紫外分光光度法測定丁香油滴丸丁香酚含量的方法學研究

周寶珠 ，余小姚 ，鄺翠瓊 ，莫玉芳 ，劉 露，李海儀，郭嘉亮*

（1.佛山科學技術學院醫藥工程學院，廣東佛山528000；2.佛山市第一人民醫院藥學部，廣東佛山528000）

目前臨床上針對冠心病常用西藥有硝酸甘油、普萘洛爾及他汀類等藥物，既可單獨用藥又可聯合用藥。這些西藥副作用較大，如他汀類藥物會引起消化系統的不良反應，肝和腎功能衰竭，最嚴重是橫紋肌溶解癥［1］。復方丹參滴丸作為知名中成藥廣泛用于治療冠心病等心血管系統疾病，其臨床報道有個別患者服用后胃腸道不良反應［2］。臨床上可供治療冠心病中成藥多為口服制劑，類似復方丹參滴丸可快速釋放起效的新型中藥制劑較少。丁香為桃金娘科植物丁香樹干燥花蕾，水蒸汽蒸餾丁香花蕾獲得揮發油叫丁香油，其藥物活性成分主要是丁香酚［3］。丁香酚具有活血鎮痛，其抗缺氧可緩解冠心病的心肌缺血缺氧癥狀［4］，因此丁香油對冠心病相關癥狀具有較好的療效作用。將丁香油制備成滴丸，不僅將液體丁香油固體化，而且增加有效成分丁香酚的藥物穩定性，具有臨床使用方便等劑型優勢。已有HPLC、GC、LC-MS/MS等多種測定方法［5-7］用于測定丁香酚的含量，均對儀器設備要求較高。本研究采用紫外分光光度計（UV）法測定丁香油滴丸中丁香酚含量，并進行方法學考察。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

丁香油（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20161014，≥85.0%）；丁香酚對照品（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20180622，≥98.5%）；無水乙醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司，批號：2010220），80%乙醇（由無水乙醇制備）。

1.2 儀器

紫外可見光分光光度計（上海儀電分析儀器有限公司，720N型）；電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，AL204型）。

2 方法與結果

2.1 測定波長的優選

精密稱取1.009 3 g丁香酚為對照品，置于100 mL容量瓶中，用80%乙醇稀釋，定容后搖勻。精密吸取10 L至100 mL容量瓶，用80%乙醇稀釋至刻度。搖勻制成1.009 3 mg/mL丁香酚對照品溶液。移取1 mL丁香酚對照品溶液于50 mL容量瓶中，用80%乙醇稀釋至刻度，搖勻制成20.19 μg/mL的丁香酚對照品溶液。以80%乙醇為空白對照，使用UV法以80%乙醇標定，在200～400 nm的波長范圍內進行掃描，其結果如圖1所示。

由圖1可知，210、228 nm處的吸光度高，考慮由于末端吸收等因素干擾，因此選擇280 nm為測定波長。

圖1 丁香酚溶液在200～400 nm紫外掃描吸光圖譜

2.2 制備標準曲線

精密稱取1.009 3 g丁香酚對照品于潔凈干燥的小燒杯中，加入80%乙醇（小于100 mL）溶解后轉移至100 mL容量瓶中（加80%乙醇至刻度搖勻）配成原溶液。精密移取原溶液10 mL至另一個100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀釋至刻度，搖勻制成濃度為1.009 3 mg/mL的丁香酚對照品溶液。精密吸取液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL分別置于100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀釋至刻度。制成濃度分別為 15.14、20.19、25.23、30.28、35.33、40.37、45.42 μg/mL 的一系列對照品溶液。以 80%乙醇為空白對照液，在280 nm波長［8］處測定吸光度A，平行測3次，求得平均吸光度A，其結果如表1所示。

表1 丁香酚對照品溶液各濃度吸光度結果

以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，結果如圖2所示。由圖2可知，丁香酚對照品溶液在15.14～46.42 μg/mL范圍內線性關系較好。

圖2 丁香酚的標準曲線

2.3 精密度試驗

取20.19、30.28l、40.37 μg/mL 3個濃度的對照品溶液，以80%乙醇為空白對照，在280 nm波長處測定吸光度A，平行測5次，求平均值及相對標準差RSD［9］，其結果如表2所示。由表2可知，3個濃度RSD值都很小，表明采用UV法測試丁香酚吸光度的含量精密度良好。

表2 精密度試驗結果

2.4 穩定性試驗

取 35.33 μg/mL 丁香酚對照品濃度 5 份，于 0、2、4、6、8 h［9-10］時測定吸光度 A，并求出相對標準差RSD，結果如表3所示。由表3可知，RSD值為0.16%，說明UV法測試丁香酚含量穩定性好。

表3 穩定性試驗結果

2.5 供試品含量計算

隨機從最優處方制備的丁香油滴丸中選取供試品，每份20粒滴丸，共取6份。用80%乙醇溶解后，定容至50 mL并過濾。取續濾液2 mL置25 mL容量瓶中，稀釋定容至刻度。以80%乙醇為空白對照，分別測定結果如表4所示。表4結果表明該方法重復性良好。

表4 丁香油滴丸中丁香酚含量測定結果

2.6 加樣回收率試驗

取供試品制備得過濾原液6份，分別將2 mL濾液精確吸取到25 mL容量瓶中。加入丁香酚對照物質0.5 mL，加入80%乙醇至刻度。用80%乙醇作為空白對照，在280 nm波長下測定樣品的吸光度A，并計算回收率、平均回收率和RSD值?；厥章剩?）=（實測量-已測樣品含量）/加入對照品的量×100%［16］，其結果如表5所示。由表5可知，加樣回收率較好。

表5 加樣回收率

3 討論

本實驗采用UV法測定丁香油滴丸中丁香酚含量，測定時需注意：1）選擇恰當的對照品濃度，且吸光度A在0.2～0.8范圍且線性關系良好的對照品溶液作標準曲線。2）進行相關方法學驗證，如線性、精密度、穩定性和回收率等考察。3）有效成分丁香酚由于易揮發，藥液表面濃度可能相對比較大。為了確保測定吸光度準確性，在UV法測試藥液濃度過程中應在測試前搖勻，減少誤差。

本研究利用UV法測定丁香油滴丸中丁香酚含量，操作簡單，方法可靠，其精密度、穩定性、重復性、加樣回收率等均較為理想。對丁香油滴丸中有效成分丁香酚進行有效質量控制，為下一步丁香油滴丸的藥理藥效實驗奠定了較好基礎。