彩色多普勒超聲聯合外周血miR-195水平診斷下肢深靜脈血栓的價值

楊壽強，張 麗，張 淵，朱一成

上海健康醫學院附屬浦東新區人民醫院超聲科，上海 201299

深靜脈血栓是臨床常見疾病，常見于下肢，而上肢程度較小。深靜脈血栓易感因素包括年齡增長、妊娠、活動性癌癥、固定化、近期手術、肥胖、吸煙、口服避孕藥等藥物[1]?？傮w發病率每10萬人中約有100例深靜脈血栓。血栓從深靜脈中移出時易發生肺栓塞，其病死率可能超過15%。因此，快速準確地診斷深靜脈血栓對及時治療并防止并發癥發生具有一定臨床意義。診斷深靜脈血栓的影像學“金標準”是靜脈造影，但其具有侵入性，且不能重復檢查的缺點。而深靜脈血栓的彩色多普勒超聲(CDFI)檢查是一種無創方法，不涉及電離輻射及造影劑的使用，具有很高的辨別度，特別是對于近端靜脈的深靜脈血栓[2]。但對周圍深靜脈血栓的確診率欠佳，對急性期患者及肥胖、下肢水腫的患者，獲得圖像的難度較大。有研究顯示，現有的分子生物學技術在早期診斷深靜脈血栓具有較好的價值，且微小RNA(簡稱miR)自身對深靜脈血栓具有一定的促進作用，參與轉錄后基因調控，對機體的穩態具有一定的作用[3]。有研究顯示，miR-195對細胞侵襲和血管小管形成具有抑制作用[4]。且靜脈血無創、易得，在臨床的廣泛應用。因此，本研究重點分析CDFI聯合血清miR-195水平診斷下肢深靜脈血栓的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1月至2019年1月在該院接受檢查的疑是下肢深靜脈血栓的患者241例為觀察組，其中男151例，女90例； 年齡34～76歲，平均(54.37±12.18)歲?；贾鹤髠?21例，右側120例；所有患者檢查前均告知并簽署知情同意書，且本研究經本院倫理委員會批準。納入標準：所有患者均有下肢深靜脈血栓形成的臨床表現，均進行了下肢靜脈造影確診。排除標準：血液系統、內分泌系統、自身免疫系統、重度感染性疾??；造影劑過敏；已發生肺栓塞。選擇同期體檢健康志愿者50例為對照組，其中男 31例，女性19例；年齡34～75歲，平均(54.27±12.08)歲。兩組研究對象的性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2治療方法 采用尿激酶進行治療，速率為4萬U/h，隨后50～100萬U/次；低分子肝素皮下注射，約5 000 U，每隔12 h注射1次，連續7 d；華法林口服，1～3 d 3.0～4.0 mg，隨后2.5～5.0 mg，連續服用6個月。

1.3檢測方法

1.3.1CDFI檢測 選擇ACUSON Sequoia512 CDFI診斷儀(德國西門子公司)，探頭頻率5.0～7.5 MHz?；贾p度外旋外展并暴露，掃查股總靜脈、股淺靜脈、腘靜脈、脛前靜脈、脛后靜脈、腓靜脈及肌間靜脈。探頭聲束和血流方向與血管軸向夾角保持小于60°，檢測下肢深靜脈血栓發生的部位、血栓的回聲和血流充盈情況。

1.3.2實時熒光定量PCR試驗 患者入院后，采集外周靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝，磷酸緩沖鹽溶液等體積稀釋，加Ficoll-Paque人淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞，提取總RNA，反轉錄生成cDNA后，加入BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix等進行PCR擴增。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內參，采用2-△△Ct法進行結果分析。反應條件：95 ℃ 2 min預變性，95 ℃ 15 s變性，60 ℃ 30 s退火延伸，72 ℃延伸30 s，共40個循環。各待測基因引物如下：miR-195上游引物為5′-AGC TTC CCT GGC TCT AGC A-3′，下游引物為5′-CTG GAG CAG CAC AGC CAA TA-3′，產物大小為76 bp；內參GAPDH上游引物為5′-GAC AGT CAG CCG CAT CTT CT-3′，下游引物為5′-GCG CCC AAT ACG ACC AAA TC-3′，產物大小為228 bp。

2 結 果

2.1兩組外周血miR-195水平比較 與對照組比較，治療前觀察組外周血miR-195水平明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05)。治療后，觀察組外周血miR-195水平高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組外周血miR-195水平比較

2.2CDFI檢查結果 CDFI檢查下肢深靜脈血栓的靈敏度為82.99%(200/241)，特異度為 96%(48/50)，準確度為 85.22%(248/291)。 見表2。

表2 CDFI檢查結果(n)

2.3CDFI聯合外周血miR-195水平檢測 miR-195+CDFI診斷下肢深靜脈血栓的靈敏度為95.85%，準確度為97.59%，均高于miR-195和CDFI單獨檢測，差異有統計學意義(P<0.05)；miR-195+CDFI診斷下肢深靜脈血栓的特異度為100.00%，與miR-195和CDFI單獨檢測比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 CDFI聯合外周血miR-195水平檢測[%(n/n)]

3 討 論

靜脈血栓是臨床上常見的血管疾病，包括深靜脈血栓形成和肺栓塞。深靜脈血栓是指深靜脈血栓形成，包括股靜脈、靜脈和肌內靜脈。根據發生部位，深靜脈血栓可分為上肢深靜脈血栓和下肢深靜脈血栓，其中下肢深靜脈血栓更常見。深靜脈血栓患者的典型臨床特征是下肢肌肉酸痛、腫脹和壓痛，但缺乏特定癥狀[5]。約50%的深靜脈血栓患者無典型的臨床表現，易導致漏診和誤診，并增加了深靜脈血栓的治療難度。此外，即使經過適當的治療，深靜脈血栓患者中仍有20%～50%發生血栓形成后綜合征，嚴重影響患者的生活質量，增加家庭的經濟負擔[6]。據估計，深靜脈血栓形成的發病率約為千分之一，每年導致的死亡超過50 000次。因此，早期準確及時地診斷深靜脈血栓對確定治療方案，延緩患者病情的進展和改善患者預后及降低患者發病率和病死率非常重要。

目前，診斷深靜脈血栓的方法較多，CDFI由于其為非侵入性檢查，而且可重復性較好，同時無電離輻射，因而表現出良好的診斷性能。通過CDFI檢查，能準確地測量患者靜脈的內徑，準確判斷患者的血栓位置、類型、大小，并可以監控患者的血流流動狀況，通過清晰的圖像協助醫生對患者的病癥做出初步診斷。在CDFI檢查中，患者的病變靜脈表現為血管壁粗糙，管腔出現擴張，內徑明顯增寬，并表現出實性回聲。部分阻塞管腔出現點狀或束狀血流信號，而完全阻塞的血管無明顯血流信號[7]。提示CDFI在診斷深靜脈血栓上具有年較大的優勢。本研究結果顯示，CDFI檢查下肢深靜脈血栓的靈敏度為82.99%，特異度為96.00%,準確度為 85.22%,表明CDFI檢查下肢深靜脈血栓靈敏度、特異度、準確度均較高，可作為下肢深靜脈血栓檢查的首選方案。

miRNA是在真核細胞中發現的內源性非編碼單鏈小分子RNA，其長度約為22個核苷酸。 miRNA主要通過與靶mRNA的3′非翻譯區(3′-UTR)結合，抑制翻譯或降解來調節轉錄后水平的基因表達。miRNA廣泛參與生理調節及各種細胞和組織中的病理過程，并涉及細胞分化、增殖、凋亡、組織和器官的發育，并與心血管病、腫瘤的發生關系密切。已有文獻顯示，miRNA與深靜脈血栓的發生、進展密切相關，可作為深靜脈血栓診斷、預后的標志物[7]。劉婧等[8]研究顯示，深靜脈血栓患者血清外周血單個核細胞中miR-374a-5p水平明顯增加，并介導炎性反應參與深靜脈血栓形成。而孔令尚等[9]研究發現，血栓組患者單個核細胞miR-483-3p表達水平較健康組明顯增加，結合D-二聚體診斷下肢深靜脈血栓，靈敏度和特異度明顯增加。而JIN等[10]研究顯示，在深靜脈血栓患者的血液中，Bcl-2是miR-195-5p的潛在靶標，并通過miR-195-5p上調抑制細胞活力，增加人臍靜脈內皮細胞凋亡。miR-195已在包括高血壓[11]、結腸癌[12]、胃癌[13]等多種疾病類型中進行了研究。但對于下肢深靜脈血栓研究較少。本研究中，觀察組治療后外周血miR-195水平較治療前明顯降低，說明患者經過治療后，炎癥水平得到有效改善。而觀察組患者治療后，外周血miR-195水平與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)，說明外周血miR-195在發病過程中發揮著重要作用，外周血miR-195可作為患者深靜脈血栓診斷和預后評估的重要指標。

研究顯示，CDFI可以提示下肢靜脈存在的自發血流頻譜信號，而急性期靜脈血栓患者的管腔呈低回聲或無回聲，且周圍型血栓在診斷中準確度較中央型相對較低，這與小腿肌間靜脈血流較慢、管腔較細小相關，難以探測出血流信號。而miRNA參與促進深靜脈血栓的進展，參與轉錄后基因調控，對機體的穩態具有一定的作用。miR-195聯合 CDFI診斷深靜脈血栓，能夠彌補單獨檢測的不足，可有效提高診斷靈敏度和準確度，減少漏診的發生。本研究結果也顯示，miR-195聯合CDFI診斷深靜脈血栓靈敏度為95.85%，準確度為97.59%，均高于miR-195和CDFI單獨檢測，說明CDFI檢測深靜脈血栓具有較高的靈敏度、特異度和準確度。而miR-195對下肢靜脈血栓的鑒別具有重要臨床意義，可作為患者深靜脈血栓診斷和預后評估的重要指標。miR-195和CDFI聯合檢測，可發揮協同作用，提高準確度，為臨床診斷和治療提供參考依據。