分析DLAT 在結直腸癌中的表達和臨床意義

劉振興，張震，高翔

（武安市中醫院，河北 邯鄲 056300）

0 引言

結腸癌發生過程中具有多種影響因素，具有復雜的病理機制，其中主要的高危因素為環境因素，占比近50%，與高脂肪、高熱量自己低纖維素等飲食習慣均存在密切關聯[1]。在結腸癌遺傳易感性的機制中外來致癌物以及抑癌物質代謝相關酶基因的多態性具有關鍵作用。體內Ⅱ相解毒酶中的二氫硫辛酸轉乙?；福―ihydrolipoyl transacetylase，DLAT）具有重要作用，可促進乙?；磻?，直接或間接影響體內芳香胺類、雜環胺類等致癌物的活化劑滅活過程，其活性具有顯著的遺傳多態性。本項研究旨在研究二氫硫辛酸轉乙?；富蚨鄳B性對結腸癌易感性的影響，現匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。分別選取210 例、242 例2017 年3 月至2018 年5 月本院收治的結腸癌患者以及體檢結果正常的成人作為研究對象。上述研究對象分別分為研究組及常規組。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提?。翰捎糜缮虾Ｄ成锟萍脊举徺I的DNA試劑盒提取外周血淋巴細胞基因DNA。

1.2.2 分析基因型：引物序列由大連某生物科技公司合成，引物序列分別為為5’→3’GGAACAAATTGGACTTGG、5’→3’TCTAGCATGAATCACTCTGC。由上海某生物工程有限公司購買PCR 反應體系，擴增條件為先在95℃溫度下反應5 分鐘，再在相同溫度下反應60s，改用57℃持續反應1 分鐘，最后在72℃溫度下反應90s，重復35 次，在72℃下反應5 分鐘。酶切后置于1.5%質量分數瓊脂糖凝膠中電泳，持續1 小時，經30 分鐘EB 染色后，置于紫外線燈下觀察。

1.2.3 吸煙情況：研究組具有吸煙史的患者例次為150 例，60 例患者不吸煙；常規組吸煙例次為140 例，102 例不吸煙。

1.3 統計學分析。研究數據錄入SPSS 12.0 軟件進行統計分析。組間基因型分布的差異采用χ 2 檢驗。相對危險度采用非條件Logistic 回歸分析，P＜0.05 時，差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 DALT 基因型與結腸癌遺傳易感性關系。研究組檢查出154 例不同基因型，常規組共檢出188 例。研究組Wt/M2的頻率遠高于常規組，而Wt/M3 基因型頻率遠低于常規組，（P＜0.01，P＜0.05），差異均具有統計學意義。經比較，兩組的慢速乙?；蛐皖l率差異不明顯，P＞0.05，無統計學意義，附表1，表2。

表1 DLAT 基因型與結腸癌關系（例）

表2 DLAT 慢速沒基因型與結腸癌關系（例）

2.2 DLAT 基因型與吸煙相關性。吸煙組DLAT 快速乙?；蛡€體發生結腸癌的風險高于不吸煙組，P＞0.05，組間差異無統計學意義，附表3。

表3 DLAT 基因型與吸煙相關性

3 討論

單個基因位點對DLAT 基因多態性起決定性作用，多以常染色體隱性遺傳形式存在。導致酶活性差異的主要原因的編碼及非編碼區點發生突變，繼而對個體間由芳香胺進行誘導的腫瘤易感性產生影響。根據DLAT 結構基因限制性內切酶位點的差異，481、590、857 三個位點的突變是決定DLAT 表型的重要影響因素。Wt、M1、M2、M3 是DLAT的常見多態，應用于快速酶編碼的是Wt。余下三種常見多態突變型等位基因可采用限制性片段長度多態性分析（PCRRFLP）測定，基因組成是DLAT 活性的決定性因素。DLAT基因突變對其表型變化的影響尚未明確，但可確定DLAT 可通過改變其代謝酶氨基酸序列進而達到降低酶活性的目的。若野生型Wt 等位基因數量超過1 個，則DLAT 表型為快基因型，編碼快代謝酶；若突變型等位基因的數量超過2 個并且不存在野生型等位基因時，則為慢基因型，編碼慢代謝酶。該基因與Kas 基因突變致癌的機制相同[2]。Viswanathan VS[3]以結腸息肉患者為切入點進行研究后發現，基因型Wt/Wt 對結腸癌發病具有一定的保護作用。芳香胺類化合物在煙草中含量較高，DLAT 對該類致癌物具有一定程度的解毒效果，由吸煙引發的癌癥遺傳易感性于DLAT 存在密切關聯。DLAT 酶代謝酶對煙葉中的芳香胺類、雜環胺類進行激活后，提高起與腸黏膜上皮細胞DNA 的結合率，促進DNA 加成物生成率，損傷DNA 并引發染色體畸變，增加癌癥發生風險。BeckermannKE[4]研究發現，攜帶DLAT 慢基因型的人發生肺癌的幾率更高，吸煙量是影響危險程度的關鍵因素。該學者研究指出，DLAT 慢乙?；臀鼰熣呋挤伟┑奈ｋU性顯著上升。多數腫瘤發生的內在遺傳易感因子均為慢乙?；蛐?，是影響環境致癌的重要因素[5-6]。本項研究數據顯示，研究組、常規組攜帶慢乙?；蛐偷膫€體頻率差異無統計學意義，證實單獨存在的慢乙?；蛐蛯Y腸癌發病無明顯影響；研究組長期吸煙的快乙?；颊咻^常規組發生結腸癌的危險性更高，證實長期大劑量吸煙是影響結腸癌發生率的外在環境因素之一，引發結腸癌發生的內在遺傳因素包括體內存在DLAT 快乙?；蛐?。

總之，明確DLAT 基因多態性與結腸癌易感性間的具體聯系，對結腸癌防治起關鍵作用。通過檢測DLAT 基因多態性，可篩選出結腸癌高危人群，降低與環境致癌物的接觸幾率，進而降低腫瘤的發生率。