防治仔豬腹瀉的中藥制劑制備技術與應用

錢 峰

（江蘇省泰興市黃橋鎮畜牧獸醫站，江蘇泰興 225417）

仔豬腹瀉在獸醫臨床上屬常見病、多發病，是引起仔豬死亡的主要原因之一。

近十年來，本地區的仔豬腹瀉病普遍發生，且呈地方流行，廣大獸醫同仁一直與其作出艱苦卓絕的斗爭；然而隨著品種的不斷改良、飼養方式的日趨改進、耐藥菌株的不斷增多等，該病的病死率一直居高不下且呈逐年上升的態勢，防控形勢愈來愈嚴峻。

本病的發病范圍不斷增廣、發病率不斷升高、病死率逐漸上升，已逐漸由條件性致病變成一種新的背景性常發病和多發病。隨著抗菌藥物的不斷應用，細菌中的耐藥菌株數量也在不斷的增加，目前，耐藥性的問題已非常嚴重，應用常規藥物和常規方法防治豬大腸桿菌病的難度越來越大。

引起豬大腸桿菌病的大腸桿菌經典的血清型主要是K88、K99和987P三種血清型。但由于大腸桿菌的腸毒素才是大腸桿菌引起人類和動物腹瀉的最主要因素，腸毒素質粒和耐藥性質粒能經結合配對傳遞給其他腸道細菌，使這些細菌成為能產腸毒素并具有耐藥性的致病菌，也就是說，腸毒素質粒和耐藥性質能經結合配對后，便可傳遞給其他菌毛血清型的大腸桿菌甚至傳遞給其他非大腸桿菌腸道細菌?？梢哉f，如今的病原性大腸桿菌的血清型越來越復雜，不同地區有不同的血清型甚至不同豬場都有可能有不同血清型。因此，大腸桿菌病已經成為危害養豬業的重要疾病之一。

1 臨床癥狀、病理變化及發病機理

1.1 臨床癥狀

病豬精神沉郁、消瘦，被毛粗亂，嚴重拉稀、喜飲水，尤其喜舔食糞便污水；糞便含有未消化的食糜，呈灰色漿狀、發粘帶有腥臭味。體溫正常，尸體外表蒼白、消瘦、脫水。腸胃粘膜充血，內含多量液體、氣體。眼角有膿性分泌物。病初表現便秘，后腹瀉呈淡綠色，有惡臭味，一周后豬耳末端、頸部出現紫斑。

臨床上以排灰白色粥樣稀便為主要特征，發病率高而致死率低。病原尚不完全肯定。豬腸道菌群失調、大腸桿菌過量繁殖是本病的重要病因。江蘇省農業科學院實驗證實豬輪狀病毒是仔豬白痢的病因之一。氣候變化、飼養管理不當是本病發生的誘因。近年來本病又有新的流行特點，首先發病日齡不斷增加，據各地反饋情況40～50kg的豬都有水腫病的發生；其次吃的越多、長的越壯的豬發病率和死亡率越高。從病豬分離到的大腸桿菌有溶血性或非溶血性兩類，其 O 抗原型因不同地域和時期而有變化。但在同一地點的同一流行中，常限于 1～2 個型。多數病原菌株都有菌毛吸著因子并產生腸毒素，已知吸著因子（也稱粘著因子）有K88、K99、987P、F41 四種，且各具獨特的抗原性。腸毒素以熱敏腸毒素 LT 為主。這是大腸桿菌引起仔豬黃痢的兩個主要原因素。神精癥狀：盲目行走或轉圈，共濟失調，口吐白沫，叫聲嘶啞，進而倒地抽搐，四肢呈游泳狀，逐漸發生后軀麻痹，臥地不起，在昏迷狀態中死亡。體溫在病初可能升高，很快降至常溫或偏低。水腫眼臉或結膜及其它部位水腫，病程數小時至 1～2潛伏期短，一般在 24h左右，長的也僅有1～3d，個別病例到7日齡左右發病。窩內發生第一頭病豬，一兩天內同窩豬相繼發病。最初為突然腹瀉，排出稀薄如水樣糞便，黃至灰黃色，混有小氣泡并帶腥臭，隨后腹瀉愈加嚴重，數分鐘即瀉1次。病豬口渴、脫水，但無嘔吐現象，最后昏迷死亡。

1.2 病理變化

尸體脫水表現皮服干燥、皺縮，口腔粘膜蒼白。最顯著的病變為腸道的急性卡他性炎癥，其中以十二指腸最為嚴重。全身多處主織水腫，特別是胃壁粘膜水腫是本病的特征。胃壁粘膜水腫多見于胃大彎和賁門部。水腫發生在胃的肌肉和粘膜層間，切面流出無色或混有血液而呈茶色的滲出液，或呈膠凍狀。水腫部分的厚度不一致，薄者僅能察見，厚者可達3cm左右，面積3.3cm2至9.9～13.2cm2。大腸腸系膜水腫，結腸腸系膜膠凍狀水腫亦很常見。此外，大腸壁、全身淋巴結、眼瞼和頭頸部皮下亦有不同程度的水腫。除了水腫的病變外，胃底和小腸粘膜、淋巴結等有不同程度的充血。心包、胸腔和腹腔有程度不等的積液。剖檢常有腸炎和敗血癥，有的無明顯病理變化。

共剖檢15kg左右病死豬2頭，病變基本一致，均見脾臟腫大，紫藍色，腸系膜淋巴結腫大，切面呈灰白色腦髓樣；大腸的后段黏膜上有棕褐色的大小不等的壞死性假膜覆蓋，撕開假膜，可見潰瘍；另有一只肝上可見散布的點狀壞死灶。其它臟器未見異常。

1.3 發病機理

現代的研究揭示了大腸桿菌致病的本質是由于多種毒力因子引起的不同的病理過程。

（1）內毒素：大腸桿菌內毒素是大腸桿菌外膜中含有的脂多糖，當菌體崩解時被釋放出來，其中的類脂A成份具有內毒素的生物學功能，是一種毒力因子，在敗血癥中作用尢為明顯。

（2）外毒素：大腸桿菌外毒素分兩大類，第一類為不耐熱腸毒素（LT）和耐熱腸毒素（ST）。LT有抗原性，分子量大，60℃經10min破壞，可激活腸毛細血管上皮細胞的腺苷環化酶。增加環腺苷酸（cAMP）產生，使腸粘膜細胞分泌亢進，發生腹瀉和脫水；而ST可激活回腸上皮細胞刷絨毛上的顆粒性的鳥苷環化酶，增加cGMP產生，同樣引起分泌性腹瀉。

（3）細胞毒素：SLT有3型：SLT-ⅠSLT-Ⅱ及SLT-Ⅳ，目前研究發現SLT-Ⅱ使豬產生水腫病的臨床癥狀和病理變化。除此之外據有致病性的因子還有定植因子、直接侵襲性、大腸桿菌素。

臨床上對該病的治療通常使用抗生素，而常見病原菌耐藥菌的傳播又使很多抗生素在治療相關性疾病時效果不明顯，常引發人們過量用藥的錯誤治療行為，致使細菌耐藥性增強或變異菌株的大量出現而加重了病原耐藥菌的傳播，對畜牧業生產造成嚴重的經濟損失以及嚴重威脅著人們的身體健康。因此研制中草藥有效組方防治該病并推廣應用勢在必行。

2 具體研究內容和重點解決的關鍵問題

中草藥制劑具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調節和提高生產性能等多方面作用之優勢能與抗生素媲美，在畜牧業中作為抗生素的替代品，在營養、保健、提高免疫力、抗應激、抗氧化、和改善畜產品品質等多方面的應用已越來越受到人們的重視。目前最大程度地減少抗生素的耐藥性已成為保證抗生素能夠在人和動物疾病防治方面長期有效使用的首要問題。

2.1 主要研究內容：

（1）研發實施防治仔豬腹瀉病的中藥制劑，焦山楂20g、焦六曲20g、牡蠣30g、半支蓮30g、垂盆草30g、雞骨草10g、黃芪50g、白芍30g、熟地30g、甘草15g、茵陳20g、薏苡仁15g、陳皮20g，篩選、確定了該病的中藥組方，利用該組方粉劑對小白鼠腹瀉模型進行治療性試驗。

（2）應用豬致病性大腸桿菌四聯苗免疫蛋雞，制備成卵黃免疫球蛋白粉劑。用于仔豬腹瀉病的緊急治療。

（3）通過動物試驗，確定中藥粉與卵黃免疫球蛋白的最佳配比，制備了中草藥免疫球蛋白復合制劑與口服水劑。

（4）通過不同配比中藥粉與免疫球蛋白復合制劑體外抑菌試驗，確定了免疫球蛋白中藥復合制劑的生產工藝與技術參數。

2.2 關鍵技術問題：

（1）中藥提取工藝、特異性免疫球蛋白及其復合制劑產品配方與制備方法；

（2）中藥免疫球蛋白制備技術與生產工藝。

3 研究試驗方法、技術路線以及工藝流程

3.1 研究試驗方法

（1）篩選、確定治療仔豬腹瀉病的中藥組方，利用超聲波技術，提取板藍根等中藥中的有效成分，合并濾液，濃縮至原液濃度為1g/mL，采用間隙滅菌法，經過真空冷凍干燥機，對中藥成分進行粉碎、混合、攪拌、濃縮、提取，制備了仔豬腹瀉病中藥粉劑。樣品配比分別為1：1，1：0.8。

（2）應用豬致病性大腸桿菌K88，K99，987P，F41疫苗免疫蛋雞，實現主動免疫與被動免疫相結合，3次免疫后，收集高免蛋，分離出卵黃，通過鹽析、沉淀、超濾等方法制備高純度的卵黃免疫球蛋白，采用平板式膜超濾技術與真空冷凍干燥工藝對卵黃中的免疫球蛋白進行分離、純化，制備成免疫球蛋白粉劑。

（3）通過動物試驗，確定中藥粉與卵黃免疫球蛋白的最佳配比，制備中草藥免疫球蛋白復合制劑與口服水劑。

3.2 技術路線及工藝流程

4 制備技術的特色與創新之處

4.1 技術特色

首次利用超聲波技術結合水稀釋法提取豬抗大腸桿菌病特異性高免免疫球蛋白，并通過動物試驗確定了最佳配比，利用超聲波提取板藍根等中藥中的有效成分后與特異性高免免疫球蛋白組合，制成中藥免疫球蛋白不同制劑。

4.2 創新之處

（1）通過對生產條件和技術水平的進一步優化，確定了免疫球蛋白中藥復合制劑的生產工藝與技術參數，擴大使用范圍，提高生產效益。

（2）通過與相關高校、科研院所、企業聯合研制兩種以上制劑工藝，研制工藝穩定、質量可控的新型制劑。是一種創新之舉。

（3）加深與養殖企業的交流與合作，擴大企業應用范圍，驗證2種藥物制劑的臨床使用情況，為新藥申報提供詳實可靠的理論據。

（4）以鄉鎮獸醫站為依托，利用科普叢書、用戶手冊、學術論文、專利技術等向養殖戶傳遞科研動態和相關信息，為產品推廣作準備。

4.3 該復合制劑對仔豬腹瀉病的治愈率提高到95%以上；抗病能力顯著提高，促進生長3%以上。與傳統產品相比，達到節材20%以上，達到節能15%以上。（表1）

5 小結與討論

本技術方案打破了傳統的以痢治痢的治療方法，通過提高脾胃的運化功能達到燥濕、健脾、保肝、潤腸的功能，對腸粘膜有收斂和吸附作用，從而有效地保護消化道粘膜減少細菌毒素及食物異常發酵的產物，使炎癥得以緩解，達到清熱解毒、開胃消積、祛濕健脾、保肝止瀉的目的。充分體現了中醫藥的整體觀念和優勢，使藥效和功能更為全面而標本兼治，從而拓開了中醫藥辯癥施治的具體內容和應用范圍。

表1 本產品與國內外同類產品的比較

仔豬消化道未發育成熟，消化機能不健全、消化腺不發達，體溫調節及應急能力差；飼養管理粗放、圈舍骯臟潮濕導致仔豬消化機能紊亂是引發本病的主要原因。病豬喜舔食糞便污水，致使病原體在整個消化道形成惡性循環因此必須清理胃腸，增強胃腸蠕動，改善消化道環境。

中藥在我國資源豐富，應用歷史悠久，價格低廉，并具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調節和提高生產性能等多方面作用，且毒副作用小，在治療仔豬腹瀉方面，以其多方面作用之優勢能與抗生素媲美，它一般不受大腸桿菌血清型的影響，不存在耐藥性問題。在畜牧業生產中作為抗生素的替代品，在營養、保健、提高免疫力、抗應激、抗氧化和改善畜產品品質等多方面的應用已越來越受到人們的重視。而傳統的對仔豬進行抓捕注射，不僅勞動強度大，還易對病豬造成各種應激反應；中藥喂服投藥簡便省工、安全實惠、療程短、療效高、保護率高、克服了打針灌藥的困難，易于在生產中推廣。