不同生境、不同生長年續斷的川續斷皂苷Ⅵ的含量

熊厚溪，徐 榮，石海霞，丁 鈴

(畢節醫學高等?？茖W校，貴州 畢節 551700)

續斷為川續斷科草本植物川續斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根，味苦、辛，微溫，歸肝、腎經，具有補肝腎、強筋骨、續折傷、止崩漏的功效，常用于治療肝腎不足、腰膝酸軟、風濕痹痛、跌撲損傷、崩漏等[1]。續斷為川產道地藥材之一，貴州主產于畢節、興義、安順、貴陽、遵義等地。主要生于草叢、路旁、溝邊、林緣礦地等潮濕處，野生資源豐富[2]。近10年，市場需求量逐漸增加，野生資源日漸減少。但就目前而言，續斷的種植面積較少，研究基礎薄弱，來源主要依靠于野生資源。目前，有關續斷的研究主要集中在炮制、化學成分、藥理作用等方面[3-12]，關于不同生境和不同生長年限的相關研究較少。筆者通過對續斷的不同生境、不同生長年限進行采樣，測定續斷根中川續斷皂苷Ⅵ含量，綜合分析續斷的適宜生長環境和采收時間，為續斷資源的合理種植和采收提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣方設置與樣品采集

1.1.1 野生樣品 在前期完成續斷群落調查基礎上，2018年8月15日于貴州織金縣少普鄉喇叭河村(位于東經105°35′45.73″～105°38′5″，北緯26°33′25″～26°34′15″，海拔1 670～1 840 m)的自然分布區設定樣方，每個樣方面積2～4 m2，通過記錄樣方內的續斷植株、多度、蓋度等，評估重要值劃分樣方中續斷的生境，采集樣方中的全部續斷植株，帶回實驗室。

1.1.2 栽培樣品 選取畢節市遠程民族研究所續斷種植基地作為研究對象，基地位于貴州省七星關區朱昌鎮(位于東經105°18′57.18″，北緯27°10′37.48″，海拔1 614 m)隨機挖取一年生、二年生、多年生續斷植株各5株，帶回實驗室。

1.1.3 鑒定 所采樣品均經過畢節醫學高等?？茖W校中藥教研室熊厚溪鑒定為川續斷科川續斷(DipsacusasperWall.ex Henry)的干燥根。將所有續斷樣本先清洗干凈，用烘箱(約50℃)烘至半干，再發汗，當藥材斷面變綠后，取出，烘干，再粉碎，用于續斷藥材中川續斷皂苷Ⅵ的含量測定。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 高效液相色譜儀(LC-20AD，日本島津)、電子分析天平(EL104，梅特勒-托利多儀器有限公司)、超聲波清洗器(SK8210HP，上?？茖С晝x器有限公司)、電熱鼓風干燥箱(101-1AB，天津市泰斯特儀器有限公司)等。

1.2.2 試劑 甲醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)、乙腈(色譜純，天津市大茂化學試劑廠)、川續斷皂苷Ⅵ對照品(批號：111685-201506，中國食品藥品檢定研究院)。

1.3 測定方法

參照2015版《中國藥典》一部續斷藥材“含量測定”項下的方法進行測定[1]。

1.3.1 色譜條件與適應性 色譜柱：C18(5 μm 4.6×250 mm S/N 4K9705-07)。流動相：流動相A，水；流動相B，乙腈；乙腈與水比例為30∶70。檢測條件：檢測波長212 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min。

1.3.2 對照品溶液的制備 取適量川續斷皂苷Ⅵ對照品，精密稱定，置容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成含川續斷皂苷Ⅵ0.153 7 mg/mL的對照品溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備 取續斷粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液。

1.3.4 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定，根據外標一點法計算各組分含量。測得續斷樣品共計40份。將各樣品峰面積帶入下式計算，得樣品川續斷皂苷Ⅵ含量。

W=AXCRX×2/ARW×1 000×100%

式中，W為川續斷皂苷Ⅵ含量；Ax為供試品峰面積；CR為對照品濃度；AR為對照品峰面積；X為稀釋因數，W為樣品重。

1.4 數據處理

運用SPSS 22.0軟件對不同生境、不同生長年限續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量進行單因素方差分析。

2 結果與分析

2.1 續斷群落生境類型

通過對樣方中喬木、灌木、草本植物的數量進行評估，將續斷生境劃分為5種：喬木林生境、灌木叢生境、雜草叢生境、林緣礦地生境、退耕地。喬木林生境是以喬木為主的植被類型，植株高大，群落郁閉度大，土層厚、濕潤，樣方中續斷生長茂盛，葉片大。灌木林生境是以灌木為主體的植被類型，植株一般高在5 m以下。雜草叢生境一般灌木較少，多見草本類植物，一般以禾本科、毛茛科、玄參科及蕨類植物等為主。林緣礦地生境中植株多生長在路邊、田坎等地，一般土層薄、貧瘠，續斷葉片枯綠、小。退耕地前幾年以種植農作物為主，現土地荒廢，生境中也有續斷植株生長，多伴生草本類植株，一般以菊科植物為主。

2.2 不同生境下續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量

由表1可見，川續斷皂苷Ⅵ含量為0.352 3%～1.1651%，平均為0.733 9%。其中，川續斷皂苷Ⅵ在林緣礦地生境中的含量最高，為1.165 1%；在退耕地生境中的含量最低，僅0.352 3%；退耕地和喬木林生境中含量無顯著差異，雜草叢和喬木林、灌木叢生境中無顯著差異。

表1 不同生境下續斷中川續斷皂苷Ⅵ的多重比較

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同。2.3不同生長年限續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量

由表2可見，二年生續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量最高，為1.408 1%；其次為多年生續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量，為1.1694%；一年生續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量最低，僅0.640 9%，而二年生和多年生續斷根中川續斷皂苷Ⅵ的含量無顯著差異。

表2 不同年限續斷中川續斷皂苷Ⅵ的多重比較

3 結論與討論

試驗探討了不同生境環境下續斷植株中川續斷皂苷Ⅵ含量分布情況，同時探討了不同生長年限的續斷植株中川續斷皂苷Ⅵ的含量變化。在5種生境下，續斷植株在多個生境中的川續斷皂苷Ⅵ含量有明顯差異，林緣礦地生境>灌木叢生境>雜草叢生境>喬木林生境>退耕地。其中在林緣礦地生境和退耕地生境中相差3倍，表明川續斷皂苷Ⅵ在續斷植株生境中具有選擇性。林緣礦地生境具有很好的光照，可以為續斷葉片提供很好的光合作用，同時林緣礦地續斷植株生長環境中土層薄、土壤貧瘠，續斷植株只有不斷制造次數代謝產物來對抗惡劣的環境。

從續斷生長年限中川續斷皂苷Ⅵ結果分析來看，一年生與兩年以上植株具有顯著性差異，而川續斷皂苷Ⅵ作為續斷的次生代謝產物，受生長年限影響較大。一年生續斷植株未抽薹，地下部分生長較緩慢，次生代謝產物累計較少；二年生續斷植株中川續斷皂苷Ⅵ的含量顯著高于一年生植株，而與三年及以上生植株無顯著差異。故建議種植續斷藥材采收時間以兩年以上為宜，并結合產量進行綜合考慮。