山農一號殺菌劑對秋子梨污染組培苗抑菌效果研究

盧明艷 王強 閆興凱 武春昊 劉明鶴 張茂君

摘 要：以秋子梨污染組培苗為材料，研究“山農一號”殺菌劑對秋子梨污染組培苗抑菌效果和生長的影響。結果表明：“山農一號”Ⅰ型和Ⅲ型殺菌劑配合使用對污染組培苗有顯著的抑菌效果，能有效地挽救污染組培苗，組培苗的恢復率達70%以上;增加組培苗鮮重和株高;提高增殖倍數，增殖倍數在1～3倍。

關鍵詞：秋子梨;“山農一號”殺菌劑;污染組培苗;抑菌;恢復率

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20200415002

收稿日期：2020-03-23

基金項目：農業部園藝作物種質資源利用重點實驗室開放基金資助課題“梨耐鹽堿砧木工廠化育苗體系建立”（項目編號：NYZS2018-1-1）

作者簡介：盧明艷（1978-），女，碩士，副研究員。研究方向：秋子梨品種選育及栽培技術;通訊作者張茂君，博士，研究員。研究方向：秋子梨品種選育及栽培技術。

組織培養技術由于繁殖系數高，短時間內能夠獲得大量優質苗木，已經被廣泛應用于植物繁育中。近年來，隨著組織培養技術的成熟，已逐漸形成工廠化育苗，為苗木市場的規范化、優質化提供了保障。但同時也存在著一些技術瓶頸，如玻璃化、污染等。其中污染是組織培養過程中最容易出現的問題，貫穿于各個組織培養環節。引起污染的原因復雜，涉及技術、人員、培養材料、內外環境等諸多因素，是制約組織培養發展的一個難題，也是亟待解決的問題[1]。利用殺菌劑對組織培養過程中的各種菌類污染的防治在馬鈴薯[2-5]、黃槐[6]、鳶尾[7]等許多植物上都有研究，果樹在香蕉[8]、枸杞[9]、核桃[10]、葡萄[11]上也有報道，但在梨上還未見相關報道。

“山農一號”是一種廣譜生物滅菌劑，能夠殺死各種細菌和真菌細胞，阻止孢子萌發，在較高濃度下，能夠消除外植體的內生菌污染。其活性成分能夠穿透菌類細胞壁，抑制部分參與主要新陳代謝循環的酶類活性，抑制檸檬酸循環和電子傳遞等，同時也能夠阻斷一些單糖和氨基酸從培養基到菌類細胞的運轉，從而達到殺菌作用。并且其耐高壓滅菌，能與抗生素類配合使用。

試驗利用“山農一號”生物殺菌劑對秋子梨污染組培苗進行抑菌效果研究，旨在解決組織培養過程中高污染發生的問題，同時就殺菌劑對組培苗生長的影響進行調查研究，為梨組織培養污染的治理提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

供試材料為秋子梨污染組培苗。根據組培瓶內菌落情況將污染分為嚴重（菌落面積較大，見圖1A）和較輕（菌落點狀，零星分布，圖1B）2種。

“山農一號”殺菌劑購自山東智科生物科技有限公司?！吧睫r一號”Ⅰ型殺菌劑是外植體劑型殺菌劑，殺菌能力強，滲透性強，主要用于外植體消毒?！吧睫r一號”Ⅲ型殺菌劑是共生菌專用劑型，更偏重于抑菌效果，對內生菌污染的防治更為有效。依據說明書，試驗中Ⅰ型和Ⅲ型殺菌劑配合使用。

1.2?試驗設計

先將“山農一號”Ⅰ型殺菌劑用1/4MS無機鹽溶液配成5%溶液，裝于瓶內，保存于4℃冰箱中，用于浸泡污染的組培苗，浸泡方式為全株浸泡。

1.2.1?“山農一號”殺菌劑對不同污染程度秋子梨組培苗的抑菌效果

將不同污染程度組培苗剪去基部后，分別浸泡于5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑溶液中2h，然后接種于含0.1%“山農一號”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養基上進行培養。以無污染為對照，對照不處理。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調查各項指標。

1.2.2?“山農一號”殺菌劑不同滅菌時間對秋子梨污染組培苗抑菌效果

將污染較輕的秋子梨組培苗剪去基部后用5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑分別浸泡0.5h、1.0h、1.5h、2.0h。然后接種在含0.1%“山農一號”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養基上。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調查各項指標。

1.2.3?不同濃度“山農一號”殺菌劑對秋子梨污染組培苗抑菌效果

將污染嚴重的秋子梨組培苗剪去基部后用5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h后，接種在添加不同濃度“山農一號”Ⅲ型殺菌劑增殖培養基上，濃度分別為0.1%、0.15%、0.2%。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調查各項指標。

1.3?調查指標

經“山農一號”殺菌劑浸泡滅菌后會導致組培苗褐化，褐化的組培苗4～6周后會發出新芽，因此試驗用恢復率表示組培苗恢復正常生長的指標。

主要調查指標有恢復率、增殖倍數、鮮重和株高。

恢復率（%）=恢復生長株數接種株數×100

增殖倍數=增殖后株數接種株數

1.4?數據分析

數據采用EXCEL軟件進行統計和分析。

2?結果與分析

2.1?“山農一號”殺菌劑對不同污染程度秋子梨組培苗的抑菌效果

試驗結果如表1所示，經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡滅菌2h后，組培苗的增殖倍數、鮮重和株高都較對照提高，污染嚴重的分別提高28.5%、27.3%和23.1%;污染較輕的分別提高35.7%、72.7%和100.0%。污染較輕的組培苗恢復率達到100%，污染嚴重的恢復率也能達到77%。說明“山農一號”殺菌劑對污染的秋子梨組培苗有較好的抑菌作用，尤其對污染程度較輕的組培苗有明顯的挽救效果，同時能夠提高增殖倍數，促進組培苗的生長。

2.2?“山農一號”殺菌劑不同滅菌時間對秋子梨污染組培苗抑菌效果

同一濃度下對污染較輕的秋子梨組培苗進行不同滅菌時間處理，結果如表2所示。各處理的組培苗恢復率都較高，達到86%以上，增殖倍數除2.0h外，都達到3.5倍以上，處理時間1.0h組培苗的鮮重最高，處理時間2.0h組培苗的株高最高。其中，經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡1.0h，再接種在含0.1%“山農一號”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養基上，對污染較輕的秋子梨組培苗有顯著的抑菌和挽救作用，并能夠促進組培苗生長。

2.3?不同濃度“山農一號”殺菌劑對秋子梨污染組培苗抑菌效果

將經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h的秋子梨組培苗接種在添加不同濃度的“山農一號”Ⅲ型殺菌劑培養基上，結果見表3。從表中可以看出，隨著處理濃度增加，增殖倍數和鮮重呈下降趨勢。處理濃度為0.15%時，恢復率最高，為88.6%;處理濃度為0.1%時，鮮重和株高最高，分別為1.4g和1.6cm。綜合考慮，經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h后，接種在含0.1%“山農一號”Ⅲ型殺菌劑增殖培養基上，對污染組培苗達到較好的抑菌效果和促進生長的作用。

3?結論與討論

常采用的組培污染防治方法是在培養基中添加各種殺菌劑。殺菌劑的類型主要有抗生素類，如制霉菌素、灰黃霉素、青霉素、慶大霉素等;防腐劑類，如苯甲酸鈉、山梨酸鉀、丙酸鉀等;農用殺菌劑類，如多菌靈、代森錳鋅等;提取物類，如大蒜素、苦參提取物、熏衣草提取物等。盡管都有很好的抑菌效果，但都存在缺點，如不能高壓滅菌，或者只對單一的細菌或真菌起到滅菌的作用等。試驗所用的“山農一號”殺菌劑是一種廣譜生物殺菌劑，不僅可以高壓滅菌，而且對細菌、真菌和混合菌引起的組培污染都能起到抑制作用。試驗結果表明，經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡后，再接種于含“山農一號”Ⅲ型殺菌劑增殖培養基上，對秋子梨污染組培苗有顯著的抑菌作用，能有效地挽救秋子梨污染組培苗，同時增加組培苗鮮重和株高，對促進組培苗的生長起到很好的作用。這與徐程[12]等研究一致。

對污染較輕的秋子梨組培苗經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡1.0h，可以獲得較好的恢復率，且組培苗生長健壯，分化的芽多。污染較重的秋子梨組培苗先經5%“山農一號”Ⅰ型殺菌劑浸泡2.0h后，再接種在含0.1%“山農一號”Ⅲ型殺菌劑增殖培養基上，也能顯著促進組培苗生長，提高增殖倍數。

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（責任編輯?常陽陽）