興凱湖大白魚人工繁殖及胚胎發育研究

楊立軍，李霞，潘發林，楊翼羽，劉永波，綦天華

（長春市水產品質量安全檢測中心，吉林 長春 130033）

興凱湖大白魚（Erythroculter ilishaeformis），又名興凱湖翹嘴鲌，屬鯉形目，鯉科，鲌亞科，鲌屬，是翹嘴鲌中的一個地理種群。興凱湖大白魚體色銀白、肉質細嫩、味道鮮美，有“賽蟹肉”之稱，是中國四大名淡水魚之一，與烏蘇里江的大麻哈魚、綏芬河的三文魚并稱“邊塞三珍。在密山地區興凱湖大白魚依據重量分為一白（0.5～1.0 kg）、二白（1.0～1.5 kg）、三白（≥1.5 kg），市場售價可以達到 200～600 元/kg，經濟價值非常高。為了調整吉林省漁業養殖結構，提高養殖戶的經濟效益，作者于2018年6月10日引進興凱湖大白魚進行繁殖研究，探索興凱湖大白魚在吉林省養殖的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗魚

試驗用親魚是2018年6月從黑龍江農墾震達興凱湖大白魚研究所引進的4 000尾三齡后備親魚，平均體質量為0.25 kg，平均體長為（25.50±2.08）cm，選擇體質健壯、無病無傷的個體。

1.2 親魚運輸

因為興凱湖大白魚鱗片易脫落，出水后容易死亡，故采用帶水過稱，減少對魚的傷害。運輸采用箱式封閉運輸車，備有液氧瓶持續增氧，運輸前每立方米投放潑灑姜一袋，以減少魚種的應激反應。運輸地氣溫16℃，水溫12.9℃，運輸密度為260 kg/m3，運輸距離815km，運輸時間9.5 h；運輸成活率85%以上。

1.3 親魚培育

親魚池為面積4 000 m2的土池，池長80 m，寬50 m，池深 3.0 m，培育池進、排水方便，水源為井水，水質優良，符合國家漁業用水標準。

親魚入池前10 d，親魚池用生石灰進行清塘消毒；親魚的放養密度為400尾/667 m2，同時套養100 g左右的鰱、鳙魚各300尾，鯽魚200尾。在整個培育過程中要求親魚池水深1.3 m以上，溶氧量大于5.0 mg/L，pH值7.5～8.5，透明度大于0.3 m。

親魚池定期檢測水質情況，親魚池水質檢測指標：氨氮、亞硝酸鹽、pH值、溶解氧、總磷、總氮。

大白魚親魚的飼養采用全自動投餌機投喂，每天3次，投喂量約占魚體體質量的3%～5%。飼料為專用浮性配合飼料，蛋白質含量36%。根據季節與水溫適當增減投喂量，一般以飼料在1 h內吃完為宜。興凱湖大白魚的魚病以防為主，防治結合?？赏ㄟ^微生物調節EM菌液1 L/667 m2，每15 d 1次；藥物預防，二氧化氯全池潑灑0.2 mg/L，每15 d 1次；底質調節，底改250 g/667 m2，每15 d 1次。

1.4 魚病防治

水霉?。喊l現時間6月5日，發現部分魚浮在水面，體表有絲絮狀霉菌。主要是運輸過程魚體擦傷，水溫較低引起。治療：聚維酮碘（10%）500 g/667 m2，霉凈300 g/667 m2，全池潑灑，每天1次，連續用藥兩次。治療效果良好，沒有出現死魚，沒有復發。

錨頭鳋：發現時間7月10日，打樣發現魚體有紅色出血點，鏡檢確診為錨頭鳋。治療：錨鳋克星全池潑灑，用量100 g/667 m2，連續2 d，每天1次。二氧化氯片全池潑灑，用量100 g/667 m2，連續2 d，每天1次。治療后再未發現錨頭鳋，也沒發現繼發性感染。

細菌性出血?。喊l現時間8月7日，興凱湖大白魚、白鰱有少量死亡，觀察發現鰓絲、鰭條充血，內臟未發現充血。治療：出敗康全池潑灑，用量500 g/667 m2。每天1次，連續3次。治療后未再出現該病癥。

1.5 越冬管理

親魚采用原池越冬，越冬前使用敵百蟲殺蟲，聚維酮碘消毒，5 d后注水，使水深達到2.5 m。越冬期間及時掃雪，定期測溶氧。

1.6 人工繁殖

2019年4月10日挑選體格健壯的親魚210尾進行強化培育，培育池1 300 m2，每天投喂小雜魚、煮熟的豆類1次，配合飼料3次。投喂量視攝食情況適當調整。培育期間定期適量水流刺激。經過兩個月的培育后解剖雌魚，成熟良好，計算相對懷卵量為 70～80 粒/g。

6月20日（水溫25℃左右），挑選親魚進行催產，雌魚挑選腹部膨大而柔軟，卵巢輪廓明顯，生殖孔微紅的；雄魚手摸身體有明顯的粗糙感，輕壓腹部有白色精液流出，遇水即散。

催產藥物由寧波第二激素廠生產，分2次注射，2針間隔6 h。第一針為絨毛膜促性腺激素（HCG）500 I.U./kg于上午10：30注射完畢，第二針為絨毛膜促性腺激素（HCG）1100 I.U./kg+促黃體素釋放激素類似物（LRH-A3）200 ug/kg于下午 16：30注射完畢。雄魚的注射計量減半。注射部位為胸鰭基部。親魚注射完第二針催產劑后，按雌雄1.0∶1.1比例放入水泥產卵池（8 m×4 m×1.5 m）中，并進行微流水刺激自然受精。親魚于23：30左右開始產卵，約2個小時結束（水溫24.5～26.8℃）。

待親魚完全產卵后，在該產卵池的出水口處人工收集受精卵，移入孵化池微流水（流速為0.2 m/s）孵化。

受精卵的孵化密度約平均 7萬～10萬粒/m3，孵化時避免陽光直射；孵化用水要求水質清新，孵化水溫為 24.5～27℃，溶氧量為 5.5～6.5 mg/L，pH值為7.8～8.2，孵化時由專人值班，及時剔除壞卵。受精卵經20 h孵化后破膜，剛孵出的稚魚體長約（4.75±0.35）mm。

1.7 有效積溫計算

有效積溫 K=N·T（℃·h），N 為發育歷期，即胚胎發育周期所需時間（h），T為胚胎發育期間的平均溫度（℃）。

1.8 胚胎發育取樣與觀察方法

2018年6月28—29日取部分興凱湖翹嘴鲌受精卵置于培養皿中孵化，每隔30 min換1次水。水溫控制在26～27℃之間。另取100粒發育正常的受精卵分放在5只培養皿中，并分別置于雙筒解剖鏡下觀察，從精卵結合開始計時，從25 min受精卵形成到胚胎發育的20 h內共采樣23次（表1），觀察時記錄各發育時期的外部形態結構，并用奧林帕斯顯微鏡對樣本進行觀察拍攝各發育階段胚胎的外部形態，記錄水溫、pH值等因子。

2 結果與分析

2.1 受精卵特點

興凱湖大白魚的成熟卵呈圓球形，淡黃綠色或青灰色，受精卵為半浮性非黏性卵。而太湖大白魚的成熟卵則為黃色、墨綠色或青灰色，受精卵為黏性沉性卵。興凱湖大白魚和太湖大白魚屬于不同地理種群、但同屬于鯉科不同亞科魚類。以上差異產生可能是與物種自身遺傳演化產生差異有關，也可能是地域分布引起的。還有可能是人工養殖環境下，餌料來源、成分不同，水體的理化因子不同引起的。

2.2 胚胎發育時序

興凱湖翹嘴鲌的卵為端黃卵，其卵裂方式為盤狀卵裂（均等分裂型），受精后原生質集中在動物極，卵黃集中于植物極。根據其受精卵發育過程的形態變化和特點，可將其胚胎發育劃分為以下13個時期共計23個階段，詳見表1。由表1可見，在水溫為24.5～26.8℃之間時，受精25 min開始第一次卵裂，較其他學者研究的興凱湖大白魚卵裂時間延后5 min，比太湖大白魚提前了5 min，相差不是很大。在出膜期方面，則有很大不同，同是興凱湖大白魚，該試驗中胚胎出膜期為20 h，其他學者發現出膜期為22 h 30 min，太湖大白魚則為25 h 40 min，而在有效積溫方面則差距更大。該研究中，興凱湖大白魚的有效積溫為486.98℃·h，較前兩者的603.00℃·h和619.82℃·h相比降幅很大。通過對比可知，胚胎發育時間及有效積溫除了與大白魚所屬種群有關外，還受自身所處地理位置、胚胎發育溫度影響較大。

在胚胎發育時序方面，該研究中的興凱湖大白魚為13個時期，太湖大白魚為19期，其他學者的興凱湖大白魚為23期。從整個發育順序上看，三者時期名稱雖有少量出入，但總體差異不大。雖各有不同但也基本上都符合鲌亞科魚類胚胎發育的一般規律。造成差異的主要原因可能是因為各學者劃分發育時期所參考的文獻不同或者不同水體中大白魚的群體有所差異。

表1 興凱湖大白魚的胚胎發育時序（水溫24.5～26.8℃）

序號 發育時期 距受精時間/（h：min）胚胎發育過程中的外部形態特征平均水溫/℃有效積溫/（℃·h）圖版16 胚孔封閉期 10：15 17 眼基出現期 10：45 18 眼囊期 11：30 19 尾芽期 12：10隨著胚層進一步下包，外露的卵黃越來越小，胚層完全包圍卵黃囊，卵黃變為不規則圓形，神經板中線略下凹，在卵黃栓末端形成圓形有凹陷的胚孔，胚孔逐漸變小但胚孔位置仍留有凹陷，直至封閉。胚體頭部前端抬起，略高于尾部，頭尾更接近，胚體前端隆起，逐步發育為前腦、中腦和后腦原基。后端薄而寬，為尾部的發育原基。在頭部中央兩側，有一對腎形的突起，即眼的原基。有兩對肌節出現。隨著頭尾的延伸，胚體的頭尾更接近，卵黃囊更接近圓形，眼囊清晰，胚體前端兩側呈長橢圓形，同時清楚觀察到肌節已出現12～14對。胚體逐漸展長，胚體后部腹面出現尾芽，尾芽開始游離出卵黃囊，尾芽部有一層膜狀結構把胚體與卵黃囊隔開，眼囊逐漸變圓。24.5 12.25 圖版Ⅱ-1 24.6 12.30 圖版Ⅱ-2 24.6 18.45 圖版Ⅱ-3 25.2 16.80 圖版Ⅱ-4 20 晶體出現期 14：30 胚體繼續延長，胚體尾部的邊緣出現皮褶。尾部離開卵黃囊，出現尾鰭，脊索非常清晰，眼囊內部為眼杯。 25.2 33.60 圖版Ⅱ-5 21 心臟出現期 17：40 22 出膜前期 19：10 23 出膜期 20：00肌肉開始間歇性的微縮，出現肌肉效應。在脊索前，卵黃囊前上方，眼下后方腹面形成心臟，腔內有串狀的細胞團，為心臟原基，且開始跳動，胚胎出現血液循環。胚體延展。彎曲的尾部已與軀干平行，頭部彎曲向腹部。卵黃囊前部為球形，后補延長呈棒狀。胚胎在卵膜內不停地擺動伸縮，并在卵膜內做旋轉運動，同時尾部和頭部不停地頂撞卵膜。大部分尾部先出膜，也有部分頭部先出膜，剛剛出膜的仔魚透明無色，具有泄殖腔，體長為（4.8±0.4）mm，卵黃囊在魚體下方呈現前粗后細的椎體，形如胡蘿卜狀。此時仔魚鰭發育不完全，只能間歇地垂直游動。26.2 82.97 圖版Ⅱ-6 25.7 38.55 圖版Ⅱ-7 25.3 21.08 圖版Ⅱ-8