我國瘋牛病傳染因子研究進展

劉華陽 李祥明

（山東省飼料質量檢驗所，山東濟南250022）

1986年英國發生了瘋牛?。ㄅ：＞d狀腦?。?，瘋牛病是一種由朊蛋白感染引起的疾病，以中樞神經系統退化為主要特征,是一種慢性、致死性、傳染性、食源性的人畜共患病。瘋牛病的病原為朊病毒(prion)，因其沒有核酸，沒有病毒的形態，不是傳統意義上的病毒，而是具有傳染性的蛋白顆粒，因此也有稱其為朊蛋白或瘋牛病因子。這種病毒對各種理化因素抵抗力極強，許多足以殺死病毒及其他微生物的化學藥物或物理因素(如紫外線、λ射線)對該病毒均無效，普通的烹調溫度、冷凍和干燥等措施也無法將朊病毒殺死，138 ℃高溫維持1 h后，該病原對實驗動物仍有感染力。目前普遍認為造成瘋牛病大規模爆發的主要原因是由于牛食用了含有羊癢病朊病毒的肉骨粉所致，所以瘋牛病防控專家將牛羊源性成分視為瘋牛病傳染因子，切斷其傳播途徑，滅活傳染源，禁止在反芻動物飼料中添加反芻動物的肉骨粉，禁止動物源性成分的種內循環，是防控瘋牛病的重要手段。只有如此，才能有效規避巨大風險和損失，保護我國畜牧大產業的安全，保護養殖業的根本利益，這是各級政府相關專業主管職能部門和相關企業界的共同責任。本研究著重從防控瘋牛病采取的政策措施和對瘋牛病傳染因子的監控來分析瘋牛病防控效果、存在的問題和今后防控的關鍵。

1 我國防控瘋牛病采取的措施

自1986 年英國發生瘋牛?。ㄅ：＞d狀腦?。┮詠?，我國采取一系列措施來防控瘋牛病的發生。我國1992年6月將瘋牛病增列為《中華人民共和國進境動物一、二類傳染病、寄生蟲病名錄》中的一類傳染?。ㄒ姳?）；農業部1992 年6 月還發布《關于禁止用反芻動物源性飼料飼喂反芻動物的通知》；2001 年3 月1 日發布《關于禁止在反芻動物飼料中添加和使用動物飼料的通知》，禁止在反芻動物飼料中添加和使用肉骨粉、骨粉、肉粉、血粉、血漿粉、動物下腳料、動物脂肪、干血漿及其制品、脫水蛋白、蹄粉、角粉、雞雜碎粉、羽毛粉、油渣、魚粉、骨膠；2004 年10 月又發布施行了《動物源性飼料產品安全衛生管理辦法》（農業部第40 號令），使動物源性飼料生產、銷售、使用等諸環節更加規范；2011 年10 月新修訂的《飼料和飼料添加劑管理條例》中明確要求無論商品飼料還是養殖戶的自配料，均禁止在反芻動物飼料中添加乳和乳制品以外的動物源性成分；2012 年10 月農業部發布的《飼料生產企業許可條件》（農業部公告第1849 號）中也明確規定，其他動物的飼料生產線不能與反芻動物的飼料生產線共用，以防止交叉污染，進一步保障和防范了反芻動物飼料中使用反芻動物源性成分。

表1 我國防控瘋牛病采取的措施一覽

2 飼料中牛羊源性成分（瘋牛病傳染因子）的監控

2.1 監控的目的和意義

研究人員認為，瘋牛病及羊癢病的傳播途徑主要歸因于給牛、羊飼喂了含有羊搔癢癥因子的反芻動物蛋白所致。自20 世紀90 年代瘋牛病在英國爆發后，各國政府分別針對本國情況制定了相關的法律法規，杜絕在反芻動物飼料中添加和使用動物飼料，如英國早在1996 年就開始實行肉骨粉禁喂措施,即禁止哺乳動物蛋白飼喂一切家畜和魚，但有許多農場主在禁令頒布后仍使用了一段時間的肉骨粉。在瘋牛病流行期間，英國沒有采取措施防止肉骨粉的出口，結果在禁令頒布之后大量的肉骨粉出口到歐盟和非歐盟國家，最終導致了瘋牛病在這些國家中的流行。2000 年以來，我國雖然未發生瘋牛病疫情，但是我國動物源性飼料產品的生產、經營、進口和使用等環節仍存在不少問題，養殖戶仍然有著在自配飼料中添加魚粉、骨粉的習慣，在這些問題和習慣沒有得到根本改變之前，我國仍然存在著瘋牛病發生的傳播途徑。因此，對飼料中牛羊源性成分（瘋牛病傳染因子）進行監控，打擊在反芻動物飼料中添加牛羊源性成分的違法行為，切斷其傳播途徑，防范瘋牛病通過飼料傳播的風險，是瘋牛病防控的重要手段。

2.2 監控的區域、品種和數量

農業部從2003年開始連續15年對北京、天津、河北、山西、內蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、上海、江蘇、江西、山東、河南、湖北、湖南、廣西、重慶、四川、陜西、甘肅、青海、寧夏、新疆等23個?。ㄖ陛犑?、自治區）生產、經營、使用反芻動物飼料和動物源性飼料的企業以及牛羊養殖場（戶）的牛羊商品預混合飼料，商品精料補充料，自配飼料，進口和國產的魚粉、豬肉粉、禽肉粉、羽毛粉進行了牛羊源性成分的監控，共計監測樣品78 254批，監控區域基本涵蓋了我國的牛羊產業帶和主要牛羊產區。監控數量見表2。

表2 2003～2017年飼料中牛羊源性成分監控數量統計

表2（續） 2003～2017年飼料中牛羊源性成分監控數量統計

2.3 檢測方法

2.3.1 《進口動物源性飼料中牛羊源性成分檢測方法PCR方法》（SN/T1119—2002）

該方法的創新點是利用裂解液破碎細胞，二氯甲烷抽提蛋白質，異丙醇沉淀得到DNA；以提取的DNA為模板進行PCR擴增，瓊脂糖凝結電泳檢測PCR擴增產物應用限制性內切酶酶切反應得到確證。該方法于2002 年發布實施，用于進口動物源性飼料中牛羊源性成分的檢測，為我國進口的動物源性飼料（肉骨粉、骨粉等）瘋牛病風險評估和制定預防措施起到很重要的作用。如2004 年～2006 年進口魚粉中牛羊源性成分檢出率分別為7.28%、0.89%和1.75%。

2.3.2 《飼料中牛羊源性成分的定性檢測 定性聚合酶鏈式反應（PCR）法》（GB/T20190—2006）

該方法創新點是在SN/T1119—2002 和歐盟方法的基礎上提出，在大量實驗數據基礎上優化了DNA提取條件和PCR 反應條件，適用范圍廣，不僅適用于動物源性飼料還適用于配合和濃縮飼料。該方法于2006年發布實施，主要用于我國飼料中牛羊源性成分監控計劃的檢測，配備PCR擴增儀的機構使用。

2.3.3 《飼料中牛羊源性成分檢測 實時熒光聚合酶鏈式反應法》（NY/T1946—2010）

該方法的創新點是根據牛、羊的線粒體DNA 的D-loop區特征序列設計一對引物，同時擴增牛源性、羊源性線粒體DNA，并與標記有熒光物質的牛羊通用探針、牛探針、羊探針進行特異性結合，利用熒光信號積累實時觀察PCR的擴增曲線，從而對飼料中牛羊源性成分進行定性檢測；適用范圍更廣，適用于動物源性飼料、配合飼料、濃縮飼料、精料補充料。該方法于2010年發布實施，主要用于我國飼料中牛羊源性成分監控計劃的檢測，配備實時熒光定量PCR儀的機構使用。

2.4 組織手段

由行政管理機構和技術監測單位組成。行政管理機構由農業部和各省、直轄市、自治區飼料行政管理部門組成，技術檢測單位由國家飼料質檢中心（北京）、中國農科院飼料研究所、農業部各飼料質檢中心和省級飼料監察(檢測）所組成。2006年成立飼料監測工作小組，主要承擔數據匯總、農業部委托的技術管理等工作。

2.5 質量控制措施

由山東省飼料質量檢驗所負責制備陽性和陰性對照樣品，對承擔檢測任務的質檢機構進行檢驗能力比對考核，為確保檢測結果的準確性提供了可靠的保障。比對考核匯總見表3。

表3 2006年～2017年全國牛羊源性成分能力比對考核匯總

2.6 監控結果

2003 年～2017 年，監控區域的23 個?。▍^、市）監測結果見圖1。

按檢出率的高低可以分為三個階段。第一階段，2003年～2007年飼料中牛羊源性成分檢出率較高，在1%～15%之間，2003年檢出率最高，達到14.46%；2004年檢出率下降了四分之三，降至3.3%；2005 年～2007年波動較小且檢出率明顯降低，維持在1.5%左右。第二階段，2008年～2012年飼料中牛羊源性成分檢出率較第一階段下降明顯，維持在0.19%～1.0%之間，2008年檢出率最高，達到0.94%。第三階段，2013年～2017年飼料中牛羊源性成分檢出率極低，維持在0%～0.1%之間，2017年首次檢出率為0。

3 存在的問題

圖1 2003年～2017年飼料中牛羊源性成分監測結果統計

盡管通過15年的連續監控，牛羊源性成分（瘋牛病傳染因子）的檢出率持續下降，并且維持在很低的水平，因牛羊源性成分這個傳染途徑引發瘋牛病的風險很低，可是在日常監管、調查和抽樣中發現還存在引發瘋牛病的潛在隱患。一是動物源性飼料生產企業原料存放存在交叉污染（如牛羊骨和畜禽骨未完全分開），產品摻雜使假現象仍然存在（如在魚粉中摻加血粉、羽毛粉、肉骨粉等）。二是個別飼料生產企業在生產畜禽飼料的同時，共用一套生產線生產反芻動物飼料，存在交叉污染的可能。三是有些養殖戶在反芻動物飼料中使用動物源性飼料產品。四是抽檢樣品的數量少、覆蓋面窄。五是基層監管力量薄弱，認識和宣傳不到位。

4 結論

我國采取的一系列防控瘋牛病的措施和連續15 年對飼料中牛羊源性成分（瘋牛病傳染因子）這個傳染途徑的監控，反芻動物飼料中牛羊源性成分的檢出率維持在較低的水平，說明在反芻動物飼料中添加使用動物源性飼料的行為基本得到遏制，基本切斷了瘋牛病傳染因子這個傳播途徑。目前，我國雖然未發生瘋牛病疫情，但在國際農產品貿易中，一個國家的瘋牛病等動物流行病的風險狀況，已成為其他國家對其實施貿易壁壘的重要手段；另外，從瘋牛病的發病機理、畜牧業發展現狀以及我國畜牧國際貿易史分析，我國仍存在瘋牛病傳播的風險。切斷在反芻動物飼料中添加和使用動物源性飼料這一瘋牛病重要傳播途徑仍是今后工作的重點，關鍵是做好以下幾方面的工作：一是在監控上應擴大重點區域抽檢的覆蓋面；二是認真貫徹農業部已發布實施的《飼料生產許可條件》，嚴格按照反芻動物飼料生產企業的準入條件，建立單獨的生產線，從根源上徹底解決交叉污染問題；三是加大法律法規的宣傳力度，禁止反芻動物飼喂動物源性飼料，讓一線養殖人員能身體力行，自覺做到不在反芻動物飼料中添加魚粉和肉骨粉等動物源性飼料；四是加強基層對動物源性飼料監管的力量；五是建立一套完整的動物源性飼料安全風險分析機制。