三丫苦葉提取物對高尿酸血癥模型大鼠尿酸合成相關酶調節作用研究

胡向陽，李 安，林春淑，楊 璇

（中山大學附屬第五醫院中醫科，廣東 珠海 519000）

高尿酸血癥（Hyperuricemia，HUA）是由于長期體內嘌呤代謝障礙致尿酸（uric acid，UA）產生增多及UA排泄減少而引起的代謝性疾病，其中UA生成過多是HUA的重要生化基礎［1］。別嘌呤醇是黃嘌呤氧化酶（XOR）抑制劑，自1963年上市以來，目前仍是臨床常用抑制尿酸合成藥物，但報道其有皮膚及其附件損害、胃腸道損害、骨髓毒性和變態反應等毒副作用［2］。中藥如土茯苓、萆薢、金錢草等［3-4］單方或復方治療HUA研究受到重視和關注，相關臨床或實驗研究發現中藥治療HUA有促尿酸排泄、肝腎毒性小、作用和緩等優勢。三丫苦［Melicope ptelefolia（Champ ex Benth）Hartley］為蕓香科（Rutaeeae）蜜茱萸屬植物，又名三椏苦、三叉苦、三丫虎等。三丫苦性味苦、寒，有清熱解毒、行氣止痛、燥濕的功效，主治熱病、咽喉腫痛、風濕骨痛等［5］。三丫苦化學成分為黃酮類、生物堿類、揮發油等化合物，有抑菌抗炎、鎮痛、抗氧化等作用。我們前期研究發現三丫苦葉對胰島素抵抗模型大鼠有干預作用［6-7］。本研究觀察三丫苦葉提取物對HUA模型大鼠尿酸合成相關酶的調節作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

Wistar雄性大鼠48只，SPF級，體質量（140±10）g，由中山大學實驗動物中心提供，合格證號：粵檢證字2017D216。每籠4只分籠飼養，自由飲水，及時更換墊料，定期清洗鼠籠，適應性飼養1周后用于實驗。

1.2 實驗藥物

別嘌醇片（上海信宜萬象藥業股份有限公司，批準文號H31020334，產品批號07130806，規格100mg/片），臨用前以生理鹽水溶解濃度為50mg/mL。三丫苦葉購于廣東省中醫院，以每克生藥加水10mL，冷水浸泡60min后，武火煎煮，煮沸后用文火慢煎20min，過濾藥液。采用FLT-U系列膜過濾系統（湖北菲爾特公司）過濾藥液，115℃、30min濕熱滅菌，60℃恒溫下旋轉蒸發，濃縮為含生藥10g/mL的藥液，置4℃冰箱保存備用。

1.3 試劑與儀器

氧嗪酸鉀、羧甲基纖維素和鈉酵母粉由廣州天馬精細化工廠生產，腺嘌呤由Amresco公司生產，XOR和PRPS檢測試劑盒，均購自南京建成生物工程有限公司。LD4-2型低速離心機，北京醫用離心機廠生產，Alpha-150p紫外可見分光光度計，上海譜元儀器有限公司生產。

1.4 動物分組、模型制備與給藥方法

Wistar大鼠48只，采用數字隨機分組法分為正常對照組、模型對照組、別嘌醇組、三丫苦葉提取物組。按參考文獻［8］造模方法，除正常對照組外，其余各組均給予10%酵母飼料飼喂，給予腹部皮下注射配置的羧甲基纖維素鈉粉和氧嗪酸鉀配乳懸液100mg/kg。每天1次，連續15天，制備高HUA模型。正常對照組給予普通大鼠顆粒飼料和同體積的生理鹽水，模型對照組給予等體積生理鹽水灌胃，別嘌醇組灌胃給予別嘌醇片100mg/kg，三丫苦葉提取物組灌胃給予三丫苦葉提取物10g/kg。每天1次，連續30天。

1.5 指標檢測

分別于造模前、造模后15天和給藥后7天、15天、30天當晚大鼠禁食不禁水6h，腹腔注射10% 水合氯醛麻醉大鼠，眼眶后靜脈采血，將采取的新鮮血加入含肝素抗凝的試管中，4℃，離心15min（3500轉/min），分離收取血清。酶比色法檢測血XOR和PRPS，操作按試劑盒說明書進行。

1.6 統計學處理

用SPSS20.0 for windows系統軟件進行統計學處理。方差齊，均值間差異比較單因素方差分析；方差不齊，均值間差異比較采用校正t檢驗，組間兩兩比較采用q檢驗。計量資料以（±s）表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

各實驗組大鼠血XOR比較見表1。與正常對照組比較，造模前各實驗組大鼠XOR均顯著升高（P＜0.01）；給藥后第7、15、30天，模型對照組XOR均顯著升高（P＜0.01）；給藥后7天，別嘌醇組XOR升高（P＜0.05）；給藥后7、15天，三丫苦葉提取物組XOR顯著升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，給藥后7、15、30天，別嘌醇組XOR均顯著降低（P＜0.01）；給藥后15、30天，三丫苦葉提取物組XOR降低（P＜0.05）。與別嘌醇組比較，給藥后7、15天，三丫苦葉提取物組XOR升高（P＜0.05）。

表1 各實驗組大鼠血XOR比較 （mg/L，±s）

表1 各實驗組大鼠血XOR比較 （mg/L，±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與別嘌醇組比較，#P＜0.05。

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各實驗組大鼠血PRPS比較見表2。與正常對照組比較，造模前各實驗組大鼠PRPS均顯著升高（P＜0.01）；給藥后第7天、15天、30天，模型對照組PRPS均顯著升高（P＜0.01），別嘌醇組PRPS有不同程度升高（P＜0.05或P＜0.01）；給藥后7天，三丫苦葉提取物組PRPS升高（P＜0.05）。與模型對照組比較，給藥后7天、15天、30天，別嘌醇組PRPS均降低（P＜0.05）；三丫苦葉提取物組PRPS降低或顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。與別嘌醇組比較，給藥后15天、30天，三丫苦葉提取物組PRPS降低（P＜0.05）。

表2 各實驗組大鼠血PRPS比較 （mg/L，±s）

表2 各實驗組大鼠血PRPS比較 （mg/L，±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與別嘌醇組比較，#P＜0.05。

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3 討 論

HUA發病率呈上升趨勢，我國成人HUA患病率為8.4%～13.3%，成為次于糖尿病的第2大代謝性疾?。?］。XOR和PRPS在調節UA生成過程中發揮著重要酶促作用。XOR可催化次黃嘌呤及黃嘌呤生成UA，有效抑制XOR活性，對降低體內尿酸水平有重要意義［10］。PRPS是嘌呤生物合成的重要前體，催化5'-磷酸核糖和ATP 合成磷酸核糖焦磷酸（Phosphoribosyl pyrophosphate，PRPP），PRPP促進嘌呤核苷酸在體內的合成代謝，導致血UA增高［11］。傳統服用方式和民間食用習俗是研究中藥材療效的立足點，同時，傳統煎熬方式也可借助新技術改進。膜分離技術是以選擇性透過膜為分離介質，對混合物中特定組分實現分離、提純和濃縮的分離技術。膜分離技術超濾膜截留相對分子質量范圍為5×103～5×105，中藥有效成分相對分子質量大多不超過1000，無效成分如淀粉、樹脂、果膠等則在5×104以上。膜分離方法實現中藥有效成分與雜質的分離，去除淀粉、蛋白質、樹脂等高分子，藥液顏色透亮及口感較好，保質期長［12］。

實驗發現，三丫苦葉膜分離提取物降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平。值得關注的是，與別嘌醇比較，三丫苦葉提取物組在第7天、15天，XOR升高；給藥后第15天、30天，三丫苦葉提取物組血PRPS降低。實驗結果提示三丫苦葉提取物可降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平，與別嘌醇片比較效應和緩持久。相比于西藥，中藥治療代謝性疾病具有多作用靶點、整體調理等優勢。

膜分離技術制備三丫苦葉提取物有一定降尿酸作用，但其效應成分、量效和毒理學研究等尚需進一步研究。