遷移細胞數目、細胞遷移距離的比較（±s）

注：a與miRNA-NC組比較，P＜0.05；b與miRNA-137 mimics轉染組比較，P＜0.05

指標OD值S期細胞比值（%）侵襲細胞數目（/HP）遷移細胞數目（/HP）細胞遷移距離（mm）miRNA-NC組1.66±0.04 14.60±1.27 146.30±10.17 159.33±8.25 12.71±1.39 miRNA-137 mimics轉染組2.47±0.12a 20.67±1.20a 305.33±9.24a 290.00±3.21a 27.42±3.30a miRNA-137 mimics+PTEN轉染組0.95±0.14b 6.91±0.07b 70.33±2.40b 46.67±3.18b 8.92±0.75b

表2 不同組別MDA-MB-231 細胞OD 值、S 期細胞比值、侵襲細胞數目、遷移細胞數目、細胞遷移距離的比較（±s）

表2 不同組別MDA-MB-231 細胞OD 值、S 期細胞比值、侵襲細胞數目、遷移細胞數目、細胞遷移距離的比較（±s）

注：a與miRNA-NC組比較，P＜0.05；b與miRNA-137 mimics轉染組比較，P＜0.05

指標OD值S期細胞比值（%）侵襲細胞數目（/HP）遷移細胞數目（/HP）細胞遷移距離（mm）miRNA-NC組1.23±0.16 18.55±1.20 165.33±5.93 187.67±17.29 13.30±1.26 miRNA-137 mimics轉染組2.03±0.15a 26.16±1.12a 355.00±14.73a 293.33±51.52a 22.95±1.59a miRNA-137 mimics+PTEN轉染組0.85±0.12b 13.21±1.46b 70.00±3.06b 80.67±4.41b 7.71±0.67b

表3 不同組別MCF-7 細胞中相關蛋白表達水平的比較（±s）

表3 不同組別MCF-7 細胞中相關蛋白表達水平的比較（±s）

注：a與miRNA-NC組比較，P＜0.05；b與miRNA-137 mimics轉染組比較，P＜0.05

蛋白PTEN p-AKT 308 p-AKT 473 AKT miRNA-NC組46.10±2.97 17.90±0.60 25.33±1.48 26.53±1.28 miRNA-137 mimics轉染組17.43±1.07a 31.43±2.14a 42.27±1.24a 26.33±0.61 miRNA-137 mimics+PTEN轉染組46.93±2.38b 17.82±1.17b 26.37±1.13b 26.58±0.33

PTEN 是一種腫瘤抑制基因，具有抑制細胞周期、誘導細胞凋亡以及抑制腫瘤細胞轉移和侵襲等功能，在乳腺癌發病中具有重要作用。研究發現，PTEN 也可作為評價乳腺癌預后的指標，在乳腺癌組織從癌前病變向乳腺癌演變的過程中有重要作用，其表達與乳腺癌患者的淋巴轉移情況有關，同時，PTEN 蛋白的低表達可直接影響乳腺癌的發生，其原因可能是PTEN 的功能缺失，降低了其對腫瘤細胞生長及黏附的抑制和調控作用，提高了乳腺癌的發病率[19-21]。本研究也發現，乳腺癌細胞中PTEN mRNA 的表達水平均明顯低于乳腺上皮細胞，乳腺癌組織中PTEN mRNA 及蛋白的表達水平明顯低于癌旁正常組織，證實了PTEN 對乳腺癌發生、發展的抑制作用。

本研究通過生物信息軟件預測發現PTEN mRNA 3'UTR 的堿基存在與miRNA-137 可能互補結合的位點，提示PTEN 是miRNA-137 可能作用的靶基因，miRNA-137 可能通過對PTEN 的抑制作用發揮對乳腺癌細胞的相應生物學作用。本研究通過相應實驗也驗證了miRNA-137 能夠抑制PTEN蛋白的表達。PTEN 的過表達能夠抑制miRNA-137 對乳腺癌細胞增殖、侵襲、遷移的促進作用。為了探索miRNA-137 通過抑制PTEN 表達從而調控乳腺癌細胞生物學行為的具體作用機制，本研究將PI3K/AKT 信號通路作為主要研究內容，這是由于PI3K/AKT 信號通路可調控多種惡性腫瘤的發生、進展，如促進腫瘤細胞的生長、增殖及轉移等[22-23]。然而，多種miRNA 通過PI3K/AKT 信號通路影響乳腺癌發生、發展的研究已相對成熟[24]。

本研究發現，若上調乳腺癌細胞中miRNA-137 的表達，p-AKT 308、p-AKT 473 蛋白的表達量隨之明顯升高，而AKT 蛋白的表達量卻無明顯變化。若將MCF-7 細胞轉染miRNA-137 mimics 和PTEN，p-AKT 308、p-AKT 473 蛋白的表達量恢復至原水平，而PTEN 也逆轉了miRNA-137 對PI3K/AKT 信號通路的影響。提示miRNA-137 可能通過抑制PTEN 調節PI3K/AKT 信號通路的活性。進一步關于乳腺癌細胞侵襲、遷移、增殖的研究也證實了PI3K/AKT 通路對乳腺癌的調控作用。

綜上所述，本研究充分闡述了miRNA-137 對乳腺癌的調控機制，PTEN 對乳腺癌的發生、發展具有抑制作用，而miRNA-137 通過抑制PTEN 的表達促進乳腺癌細胞的增殖、侵襲、遷移，同時通過調節PI3K/AKT 信號通路促進乳腺癌的生物學行為，因此，miRNA-137 有可能成為乳腺癌診斷及治療的新靶點。